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- 2025年12月15日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
53
- 英文名：
SYBRGreenIIRNA
- 保质期：
有效期2年
- 供应商：
上海谷研
- 保存条件：
-20°C
- 规格：
支
原则：不与DNA反应，对其无影响。
1.纯乙醇（二倍体积比）；效率高，需要放置的时间短，在公司用Kit提取的时候，没有放置直接进行下一步；确定是价格相对昂贵。
2.95%乙醇，价格相对于纯乙醇便宜，但是会损失DNA；
3.异丙醇（0.6倍体积）；
（1）普通细胞上清液体，静止15-30min即可沉淀；
（2）对于含量低，或者组织（比如我现在经常提取的小鼠的肝脏中的Total和cccDNA），则最好在-20℃放置2h或者以上，
本人提取肝脏组织DNA时候，最长时间放置了三天，对结果并无影响；上周提取细胞中cccDNA的时候，室温放置了15min，结果提出的DNA含量也挺高的，而且之后的Southern结果也很成功。我猜测可能是含量高，所以时间短点也可以，但是如果时间不是很着急，还是按照规定的时间来做比较保险。
产品名称：SYBR Green II RNA
别名:SYBRGreenIIRNA
英文名称:SYBRGreenIIRNA
储存条件:-20°C,有效期2年
单位:支
l AnalyzesmallaliquotsfromRNApreparationsbeforeNorthernblotting,start-sitemappingorcDNApreparationl Visualizethemigrationbehaviorof5SrRNAspeciesafterhigh-resolutiondenaturinggradientelectrophoresis(DGGE)l StainDNAinsingle-strandconformationpolymorphism(SSCP)l StainDNAbeforeamplificationbyPCRMaterialsContentsSYBRGreenIIstainisprovidedasa10,000XconcentrateinDMSOinthefollowingsizes:l 50μL(SY1040-50)l 500μL(SY1040-500)StorageUponreceipt,storethedyefrozenat-20°C,protectedfromlightinadesiccator.Whenstoredproperly,theSYBRGreenIIstainstocksolutioninDMSOisstableforsixmonthstooneyear.注：SYBRGreenII主要用于RNA和单链DNA电泳。是EB的替代品，无致癌性，超敏感性。用作常规电泳时，须将商品化的核酸MARKER作一定倍数的稀释（1/5-1/10），这样才能得到比较理想的结果。
作用及原理：
⒈溶液I—溶菌液：
溶菌酶：它是糖苷水解酶，能水解菌体细胞壁的主要化学成分肽聚糖中的β-1,4糖苷键，因而具有溶菌的作用。当溶液中pH小于8时，溶菌酶作用受到抑制。
葡萄糖：增加溶液的粘度，维持渗透压，防止DNA受机械剪切力作用而降解。
EDTA：（1）螯合Mg2＋、Ca2＋等金属离子，抑制脱氧核糖核酸酶对DNA的降解作用（DNase作用时需要一定的金属离子作辅基）;（2）EDTA的存在，有利于溶菌酶的作用，因为溶菌酶的反应要求有较低的离子强度的环境。
⒉溶液II－NaOH－SDS液：
NaOH：核酸在pH大于5，小于9的溶液中，是稳定的。
但当pH＞12或pH＜3时，就会引起双链之间氢键的解离而变性。
SYBR Green II RNA在溶液II中的NaOH浓度为0.2mo1／L，加抽提液时，该系统的pH就高达12.6，因而促使染色体DNA与质粒DNA的变性。
SDS：SDS是离子型表面活性剂。它主要功能有：
（1）溶解细胞膜上的脂质与蛋白，因而溶解膜蛋白而破坏细胞膜。
（2）解聚细胞中的核蛋白。
（3）SDS能与蛋白质结合成为R-O-SO3-…R＋-蛋白质的复合物，使蛋白质变性而沉淀下来。但是SDS能抑制核糖核酸酶的作用，所以在以后的提取过程中，必须把它去除干净，防止在下一步操作中（用RNase去除RNA时）受到干扰。
根据不同浓度的氯化钠溶液对DNA和蛋白质的溶解度不同原理，可以在提取不同类型DNA使用中加以利用。
1.Nacl是常用的盐析材料之一，盐析即在高浓度Nacl溶液中，蛋白质析出的现象。原理如下
（1）Nacl溶液与蛋白质争夺水分子，破坏蛋白质胶体颗粒表面的水膜；
（2）Nacl溶液大量中和蛋白质颗粒上的电荷，从而使水中蛋白质颗粒积聚而沉淀析出；
2.不同浓度下DNA分子构象（三维结构）不同，不同的构象溶解度也不同。
（1）当NaCl溶液的浓度为0.14mol/L时，DNA溶解度最小，因此改变NaCl溶液的浓度既能使DNA溶解也能使其析出；
（2）DNA在不同浓度的氯化钠溶液中随着氯化钠的浓度不断升高；
3.所以可以使用适当的高浓度Nacl溶液，使得蛋白质析出，而DNA溶解度较大，通过高速离心，取上清并去除沉淀，进而去除蛋白质。
以下是公司正在热销的产品：
BAIAP2 Polyclonal Antibody 种属 Paracoccus│seriniphilus英文: BAIAP2 Polyclonal Antibody 模式菌株no
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SYBR Green II RNA人基质金属蛋白酶9elisa检测试剂盒
英文名称:Human MMP-9 ELISA KIT
反应性:Human
样品类型:Serum, plasma, Cell culture supernatant
灵敏度:30 pg/ml
检测目标:MMP-9
应用:Sandwich ELISA
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文献和实验SYBR Green Quantitative PCR Protocol
12μl of master mix for each well, plus some excess1 Rxn: 10μl SYBR Green Mix 52 Rxn: 520μl SYBR 0.4μl Forward Primer (10μM stock) 20.8μl F
REAL TIME PCR WITH SYBR GREEN I 建议PROTOCOL
1、反应体系 25ulCocktail 20 ul: Primer FP 1 ul + Primer RP 1u + 2 * SYBR GREEN I MIX 12.5 + H2O 5.5 ul cDNA 5 ul2、Primer 浓度，需要摸索，从200nM到700nm等，设置不同浓度。3、每个引物浓度，从well 1到12设置4个样本，阳性cDNA 1和2，NTC以及H2O，做triplicate。4、若用ABI7000或7700，所有的PCR条件可设置成一致的，减少麻烦，当然，引物
曲线分析. 依据PDs 和扩增产物的熔解温度( Tm) 特点,在通用的三步法的延伸步骤之后,增加一个短暂的(5 s) 恒温和荧光检测步骤,使这个步骤的温度高于PDs 的Tm ,但低于扩增产物的Tm ,简称该法为四步法. PDs 的Tm 通常高于72 ℃,但低于扩增产物的Tm . 将四步法第四步的温度设置在高于PDs 的Tm ,但低于扩增产物的Tm 时,四步法能够有效地消除PDs 的影响. 对三步法和四步法SYBR green Ⅰ实时定量RT-PCR 进行了比较,发现三步法根本不能用于RNA 的实时定量,而四
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