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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存:
49
- 英文名:
SYBRGreenI(PCR级,10000X)
- 保质期:
有效期1年
- 供应商:
上海谷研
- 保存条件:
-20℃,避光
- 规格:
支
一:用新鲜组织样品
1. 估计完全浸没样品所需要本产品的体积(1g组织需10mL)。
2. 标记收集管并加入估计所需量的本产品。
3. 以zui快速度将样品剪切成厚度小于0.5cm的碎块。
注: 鼠肝、肾和脾等小器官样品和没有蜡质保护层的植物样品可不需剪切而直接放入本产品中保存,有蜡质保护层的植物样品需要先将蜡表皮破坏。
4. 将组织碎块完全浸没于收集管的本产品中。
5. 将收集管存放于温度适当的地方,存放时间不能超过该温度下的zui长存放时间,如果要存放在-20℃或-80℃,需先将样品在 4℃放置过夜后再转移到zui后的温度。注:将样品转移到-20℃或-80℃前,需要倒弃保护液。常见存放温度与其zui长存放时间关系为如下:
6. 从存放处取出样品 (-20℃或-80℃保存的样品需先在室温下融化),用消过毒的镊子将组织碎块从保护液中取出。
7. 立即开始RNA 提取或进行其他处理 (如将样品分割成更小的碎块再重新保存等)。注:样品可以反复冻融二十次而其 RNA 质量不会受到影响。
产品名称:SYBR Green I (PCR级,10000X)
别名:SYBRGreenI(PCR级,10000X)
英文名称:SYBRGreenI(PCR级,10000X)
储存条件:-20℃,避光,有效期1年
外观(性状):液体
单位:支
规格:50/100ul保存:-20℃避光保存,有效期至少一年。产品说明:SYBRGreenI染料是一种直接与双链 DNA(dsDNA)结合的荧光染料,是荧光定量PCR最常用的DNA结合染料。在定量 PCR中,SYBRGreenI可与双链DNA(dsDNA)非特异性结合后发出荧光,则可以通过检测反应体系中的SYBRGreenI荧光强度,达到检测PCR产物扩增量的目的。游离状态下,SYBR GreenI发出微弱的荧光,一旦与dsDNA结合,其荧光增加1000倍,一个反应发出的全部荧光信号与出现的dsDNA量成比例,且会随扩增产物的增加而增加;所以通过检测PCR反应液中的荧光信号强度,可以对目的基因进行准确定量,同时还可以测定扩增的目的DNA片段的熔解温度。使用说明:使用时,配置PCR反应混合液,将10000×SYBRGreenI浓缩液加入到PCR反应体系,使终浓度为0.5× (0.2×到1×之间调整)。以上操作建议在冰上进行。注:① 反应液配制方法和PCR扩增条件请参照DNA聚合酶使用说明。② RealtimePCR扩增仪的使用方法,请参照各仪器说明书。注意事项:使用浓度对荧光PCR结果的影响SYBRGreenI的使用浓度是保证荧光定量PCR实验成功非常关键的因素。如果SYBRGreenI的浓度过低会使荧光信号的变化降低,这就意味着低拷贝的样品可能无法检出;而在高浓度时,将会抑制PCR反应,降低PCR反应效率。所以一般在使用SYBRGreenI时应根据实际情况优化使用浓度,反应的终浓度为0.2×到1×之间。镁离子浓度的影响提高镁离子浓度可以降低SYBRGreenI对PCR反应的抑制作用。我们建议在用SYBRGreenI进行荧光PCR反应时,镁离子浓度比无SYBRGreenI的普通 PCR反应高出0.5~3mM。
注意事项:
● 溶液PE 第一次使用前请按瓶上标签加入4 倍体积的无水乙醇,即15 ml 溶液PE 中加入60 ml 无水乙醇,20 ml 溶液PE 中加入80 ml 无水乙醇,使用后立即盖紧盖子。
● 本产品对电泳使用的Agarose 种类没有严格限制,可以使用普通Agarose 。为了保证回收DNA 的质量和DNA 回收效率,希望使用高纯度的Agarose ,但没有必要一定要使用低熔点的Agarose 等。
● 电泳时请使用新鲜配制的TAE 电泳缓冲液,以免影响电泳及回收效果。
● 请适当延长电泳时间,在条带分离清晰后进行切胶回收,以免回收到多余杂带。
● 为提高DNA 回收收率,切胶时应尽量除去多余的胶块。
● 本试剂盒纯化柱的DNA 吸附能力强。但如果DNA 浓度小,或DNA 初始量少,回收率将会偏低。
● 溶液Eluent(10 mM Tris-HCl, pH 8.5)中不含EDTA,其收集的DNA 片段可直接用于各种酶促反应等,不会影响后续试验。
● 为了保证回收效率,请不要使用未调整pH 值的超纯水洗脱目的片段。
● 请严格按照操作步骤操作。
操作流程:
1.根据要保存的各样本的体积,计算出所需RNAwait用量。RNAwait的用量应当是组织体积的10倍(如100mg组织约用1ml RNAwait);离心收集2×106细胞RNAwait的用量是1ml。
2. 将RNAwait按需要量分装入自备保存管中;
3. 快速将较大的组织切成厚度<0.5 cm的任意片状,立即完全浸入RNAwait中。组织的厚度一定要<0.5 cm。组织过厚则RNAwait不能有效渗入,组织中间部位的RNA不能受到保护。较小的组织(如大鼠的肾脏、脾脏,小鼠的大部分器官)取下后可以直接浸入RNAwait。
4. 保存时先将样本浸入RNAwait后置4℃冰箱过夜(4℃过夜是必需的,这样可使RNAwait完全渗入到组织中),然后转移到-20℃冰箱(RNAwait在-20℃时仍为液态,有结晶析出,是正常情况);或者在4℃冰箱过夜后,从RNAwait中取出组织块,转移到-80℃冰箱。在RNAwait中保存的标本,反复冻融至室温20次不影响RNA的质量。
以下是SYBR Green I (PCR级,10000X)的相关产品:
RCHY1 Polyclonal Antibody 种属 Bacillus│subtilis subsp. Inaquosorum英文: RCHY1 Polyclonal Antibody培养方法
ANXA5 Polyclonal Antibody 种属 Scedosporium apiospermum宿主: Rabbit培养方法
CCNG1 Polyclonal Antibody 种属 Alcaligenes│denitrificans宿主: Rabbit 模式菌株no
MYH1 Polyclonal Antibody 种属 Serratia│ureilytica英文: MYH1 Polyclonal Antibody应用领域培养基:KNO3 2g;MgSO4.7H2PO 2g;K2HPO4 0.5g;酒石酸钾钠 20g;琼脂 20g
AIMP2 Polyclonal Antibody 种属 Thiobacillus│thioparus英文: AIMP2 Polyclonal Antibody培养方法
MAPK7 Polyclonal Antibody 种属 Duganella│violacenigra英文: MAPK7 Polyclonal Antibody培养方法
TSSK3 Polyclonal Antibody 种属 Streptomyces│albidoflavus英文: TSSK3 Polyclonal Antibody应用领域产庆大霉素
UBE2Z Polyclonal Antibody 种属 Lactobacillus sp.英文: UBE2Z Polyclonal Antibody培养方法
TONSL Polyclonal Antibody 种属 Fusarium oxysporum f. sp. vasinfectum英文: TONSL Polyclonal Antibody应用领域棉花枯萎病菌
STAT4 Polyclonal Antibody 种属 Exiguobacterium│acetylicum英文: STAT4 Polyclonal Antibody培养方法
ATP7A Polyclonal Antibody 种属 Variovorax│paradoxus英文: ATP7A Polyclonal Antibody 模式菌株no
IPO9 Polyclonal Antibody 种属 Flavobacterium│columnare英文: IPO9 Polyclonal Antibody 模式菌株no
NFASC Polyclonal Antibody 种属 Eurotium│amstelodami英文: NFASC Polyclonal Antibody培养方法
ATP6AP2 Polyclonal Antibody 种属 Pestalotiopsis│longiseta英文: ATP6AP2 Polyclonal Antibody培养方法
EIF2S1 Polyclonal Antibody 种属 Acinetobacter│ursingii英文: EIF2S1 Polyclonal Antibody 模式菌株no
Phospho-FOS-T232 Polyclonal Antibody 种属 Comamonas│aquatica英文: Phospho-FOS-T232 Polyclonal Antibody 模式菌株no
SYBR Green I (PCR级,10000X)人骨桥蛋白elisa检测试剂盒
英文名称:Human Osteepontin (OPN) ELISA KIT
反应性:Human
样品类型:Serum, plasma, Cell culture supernatant
灵敏度:30 pg/ml
检测目标:Osteepontin (OPN)
应用:Sandwich ELISA
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文献和实验SYBR Green Quantitative PCR Protocol
the relative values for your gene of interest’s change in expression. SYBR qPCR Quick Protocol StandardsØ Dilute the cDNA ~4-fold (e.g. 21μl sample + 59μl H2 O = 80μl)Ø Pool an appropriate amount from each sample to create standard 1 (i.e. 30μl x
REAL TIME PCR WITH SYBR GREEN I 建议PROTOCOL
1、反应体系 25ulCocktail 20 ul: Primer FP 1 ul + Primer RP 1u + 2 * SYBR GREEN I MIX 12.5 + H2O 5.5 ul cDNA 5 ul2、Primer 浓度,需要摸索,从200nM到700nm等,设置不同浓度。3、每个引物浓度,从well 1到12设置4个样本,阳性cDNA 1和2,NTC以及H2O,做triplicate。4、若用ABI7000或7700,所有的PCR条件可设置成一致的,减少麻烦,当然,引物
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