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- 2025年07月13日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
52
- 英文名：
Neutral balsam
- 保质期：
详见说明书
- 供应商：
上海博湖
- 保存条件：
RT
- 规格：
瓶
有效期 2年
级别 FMP grade
别名 中性树脂
| 产品名称 | 中性树胶 |
| 英文名称 | Neutral balsam |
| 货号 | BH-DB6646 |
CAS 96949-21-2
储存条件 RT
外观（性状） 无色粘稠液体
单位 瓶
显微技术上使用的优良封藏剂，与加拿大树胶性质相似，用途相同，效果较好。中性树胶与加拿大树胶相同，是一种天然树脂，经提炼与中和后溶解在透明剂中成60%溶液，折光率与玻璃近似，干燥后凝结成透明无色的固体，没有收缩变黄、纹裂的弊病，没有像加拿大树胶有年久变黄切片氧化退色等缺点。切片标本有苏、曙红、番红、固绿、洋红染色的，保藏数年颜色无变化。许多整装标本如吸血虫、涤虫等寄生虫，用中性树胶封固，均能取得优良效果。
目前中性树胶广泛使用在生物学，医学作为生物切片封藏剂，以及光学琉璃仪器的粘固剂。
操作步骤：
Ⅰ 实体组织蛋白的提取
1． 在每1mL 冷Lysis Buffer加入10 μL磷酸酶抑制剂， 1 μL蛋白酶抑制剂和 5μL 100mM PMSF，混匀。冰上保存数分钟待用。
2． 每100mg固体组织置于培养皿中，手术剪剪碎成3mm×3mm左右的小块，加入0.5～1 mL冷 Lysis Buffer，玻璃匀浆器上下手动匀浆15次，注意低温操作；
3． 取组织匀浆液转移到1.5mL预冷的离心管，离心10000转/分，4℃离心5 min；
4． 取上清转移至新的预冷的离心管中，即为全蛋白提取物，蛋白定量（Bradford法、BCA法）；
5． 分装保存于-70℃,避免反复冻融。
Ⅱ 培养细胞蛋白提取
1． 贴壁培养的细胞，吸去培养基后，加入10mL/150mm培养板的冷PBS洗两次，每次振摇数次以尽量去除培养液；
2． 悬浮培养的细胞或用细胞刮子刮下的贴壁细胞，将细胞及培养液移至离心管中， 1000转/分离心10 min，再用10mL/150mm培养板的冷PBS，1000转/分离心5 min洗两次；
3． 在每 1mL冷 Lysis Buffer加入10μL磷酸酶抑制剂， 1μL蛋白酶抑制剂和5μL 100mM PMSF，混匀。冰上保存数分钟待用。
4． 细胞洗涤后，转至新的预冷的离心管中，加入上述配制好的冷Lysis Buffer，加入量如下表所示：
| 细胞数量 | Lysis Buffer加入量 |
| 107个 | 0.5 mL～1 mL |
| 5×106个 | 0.2 mL～0.5 mL |
6． 14,000rpm，4℃离心15min，取上清为全蛋白提取物, 蛋白定量（Bradford法、BCA法）；
7． 分装保存于-70℃,避免反复冻融。
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固定液的应用：
1．单纯固定液(1)4％中性甲醛固定液：zui常用的固定液，能满足常规HE及免疫组化、PCR等工作。一般无特殊要求的病理标本均适用。尤其值得注意的是，中性甲醛是以pH7 2～7 4的磷酸缓冲液为溶剂配制的，其固定效果及对组织抗原性的保存均优于一般的4％甲醛固定液。此固定液配制后应密封…
1．单纯固定液
(1)4％中性甲醛固定液：zui常用的固定液，能满足常规HE及免疫组化、PCR等工作。一般无特殊要求的病理标本均适用。尤其值得注意的是，中性甲醛是以 pH 7.2～7.4的磷酸缓冲液为溶剂配制的，其固定效果及对组织抗原性的保存均优于一般的4％甲醛固定液。此固定液配制后应密封并保存在阴凉处，保存时间不 超过一个月。
(2)乙醇固定液：使用时以80％～95％的浓度为宜，具有硬化、固定、脱水等作用，对组织渗透力较弱，因此很少单独使用，但其保存组织中的核酸强于中性甲醛，故常用于有核酸操作的实验或检查，如果用于证明尿酸结晶和保存糖原，可用100%乙醇固定组织。
(3)4％的多：主要用于培养细胞的固定。
2．混合固定液
(1)乙醇一甲醛(乙醇－福尔马林，AF)固定液：适用于皮下组织中肥大细胞的固定。该固定液有固定兼脱水作用，固定后的标本可直接入95％乙醇脱水。
(3)Bouin固定液：特别适用于睾丸活检组织的固定。Bouin液对组织固定较均匀，收缩很少，不会使组织变硬变脆。需现配现用。
(4)Carnoy固定液：穿透能力强，可很好的固定细胞质和细胞核，特别适合于固定外膜致密的组织，亦适用于糖原及尼氏小体的固定。
(5)Zenker固定液：经此液固定的标本，细胞核和细胞质染色颇为清晰，但成本较昂贵且需特殊处理汞。该固定液要避免接触阳光，以免引起化学变化而失效
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文献和实验要控制好，切勿显色过深。用自来水冲洗切片终止显色。 Harris 苏木素复染，一般 30 s-1 min 左右，水洗后用 1% 的盐酸酒精分化，再用自来水冲洗返蓝。（染核，可选） 脱水固定封片 将切片置于水中冲洗后，将切片依次放入：70%酒精-80%酒精-90%酒精-95%酒精-无水乙醇Ⅰ-无水乙醇Ⅱ-二甲苯Ⅰ-二甲苯Ⅱ中脱水透明，每个试剂中放置 2 min，最后在通风橱中风干切片。 将中性树胶滴在组织旁边，再用盖玻片盖上。先放平一侧，然后轻轻放下另一侧，以免产生气泡，封好的切片平躺置于通风
封固切片的介质需根据多种因素而定。常用的有两类： 1．含水封固剂：如甘油，甘油明胶和 Apath糖浆等，用于未染色的材料，脂肪染色，异染染色等。 如：甘油明胶常用于脂肪染色的冰冻切片 Apath糖浆则用于证明淀粉样变的结晶染色法中。 此类封固剂使用方便，组织切片不必经过脱水、透明等步骤即可封固。但切片仍可以久存。 2．无水封固剂：如中性树胶，大马树脂及人工树脂等。用于石蜡，冰冻
4℃固定3～6小时。 2．直接转入95％乙醇脱水和无水乙醇脱水，二甲苯透明，石蜡包埋。 3．切片经二甲苯脱蜡，梯度乙醇水化至蒸馏水。 4．置染色液中室温下染片约1h。 5．取出切片，不经水洗，用滤纸吸干多余染液。 6．插入丙酮中迅速分化。 7．转入丙酮二甲苯（1：1）稍洗。 8．二甲苯透明2～3次。 9．中性树胶封固。
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