XbaI（星选酶）

靶点星选 | 内参β-actin

靶点介绍 β-actin（β-肌动蛋白）是真核细胞中高度保守的非肌肉细胞骨架蛋白，是哺乳动物6种肌动蛋白亚型之一，由ACTB基因编码，人类该基因定位于7号染色体短臂（7p22.1）。作为细胞骨架微丝（肌动蛋白丝）的核心组成成分，β-actin通过动态聚合与解聚形成微丝网络，为细胞提供核心机械支撑，是维持细胞形态、极性及细胞间连接（如粘附连接、紧密连接）的关键分子。 β-actin参与调控的细胞生命活动贯穿细胞周期全程，在细胞运动与侵袭中，通过微丝重组介导细胞伪足形成与收缩，支撑细胞

靶点星选|全细胞内参β-Tubulin

靶点介绍 β-Tubulin是细胞内微管蛋白的核心组成部分，作为细胞骨架的关键结构蛋白，其主要功能是参与构成微管网络，为细胞提供机械支撑、维持细胞形态，并在细胞分裂、细胞内物质运输、细胞运动等过程中发挥核心作用。基于其在细胞中的广泛表达和高保守性，β-Tubulin被确立为生命科学研究中最重要的内参蛋白之一。 β-Tubulin抗体在Western Blot、免疫荧光、免疫组化等实验技术中被广泛用作内参指标。其优势在于分子量约为55kDa，与大多数目标蛋白分子量区分明显，且在所有真核细胞中均

基因克隆的流程

酶切效率。这样就可以开始设计引物：用鼠标拖选 Znf516 前 28-25 bp（可以通过页面最下面一排的标题栏选择 Sequence，这样可以看到一个个的核苷酸序列，方便拖选，而且在拖选的时候会显示多少 bp 的序列被选中，GC 比以及 Tm 值，很方便）， 一般 Tm 值为 50-60C 都是可以接受的。点击 Add primer（如图 6）。这样就跳出提示框，是需要选中序列的 Top strand（正向序列） 还是 bottom strand（反向互补序列），对于正向 / 上游引物，选择正向