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罗丹明标记的小鼠抗羊IgG说明书

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    产品名称 罗丹明标记的小鼠抗羊IgG说明书
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    货号 YS-D9725
    产品名称:罗丹明标记的小鼠抗羊IgG说明书

    产品细节图片1
    使用方法:
    1. 对于培养细胞样品
    (1) 融解RIPA裂解液,混匀。取适当量的裂解液,在使用前数分钟内加入PMSF (CAT:AP02L014),使PMSF的终浓度为1 mM。
    (2) 细胞裂解
    对于贴壁细胞:去除培养液,用PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍(如果血清中的蛋白没有干扰,可以不洗)。按照6孔板每孔加入150~250 μL裂解液的比例加入裂解液。用枪吹打数下,使裂解液和细胞充分接触。通常裂解液接触细胞1~2 s后,细胞就会被裂解。
    对于悬浮细胞:离心收集细胞,按照6孔板每孔细胞加入150~250 μL裂解液的比例加入裂解液,混匀,充分裂解细胞。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。如果细胞量较多,需分装成50~100万细胞/管,然后再裂解。
    (3) 充分裂解后,10000~14000 rpm离心3~5 min,取上清,即可进行后续的PAGE、Western和免疫沉淀等操作。
    2. 对于组织样品
    (1) 把组织剪切成细小的碎片;
    (2) 融解RIPA裂解液,混匀。取适当量的裂解液,在使用前数分钟内加入PMSF,使PMSF的最终浓度为1 mM;
    (3) 按照每20 mg组织加入150-250 μL裂解液的比例加入裂解液。如果裂解不充分可以适当添加更多的裂解液,如果需要高浓度的蛋白样品,可以适当减少裂解液的用量,具体RIPA裂解液的使用量参照表2。
    (4) 用玻璃匀浆器匀浆,直至充分裂解。
    (5) 充分裂解后,10000~14000rpm离心3~5 min,取上清,即可进行后续的PAGE、Western和免疫沉淀等操作。
    注意事项:
    1、本试剂为强烈型裂解液,可以提取核蛋白,但在提取核蛋白的同时,也会将基因组一并释放出来,造成细胞裂解液粘稠,此时可以直接加入蛋白上样缓冲液,煮沸再离心,离心后直接上样电泳;若想测定浓度,可入加少量SDS(1%),煮沸后离心测浓度。本系列蛋白提取试剂所提取的蛋白由于含有去污剂,所以不适合使用Bradford蛋白浓度测定试剂盒,请选择BCA法或者Lowry法检测蛋白浓度。
    2、如果需要检测和基因组结合特别紧密的蛋白,则可以通过超声处理打碎打散粘稠状物,随后离心取上清用于后续实验。
    下列是罗丹明标记的小鼠抗羊IgG说明书的相关产品:
    对照品人补体1抑制物抗体(C1INH)ELISAKit,48T/96T200mg

    对照品小鼠补体1抑制物抗体(C1INH)ELISAKit,48T/96T1ml
    对照品人补体片段3b受体(C3bR)ELISAKit,48T/96T200mg
    对照品绵羊补体片段3b受体(C3bR)ELISAKit,48T/96T3g
    对照品鸡补体3裂解产物(C3SP)ELISAKit,48T/96T200mg
    对照品人补体3裂解产物(C3SP)ELISAKit,48T/96T200mg
    对照品鸡单纯疱疹病Ⅱ型抗体(HSVⅡCLIA Kit for Interleukin 6 (IL6)
     油菜甾醇HSP90 alpha纤溶酶原激活物抑制剂1 RNA结合蛋白抗体
    大肠菌群显色培养基CLIA Kit for Galactosidase Alpha (GLa)
     阿马灵,阿义马林可溶性CD163分子
    CLIA Kit for Histone H2A (H2A)
     异山柰素BR,分子量700098%10gTLR2
    沙门氏菌显色培养基CLIA Kit for Lactoperoxidase (LPO)
     大戟因子L9BR,分子量70
    罗丹明标记的小鼠抗羊IgG说明书天质量HPLC≥98%,BRGastrodin
    吲哚醇/6-羟吲哚英文名称Indolol20mg/支
    CHOK1(仓鼠卵巢细胞亚株)东京根Rhizopustonkinensis
    隐丹参英文名称Cryptotanshinone20mg/支
    土贝母苷()质量HPLC≥98%,TubeimosideI
    隐绿原(4-酰奎宁)英文名称4-caffeoylquinicAcid20mg/支
    羧苄西林钠(标准品)13362-28-2cGMP依赖性蛋白激酶Ⅰ(PRKG1)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
    羧司坦(标准品)4

     

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    相关实验
    • 抗体选择指南

      条带。 五、 二抗的选择 二抗应选用与使用的一抗相同的物种来源,例如:如果你的一抗是小鼠的单克隆抗体,二抗则选抗小鼠的二抗anti-mouse secondary。建议检查二抗说明书确保该抗体适用于你的检测应用, 二抗一般连接荧光素FITC 或发光团。 六、双重染色抗体的选择 用未偶联一抗进行细胞培养物或组织切片的双重免疫染色要求一抗来源于不同物种并且二抗分别识别其中之一,二抗说明书应描述其与其它物种来源的免疫球蛋有否有交叉吸附。 七、荧光和化学发光标记 连接于二抗的标记

    • 流式细胞表面染色步骤

      γRⅢ/Ⅱ 结合,封闭非特异性染色,使阴性细胞的背景荧光降至未标记细胞的水平。加入 0.5-1 μg 纯的抗小鼠 CD16/32 单克隆抗体,室温孵育 10 分钟。 对于人和大鼠,可直接使用过量的,与荧光抗体相同来源和亚型的纯化 Ig 或者与目标种属相同来源的血清进行阻断,或者用商业化的 Fc 受体阻断剂。 五、细胞染色 按照说明书的推荐用量加入荧光标记抗体,混匀后置于 4℃,避光孵育 30 分钟。 加入细胞染色 buffer (或含 1%BSA 的 PBS)重悬细胞,300g 离心

    • 免疫组化中抗体选择要求

      切片中的抗原。(6)生产厂家。我的经验是国外著名抗体生产商原装抗体质量一般没问题,但有点贵;而国内分装厂家用的一抗工作液,价格便宜,但有时结果的稳定性和重复性稍差,尤其不同批次重复性较差。(7)价格与质量的矛盾。我个人认为一抗原装质量可能会好点,因为许多一抗避免反复冻融,且在稀释液中稳定性较差(若时间长),但价格较贵。2、二抗选择要点(1)种属来源。主要根据一抗种属来源来决定购买二抗来源,如一小鼠来源,那二抗就买抗小鼠的即可(羊、兔等均可)。(2)标记物的选择。有HRP、Biotin、荧光素等标记

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