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- 联迈生物
- LM1099M
- 中国/美国/欧洲
- 2025年07月07日
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- 文献和实验
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大量
- 英文名：
T4 DNA Ligase
- 保质期：
2年
- 供应商：
上海联迈生物工程有限公司
- 保存条件：
RT
- 规格：
瓶
| [产品编号] | LM1099M |
| [CAS号] | 9015-85-4 |
| [规格] | BR |
| [包装] | 1KU/2.5KU |
| [到货期] | 2-3天 |
英文名称：T4 DNA Ligase
CAS号：9015-85-4
分子量：55.3kDa，单体
级别：BR
来源：含有T4噬菌体克隆基因30的大肠杆菌
活性定义：是指在ATP-PPi交换反应中，37℃、30分钟内将1nmol [32PPi]转换为Norit可吸收形式所需的酶量（weiss单位，1个weiss单位相当于约200个粘性末端连接单位。1个粘性末端连接单位：20ul反应体系（50mM Tris-HCL(PH7.5), 10mM DTT, 10mM MgCL2, 1mM ATP, 25ug/ml BSA, 12uM(300ug/ml)的5-DNA末端）中，在16℃、30分钟内连接50%连接HindIII酶切的Lambda DNA 产物所需的酶量）
抑制剂：当反应体系中NaC1或KC1的浓度超过200 mM时，可强烈抑制T4 DNA Ligase活性
失活：65℃加热10分钟或70℃加热5分钟
注意：T4 DNA Ligase与DNA结合会改变条带的琼脂糖凝胶电泳迁移率，为避免此现象，电泳前需处理样本或分子量标准。样本处理如下：样本与Fermentas公司6×DNA Loading Dye&SDS溶液（#R1151）混合，75℃加热5分钟或65℃加热10分钟后冰浴保存；转化时，连接产物的体积不得超过感受态细胞体积中的10%；电转化之前，先用氯仿抽提方法除去连接混合物中的T4 DNA Ligase，然后经乙醇沉淀纯化抽提产物
质量控制：测试表明无内切脱氧核糖核酸酶、核糖核酸酶、磷酸酶污染。功能检测：粘性末端或平末端DNA的连接能力
性状(以下信息仅供参考)：液体。该酶催化双链DNA或RNA中毗邻的5'磷酸基团和3'-羟基末端之间形成磷酸二酯键，还可以修复双链DNA、RNA或DNA/RNA复合体中的单链切口，连接DNA的粘性和平末端，但该酶对单链核酸无酶活性。该酶需要辅因子ATP
用途：本品仅供科研，不得用于其它用途。(以下用途仅供参考)粘性末端或平末端双链DNA的连接；双链寡核苷酸接头与双链DNA连接；双链DNA、RNA或DNA-RNA复合体中缺口的修复；连接酶介导的RNA检测；位点特异性突变；扩增片段长度多态性
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文献和实验。 由此题我发现，目的基因由两种限制酶切割，一端由EcoRI切出黏性末端，另一端由AluI切出平末端;载体质粒由两种限制酶切开，一端由EcoRI切出黏性末端，另一端由SmaI切出平末端。在构成重组 质粒时，两个黏性末端碱基互补，由DNA连接酶可以连接上磷酸二酯键，这没有疑议。但是另一端两个平末端也能由DNA连接酶连接上，并且原题中第(3)问“图1步骤③所用的DNA连接酶对所连接的DNA两端碱基序列是否有专一性要求? 。”答案为“否”。 也就是由此题我们可以得出一个结论：DNA连接
相关专题 重组DNA技术工具酶 连接酶旧称“合成酶”。DNA连接 酶是1967年在三个实验室同时发现的，最初是在大肠杆菌细胞中发现的。它是一种封闭DNA链上缺口酶，借助ATP或NAD水解提供的能量催化DNA链的5'-PO4与另一DNA链的3'-OH生成磷酸二酯键。但这两条链必须是与同一条互补链配对结合的(T4DNA连接酶除外)，而且必须是两条紧邻DNA链才能被DNA连接酶催化成磷酸二酯键。 DNA连接 酶
huahualian7 急急急问：DNA复制时连接冈崎片断的酶是聚合酶还是连接酶？ 谢谢啊！ zhujoker 聚合酶 yuxiongying DNA聚合酶1填补冈崎片段引物切除后的空隙，然后连接酶连接两个相邻的冈崎片段 本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你，都可以成为师兄的好伙伴 师兄微
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