XbaI（星选酶）

基因克隆的流程

酶切效率。这样就可以开始设计引物：用鼠标拖选 Znf516 前 28-25 bp（可以通过页面最下面一排的标题栏选择 Sequence，这样可以看到一个个的核苷酸序列，方便拖选，而且在拖选的时候会显示多少 bp 的序列被选中，GC 比以及 Tm 值，很方便）， 一般 Tm 值为 50-60C 都是可以接受的。点击 Add primer（如图 6）。这样就跳出提示框，是需要选中序列的 Top strand（正向序列） 还是 bottom strand（反向互补序列），对于正向 / 上游引物，选择正向

【交流】载体构建时酶切位点选择及引物设计的相关问题

我想把目的基因连接到载体上，有几个问题想请教斑竹和各位战友：1、限制性内切酶的选择：我查看论坛说选择酶切位点需要考虑酶切位点在载体上的距离、酶切温度与连接效率、价格、使用频率等等。最后我综合价格、温度、Buffer选定XbaI和EcoRI，打算购买宝生的酶，相应的Buffer用附带的10×M Buffer。不知道我选择的酶切位点合适不合适呢？2、引物设计：引物结构为：保护碱基＋酶切位点＋目的基因末端上游引物5’－CCG TCTAGA ATGGCTTCGTACCCCTGC-3'下游引物5’－

成功进行双酶切实验之实战手册

的关键： · 载体DNA的质量 · PCR产物的完全酶切 1. 保证完全酶切: · 记住,当你设计一个酶切时，你的限制性内切酶的用量是与DNA分子的大小，以及DNA量是密切相关的。 而且根据每种酶的单位定义，所需的限制性内切酶的量是可以精确计算的。 因而请不要简单的套用酶说明书中的“通用酶切方案“，那个通用酶切方案是很多克隆失败 的原因。 - 在实际工作中，完全酶切同一种DNA分子，不同的酶所需的酶量可能