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- 2025年10月27日
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深圳子科生物科技有限公司
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文献和实验cDNA文库组标准流程八:pBlueScript cDNA库扩增
2 ．步骤 1．将cDNA文库转入大肠杆菌，如DH5a(DH10B) 后，取少量菌液涂布氨苄平板，以推算克隆总量。 2．取一大小合适的三角瓶,根据克隆总量配制2 x LB液体，每500ml 2 x LB液体可扩增5x105个克隆，可以适当增加2 x LB液体的量，但不能少于此比例 3．按每100ml加0.3g的比例在2 x LB液体中加入SeaPrep agarose 4．70℃加热搅拌至琼脂糖溶解,高压灭菌后再70℃搅拌30分钟. 5．37℃放置1小时
2.5×1010个细胞/ml）。分装，-80℃或液氮保存待用。 2、病毒骨架质粒转化大肠杆菌，扩增，纯化。 3、将1-5ul （约1ug） 线性化的穿梭质粒及1ul（约100ng/ul）病毒骨架质粒（如pAdEasy-1）加入至含约40ul BJ5183电转感受态的EP管中混匀，冰上冷却。 4、将混合物加入电转杯，电击（1250-1500V/mm,5ms）。 5、电击结束取出样品，加入1ml SOC或LB培养液，37℃低速振荡40min。 6、取适当体积的电击转化细胞液涂于数个卡那霉素抗性平板
沉淀加入750μl预冷的（4℃）75mmol/L CaCL2 溶液，轻轻吹打菌悬液，放冰浴30min。 5．4℃3000rpm/min,离心5min，弃上清。 6．菌体沉淀加入200微升预冷的75mmol/LCaCL2溶液，冰浴4min以上。4℃保存备用。 （二）质粒转化 【材料】 1．pBR322 质粒DNA, 2．感受态菌75mmol CaCl2 3．LB肉汤培养基，无药LB琼脂平板，氨苄青霉素琼脂平板（50ug/ml） 4．
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