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- 2025年07月14日
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- 详细信息
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34
- 英文名：
Rabbit Anti-pig IgG/PE-Cy5.5
- 保质期：
详见说明书
- 供应商：
上海博湖
- 保存条件：
详见说明书
- 规格：
瓶
英文名称：Rabbit Anti-pig IgG/PE-Cy5.5
应用: IF=1:100-1000;not yet tested in other applications.optimal dilutions/concentrations should be determined by the end user.
浓度: 2mg/1ml
蛋白分子量: 150kDa
纯化方法: affinity purified by Protein A
产品参数：
| 产品名称 | PE-Cy5.5标记的兔抗猪IgG |
| 英文名称 | Rabbit Anti-pig IgG/PE-Cy5.5 |
| 货号 | BH-DB8835 |
公司产品仅供科研注意事项：
1、不同细胞或组织样品所需的固定时间有所不同，应当根据细胞或组织的种类以及组织块的大小来调整固定时间。
2、虽然作用温和，但能硬化组织，固定时间过久会导致组织变脆，切片时易碎。因此固定时间通常不宜超过 24 小时。
3、醛基与抗原蛋白的氨基交联形成羧甲基，使抗原决定簇的三维构象出现空间障碍。分子间交联形成的网格结构可能部分或 完全掩盖某些抗原决定簇，使之不能充分暴露，可造成假阴性的染色，影响免疫组化结果。因此，4%固定的细胞或组织样品在进行免疫组化检测时，有时需要对抗原先进行修复，然后才能进行免疫染色等后续操作。
4、本产品对人体有害，操作时请小心，并注意有效防护以避免直接接触人体或吸入体内。
5、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作
操作步骤：
根据使用量，取每 1mL RIPA 加入 10uL PMSF，使 PMSF 的zui终浓度为 1mM。混匀备用（PMSF 现用现加）。
1、样品前处理：
a)对于贴壁细胞：去除培养液，用 PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍。按照 6 孔板每孔细胞量加入150-250 uL 裂解液的比例加入裂解液。用枪吹打数下，使裂解液和细胞充分接触。
b)对于悬浮细胞：离心收集细胞，用手指把细胞用力弹散。按照6孔板每孔细胞量加入150-250 uL 裂解液的比例加入裂解液，再用手指轻弹以充分裂解细胞。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。如果细胞量较多，必需分装成 50-100 万细胞/管，然后再裂解。
c)对于组织样品： 把组织剪切成细小的碎片。按照每 20mg 组织加入 150-250 uL 裂解液的比例加入裂解液。(如果裂解不充分可以适当添加更多的裂解液，如果需要高浓度的蛋白样品，可以适当减少裂解液的用量)。用玻璃匀浆器匀浆，直至充分裂解。
2、后处理：
将裂解后的样品 10000-14000g 离心 3-5 分钟，取上清，即可进行后续的蛋白浓度测定、SDS-PAGE、Western blotting 和免疫沉淀等操作。
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温馨提示：
公司产品仅供科研 工作液与浓缩液选择的技巧，以及各自的优势。
1，工作液的优势：工作液操作方便，降低实验操作步骤，对于要求无菌的实验，降低染菌风险。
2，浓缩液的优势：浓缩液成本相对较低，实验范围更广，对于不要求无菌的实验，可以进行多种浓度的实验分析以及比较。而且由于浓度高，保存更加稳定。
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文献和实验可以将干扰扣除，但补偿值越大，补偿后的信号分辨率会降低越厉害。最好选择很少或者没有重叠的荧光基团，以最大限度减少这种渗漏。不同激光激发的染料是首选，如PE和APC，但在某些情况下，这可能与尽量选择亮的荧光素的规则是冲突的。如在进行四色分析时，经常会将PE-Cy5标记的抗体与APC标记的抗体搭配使用。因为Cy5的激发波长与APC的激发波长相近，所以PE-Cy5与APC均可被红色激光（640nm）所激发，而两者的发送光谱也比较接近，导致PE-Cy5与APC的颜色补偿很难调整。相反，由于PE-Cy5.5中的
抗体二抗上连接有荧光染料。直接标记染色背景低，实验程序少尽量减少实验工序和过程，以保证实验的真实和准确性。因此在条件允许的范围内，建议尽量用直接标记的抗体进行实验。 3、流式抗体荧光标记的选择： 如果实验中检测单一指标：不同荧光标记在不同的仪器上强度不同。以某仪器为例：PE ＞APC ＞PE-Cy5 ＞PerCP ＞FITC ＞PerCP-Cy5.5，通常来说，PE最强，适用于弱表达抗原。FITC强度较弱，适用于强表达抗原，使用范围比较广。用户需根据检测的目标蛋白进行具体选择。 如果同时检测多个
) Propidium Iodide Staining Solution(51-66211E) 三、实验步骤贴壁细胞需用0.25%的胰酶消化。注意过度消化可损伤细胞。在消化时可加2％的BSA可防止消化过度。如果用含EDTA的胰酶消化时，注意必须彻底清除EDTA：在标记前用1×PBS或1×bindingbuffer洗涤，清除EDTA，以免残余的EDTA与Ca2＋螯合，影响Annexin V的结合。（1）用去离子水将10×Binding Buffer稀释成1×Binding
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