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上海谷研
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瓶
单位:瓶
GST融合蛋白纯化磁珠是专为高效、快速纯化谷胱甘肽S-转移酶(GST)融合蛋白而设计的一种新型功能化材料,可通过磁性分离方式直接从生物样品中一步纯化出高纯度的目标蛋白,极大地简化纯化工艺和提高纯化效率,适合科研和工业领域便捷地进行GST融合蛋白的纯化。与传统的柱层析纯化方式相比,采用磁珠纯化GST融合蛋白,无需对粗蛋白样品进行多次长时间的高速离心,也不需要过滤操作;无需控制流速,更不需要昂贵的层析设备。样品与磁珠的特异性结合、洗涤和目标蛋白洗脱变得非常简单、快速、易操作,不存在样品流速控制的瓶颈,对于熟练的操作者来说,在一个小时内就能获得高纯度的目的蛋白,不仅为研究者简化了流程,节省了时间,降低了成本,并可提高目标蛋白的纯化效率。使用磁珠能轻松实现多样品平行处理,实现高通量,也可任意放大样品纯化规模。应用实例1.磁珠与传统层析柱纯化GST融合蛋白对比注:图中2%、5%、10%、20%和100%指的是分别用谷胱甘肽含量为0.2mM、0.5mM、1mM和10mM的缓冲液对吸附目标蛋白后的磁珠进行洗脱。2.平行操作稳定性高,可方便实现高通量和大规模蛋白纯化结果:CV(目标蛋白纯度)=1.6%,CV(目标蛋白载量)=4.5%。此外,放大规模纯化样品时,只需同比例增加磁珠用量即可,并不影响目标蛋白的产率和纯度,完全不存在流速和样品体积的限制,更加适用于大规模蛋白纯化生产。 3.不同批次间产品使用性能稳定,批次间差异小结果:CV(目标蛋白纯度)=0.7%,CV(目标蛋白载量)=4.7% 产品特性1.蛋白纯化快捷· 操作简单,一步纯化即可得到高纯度蛋白;· 方便快捷,一个小时轻松实现蛋白纯化。2.蛋白纯化灵活· 可同时处理多个样品,实现高通量;· 可轻松实现蛋白浓度和体积的控制,方便后续样品精制;· 可轻松实现对纯化规模的控制;· 对微量和低丰度样品具有良好的纯化效果。3.蛋白纯化经济· 纯化流程短,蛋白产量及活性高;· 设备简单,减少了设备购买及维护成本,蛋白纯化门槛大大降低;· 纯化时间短,节约了时间成本;· 可同时进行多样品处理,实现自动化操作,节约人工成本;能够重复使用。
使用方法:
一:用新鲜组织样品
1. 估计完全浸没样品所需要本产品的体积(1g组织需10mL)。
2. 标记收集管并加入估计所需量的本产品。
3. 以zui快速度将样品剪切成厚度小于0.5cm的碎块。
注: 鼠肝、肾和脾等小器官样品和没有蜡质保护层的植物样品可不需剪切而直接放入本产品中保存,有蜡质保护层的植物样品需要先将蜡表皮破坏。
4. 将组织碎块完全浸没于收集管的本产品中。
5. 将收集管存放于温度适当的地方,存放时间不能超过该温度下的zui长存放时间,如果要存放在-20℃或-80℃,需先将样品在 4℃放置过夜后再转移到zui后的温度。注:将样品转移到-20℃或-80℃前,需要倒弃保护液。常见存放温度与其zui长存放时间关系为如下:
6. 从存放处取出样品 (-20℃或-80℃保存的样品需先在室温下融化),用消过毒的镊子将组织碎块从保护液中取出。
7. 立即开始RNA 提取或进行其他处理 (如将样品分割成更小的碎块再重新保存等)。注:样品可以反复冻融二十次而其 RNA 质量不会受到影响。
操作流程:
1.根据要保存的各样本的体积,计算出所需RNAwait用量。RNAwait的用量应当是组织体积的10倍(如100mg组织约用1ml RNAwait);离心收集2×106细胞RNAwait的用量是1ml。
2. 将RNAwait按需要量分装入自备保存管中;
3. 快速将较大的组织切成厚度<0.5 cm的任意片状,立即完全浸入RNAwait中。组织的厚度一定要<0.5 cm。组织过厚则RNAwait不能有效渗入,组织中间部位的RNA不能受到保护。较小的组织(如大鼠的肾脏、脾脏,小鼠的大部分器官)取下后可以直接浸入RNAwait。
4. 保存时先将样本浸入RNAwait后置4℃冰箱过夜(4℃过夜是必需的,这样可使RNAwait完全渗入到组织中),然后转移到-20℃冰箱(RNAwait在-20℃时仍为液态,有结晶析出,是正常情况);或者在4℃冰箱过夜后,从RNAwait中取出组织块,转移到-80℃冰箱。在RNAwait中保存的标本,反复冻融至室温20次不影响RNA的质量。
以下是GST融合蛋白纯化磁珠的相关产品:
产芽孢肉汤特价英文:Sporulation Broth 产品规格:250g 产品用途:用于产气荚膜梭菌的产芽孢培养(SN标准)
亚硫酸盐-多粘菌素-磺胺嘧啶琼脂基础价格英文:Sulfite-Polymyxin-Sulphadiazine Agar Base 产品规格:250g 产品用途:用于产气荚膜梭菌的平板计数(GB标准)
多粘菌素B(1.2mg)说明书英文:Polymyxin B 产品规格:1.2mg/支*5 产品用途:每支添加于100mlSPS中
多价蛋白胨-酵母膏(PY)培养基说明书英文:Poly Peptone Yeast Extract Medium 产品规格:250g 产品用途:用于产气荚膜梭菌的培养(SN标准)
疱肉培养基基础价格英文:Cooked Meat Medium Base 产品规格:250g 产品用途:加入牛肉粒,用于肉毒梭菌及厌氧梭状芽孢杆菌的检验(GB标准)
疱肉牛肉粒价格英文:Dried Meat Particle 产品规格:100g 产品用途:加入疱肉基础中,配成疱肉培养基
液体硫乙醇酸盐培养基价格英文:Thiolglycollate Medium 产品规格:250g 产品用途:用于产气荚膜梭菌确证试验的细菌培养(GB.SN标准)
卵黄琼脂培养基基础价格英文:Egg Yolk Agar Base 产品规格:250g 产品用途:用于肉毒梭菌、产气荚膜梭菌的分离培养(GB标准)
动力-硝酸盐培养基说明书英文:Power - nitrate medium 产品规格:250g 产品用途:用于产气荚膜梭菌的动力试验
含铁牛奶培养基说明书英文:Iron milk medium 产品规格:250g 产品用途:用于产气荚膜梭菌的牛奶发酵试验
梭菌鉴别琼脂(DCA)特价英文:Differentia Clostridial Agar 产品规格:250g 产品用途:用于干燥食品亚硫酸盐还原梭菌的计数和培养
GST融合蛋白纯化磁珠兔神经营养因子3酶联免疫试剂盒
英文名称:Rabbit NT-3 ELISA Kit
反应性:Rabbit
样品类型:Serum, plasma, Cell culture supernatant
检测范围:250-16000 pg/ml
灵敏度:10 pg/ml
检测目标:NT-3
应用:Sandwich ELISA
注意事项:
● 溶液PE 第一次使用前请按瓶上标签加入4 倍体积的无水乙醇,即15 ml 溶液PE 中加入60 ml 无水乙醇,20 ml 溶液PE 中加入80 ml 无水乙醇,使用后立即盖紧盖子。
● 本产品对电泳使用的Agarose 种类没有严格限制,可以使用普通Agarose 。为了保证回收DNA 的质量和DNA 回收效率,希望使用高纯度的Agarose ,但没有必要一定要使用低熔点的Agarose 等。
● 电泳时请使用新鲜配制的TAE 电泳缓冲液,以免影响电泳及回收效果。
● 请适当延长电泳时间,在条带分离清晰后进行切胶回收,以免回收到多余杂带。
● 为提高DNA 回收收率,切胶时应尽量除去多余的胶块。
● 本试剂盒纯化柱的DNA 吸附能力强。但如果DNA 浓度小,或DNA 初始量少,回收率将会偏低。
● 溶液Eluent(10 mM Tris-HCl, pH 8.5)中不含EDTA,其收集的DNA 片段可直接用于各种酶促反应等,不会影响后续试验。
● 为了保证回收效率,请不要使用未调整pH 值的超纯水洗脱目的片段。
● 请严格按照操作步骤操作。
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文献和实验GST Protein Prep.Ver.21)Grow 50ml of culture in LB or TB +antibiotic o/n at 37℃ shaker.2)Dilute culture in LB or TB +antibiotic 1:103)Grow 3hrs at 37℃.4)Induce culture by adding 0.4 mM IPTG final concentration.(For 50 ml final culture add 20 μl
GST fusion protein purification GST融合蛋白纯化
1)grow 20ml cells O/N37℃ dilute 50X into prewarmed LB,grow to 0.6 OD or about 1hr.Induce w/ 2mM IPTG (238mg/0.5l),grow 3hr,spin 6k GS3 10',freeze at 70℃2)extract cells (from 500ml)in 25 mls.Heintz Buffer plus triton (HBT)by gentle pipette
GST fusion protein purification--GST融合蛋白纯化
GST fusion protein purification GST融合蛋白纯化John Mundy,Institute of Molecular Biology,Copenhagen,Denmark1)grow 20ml cells O/N37℃ dilute 50X into prewarmed LB,grow to 0.6 OD or about1hr.Induce w/ 2mM IPTG (238mg/0.5l),grow 3hr,spin 6k GS3 10',freeze
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