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- 详细信息
- 文献和实验
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28
- 英文名:
Mouse Anti-Guinea pig IgG/PE-Cy7
- 保质期:
详见说明书
- 供应商:
上海博湖
- 保存条件:
详见说明书
- 规格:
详见说明书
公司产品仅供科研产品名称:PE-Cy7标记的小鼠抗豚鼠IgG
英文名称:Mouse Anti-Guinea pig IgG/PE-Cy7
应用: Flow-Cyt=1:100-1000;IF=1:100-1000;not yet tested in other applications.optimal dilutions/concentrations should be determined by the end user.
浓度: 2mg/1ml
蛋白分子量: 150kDa
纯化方法: affinity purified by Protein A
| 产品名称 | PE-Cy7标记的小鼠抗豚鼠IgG |
| 英文名称 | Mouse Anti-Guinea pig IgG/PE-Cy7 |
| 货号 | BH-DB8952 |
Ⅰ 实体组织蛋白的提取
1. 在每1mL 冷Lysis Buffer加入10 μL磷酸酶抑制剂, 1 μL蛋白酶抑制剂和 5μL 100mM PMSF,混匀。冰上保存数分钟待用。
2. 每100mg固体组织置于培养皿中,手术剪剪碎成3mm×3mm左右的小块,加入0.5~1 mL冷 Lysis Buffer,玻璃匀浆器上下手动匀浆15次,注意低温操作;
3. 取组织匀浆液转移到1.5mL预冷的离心管,离心10000转/分,4℃离心5 min;
4. 取上清转移至新的预冷的离心管中,即为全蛋白提取物,蛋白定量(Bradford法、BCA法);
5. 分装保存于-70℃,避免反复冻融。
Ⅱ 培养细胞蛋白提取
1. 贴壁培养的细胞,吸去培养基后,加入10mL/150mm培养板的冷PBS洗两次,每次振摇数次以尽量去除培养液;
2. 悬浮培养的细胞或用细胞刮子刮下的贴壁细胞,将细胞及培养液移至离心管中, 1000转/分离心10 min,再用10mL/150mm培养板的冷PBS,1000转/分离心5 min洗两次;
3. 在每 1mL冷 Lysis Buffer加入10μL磷酸酶抑制剂, 1μL蛋白酶抑制剂和5μL 100mM PMSF,混匀。冰上保存数分钟待用。
4. 细胞洗涤后,转至新的预冷的离心管中,加入上述配制好的冷Lysis Buffer,加入量如下表所示:
| 细胞数量 | Lysis Buffer加入量 |
| 107个 | 0.5 mL~1 mL |
| 5×106个 | 0.2 mL~0.5 mL |
6. 14,000rpm,4℃离心15min,取上清为全蛋白提取物, 蛋白定量(Bradford法、BCA法);
7. 分装保存于-70℃,避免反复冻融。
固定液的应用:
1.单纯固定液(1)4%中性甲醛固定液:zui常用的固定液,能满足常规HE及免疫组化、PCR等工作。一般无特殊要求的病理标本均适用。尤其值得注意的是,中性甲醛是以pH7 2~7 4的磷酸缓冲液为溶剂配制的,其固定效果及对组织抗原性的保存均优于一般的4%甲醛固定液。此固定液配制后应密封…
1.单纯固定液
(1)4%中性甲醛固定液:zui常用的固定液,能满足常规HE及免疫组化、PCR等工作。一般无特殊要求的病理标本均适用。尤其值得注意的是,中性甲醛是以 pH 7.2~7.4的磷酸缓冲液为溶剂配制的,其固定效果及对组织抗原性的保存均优于一般的4%甲醛固定液。此固定液配制后应密封并保存在阴凉处,保存时间不 超过一个月。
(2)乙醇固定液:使用时以80%~95%的浓度为宜,具有硬化、固定、脱水等作用,对组织渗透力较弱,因此很少单独使用,但其保存组织中的核酸强于中性甲醛,故常用于有核酸操作的实验或检查,如果用于证明尿酸结晶和保存糖原,可用100%乙醇固定组织。
(3)4%的多:主要用于培养细胞的固定。
2.混合固定液
(1)乙醇一甲醛(乙醇-福尔马林,AF)固定液:适用于皮下组织中肥大细胞的固定。该固定液有固定兼脱水作用,固定后的标本可直接入95%乙醇脱水。
(3)Bouin固定液:特别适用于睾丸活检组织的固定。Bouin液对组织固定较均匀,收缩很少,不会使组织变硬变脆。需现配现用。
(4)Carnoy固定液:穿透能力强,可很好的固定细胞质和细胞核,特别适合于固定外膜致密的组织,亦适用于糖原及尼氏小体的固定。
(5)Zenker固定液:经此液固定的标本,细胞核和细胞质染色颇为清晰,但成本较昂贵且需特殊处理汞。该固定液要避免接触阳光,以免引起化学变化而失效
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文献和实验抗[E-AB-F0997A]进行封闭:往 100 μL(细胞数1×106)细胞悬液中加入 1 μg 纯抗,室温封闭 15 min,直接加入流式抗体进行后续实验。 巨噬细胞检测应尽量避免使用含花青素的流式抗体(如 PE-Cy7),会增加非特异性染色。若为非巨噬细胞检测,使用含花青素的流式抗体(如 PE-Cy7)时也需要封闭。
FITC, FL2通道检测PE,则需将仪器的补偿设置为FL1-%FL2=1.10,FL2-%FL1=16.52.可以简单理解为:PE荧光染料的1.10%漏到FL1检测通道,需从FL1中减除,而FITC荧光染料的16.52%漏到FL2检测通道,需从FL2中减除。 常见荧光染料亮度比较 荧光染料的亮度可以用来比较不同荧光染料的荧光标记效果,通过阴性细胞群与阳性细胞群的荧光信号之间的关系来表示。但是阴性细胞群的荧光信号受到信号强度、自发荧光、非特异性染色、仪器的电子噪声等多个因素
内腔可产生高强度的磁场,足以分离磁微粒标记的细胞,无需分离柱提供提供更高强度的磁场。由于磁微粒极小,不会影响靶细胞的流式分析结果,因此不需要去除。除了现有的定型产品外,客户可选择EasySep® PE、FITC或生物素分选系统与自己的PE、FITC或生物素—偶联的单抗相结合,来富集任何所需的细胞。如果您有自己的小鼠IgG1抗任何细胞的抗体, 也可以使用“Do-It-Yourself”试剂盒做成TAC,用来分选您想要的细胞。此外,还可以根据您的特殊需要,专门为您设计定做试剂盒。用于正选小鼠的细胞标记
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