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- 2025年07月16日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
23
- 英文名：
ECL Western Blotting Substrate
- 保质期：
详见说明书
- 供应商：
上海博湖
- 保存条件：
2-8℃，避光，有效期1年
- 规格：
瓶
产品名称：ECL Plus超敏发光液
别名 ECL超敏发光液 ECL发光液
英文名称 ECL Western Blotting Substrate
储存条件 2-8℃，避光，有效期1年
单位 瓶
ECL Plus 超敏发光液直接或间接检测与辣根过氧化物酶HRP 关联的蛋白或核酸底物。这一独特的发光底物系统是目前最灵敏的商业化荧光ECL检测试剂，具有极高灵敏度和高信噪比，发光迅速，荧光可使X 感光胶片感光达12小时以上，特别适用于痕量蛋白或核酸检测。同时该试剂允许使用更高的抗体稀释倍数（1：2000-1：10000），极其节省抗体。
的ECL Plus级发光液，是一种可广泛应用于免疫学实验的化学发光试剂。实验效果优于市面上某知名品牌的超敏级发光液。
ECL Plus超敏发光液与辣根过氧化物酶进行反应，产生荧光，可以通过胶片和相对应的仪器进行信号收集。
ECL Plus灵敏度极高，是市面上普通DAB的1000倍以上，在western实验中，HRP标记的抗体（1mg/ml）能达到10万级稀释，是某品牌的2-5倍左右。极高的灵敏度可以让及大幅度的节省抗体成为可能，在这种情况下需要降低一抗或者二抗的稀释度，避免得到的是过暗的条带，难以比较。
| 产品名称 | ECL Plus超敏发光液 |
| 英文名称 | ECL Western Blotting Substrate |
| 货号 | BH-DB6577 |
Ⅰ 实体组织蛋白的提取
1． 在每1mL 冷Lysis Buffer加入10 μL磷酸酶抑制剂， 1 μL蛋白酶抑制剂和 5μL 100mM PMSF，混匀。冰上保存数分钟待用。
2． 每100mg固体组织置于培养皿中，手术剪剪碎成3mm×3mm左右的小块，加入0.5～1 mL冷 Lysis Buffer，玻璃匀浆器上下手动匀浆15次，注意低温操作；
3． 取组织匀浆液转移到1.5mL预冷的离心管，离心10000转/分，4℃离心5 min；
4． 取上清转移至新的预冷的离心管中，即为全蛋白提取物，蛋白定量（Bradford法、BCA法）；
5． 分装保存于-70℃,避免反复冻融。
Ⅱ 培养细胞蛋白提取
1． 贴壁培养的细胞，吸去培养基后，加入10mL/150mm培养板的冷PBS洗两次，每次振摇数次以尽量去除培养液；
2． 悬浮培养的细胞或用细胞刮子刮下的贴壁细胞，将细胞及培养液移至离心管中， 1000转/分离心10 min，再用10mL/150mm培养板的冷PBS，1000转/分离心5 min洗两次；
3． 在每 1mL冷 Lysis Buffer加入10μL磷酸酶抑制剂， 1μL蛋白酶抑制剂和5μL 100mM PMSF，混匀。冰上保存数分钟待用。
4． 细胞洗涤后，转至新的预冷的离心管中，加入上述配制好的冷Lysis Buffer，加入量如下表所示：
| 细胞数量 | Lysis Buffer加入量 |
| 107个 | 0.5 mL～1 mL |
| 5×106个 | 0.2 mL～0.5 mL |
6． 14,000rpm，4℃离心15min，取上清为全蛋白提取物, 蛋白定量（Bradford法、BCA法）；
7． 分装保存于-70℃,避免反复冻融。
固定液的应用：
1．单纯固定液(1)4％中性甲醛固定液：zui常用的固定液，能满足常规HE及免疫组化、PCR等工作。一般无特殊要求的病理标本均适用。尤其值得注意的是，中性甲醛是以pH7 2～7 4的磷酸缓冲液为溶剂配制的，其固定效果及对组织抗原性的保存均优于一般的4％甲醛固定液。此固定液配制后应密封…
1．单纯固定液
(1)4％中性甲醛固定液：zui常用的固定液，能满足常规HE及免疫组化、PCR等工作。一般无特殊要求的病理标本均适用。尤其值得注意的是，中性甲醛是以 pH 7.2～7.4的磷酸缓冲液为溶剂配制的，其固定效果及对组织抗原性的保存均优于一般的4％甲醛固定液。此固定液配制后应密封并保存在阴凉处，保存时间不 超过一个月。
(2)乙醇固定液：使用时以80％～95％的浓度为宜，具有硬化、固定、脱水等作用，对组织渗透力较弱，因此很少单独使用，但其保存组织中的核酸强于中性甲醛，故常用于有核酸操作的实验或检查，如果用于证明尿酸结晶和保存糖原，可用100%乙醇固定组织。
(3)4％的多：主要用于培养细胞的固定。
2．混合固定液
(1)乙醇一甲醛(乙醇－福尔马林，AF)固定液：适用于皮下组织中肥大细胞的固定。该固定液有固定兼脱水作用，固定后的标本可直接入95％乙醇脱水。
(3)Bouin固定液：特别适用于睾丸活检组织的固定。Bouin液对组织固定较均匀，收缩很少，不会使组织变硬变脆。需现配现用。
(4)Carnoy固定液：穿透能力强，可很好的固定细胞质和细胞核，特别适合于固定外膜致密的组织，亦适用于糖原及尼氏小体的固定。
(5)Zenker固定液：经此液固定的标本，细胞核和细胞质染色颇为清晰，但成本较昂贵且需特殊处理汞。该固定液要避免接触阳光，以免引起化学变化而失效
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文献和实验(All steps with agitation, unless done O/N at 4℃)►Rinse membrane once in TBS-T►Block the membrane with TBS-T/ 5% milk (or HIHS) for 30 min room►temp (can be left at 4℃ O/N here)►Rinse membrane briefly 2X with TBS-T and then once for 10 min with TBS
Ⅳ型超敏反应机制 经典的迟发型超敏反应可由结核杆菌皮内注射而诱发。如果宿主曾经接触过结核杆菌，就会在24-72h后出现一个由T细胞介导的局部炎症反应。抗原接种大约4h之后，中性粒细胞在注射部位开始迅速聚集，血管内皮细胞也显示出一系列的形态和功能变化，包括生物合成的增加，细胞器合成的加速，并且发生血浆大分子的渗漏。血纤蛋白原(hbrin。gen)从血液渗透进入周围组织。纤维沉积和部分T细胞及单核细胞聚集，使注射部位的血管外组织形成肿胀和硬结。作为DTH的一个
Western blotting using ECL reagent
REAGENTSECL Western blotting kit (Amersham Life Science; cat# RPN2108): contains second antibodies for both mouse and rabbit, substrate and milk blocker (the milk blocker is not normally used when using ruminant samples).Hybond ECL nitrocellulose
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