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文献和实验真香!用 qPCR 做外泌体研究,南京医科大学拿下 41 分 SCI
qPCR 检测后进行功能评估。本研究对血浆外泌体 circLPAR1 可作为 CRC 高灵敏早期诊断标志物提供了新的证据。 qPCR 检测外泌体是强强联手还是无稽之谈? 我们也许会有疑问:外泌体本来就少,提取的 RNA 就更少,后续做 qPCR 检测岂不是难上加难?想知道 qPCR 检测外泌体是否具有合理性,我们需要先了解如何进行这项实验。 实验过程: 1)外泌体提取 包括 Umibio 在内的很多公司都有针对各种不同样本的外泌体提取试剂盒。样本预处理阶段很重要,甚至决定了后续提取外泌体的纯度和量
文献中常用的分离外泌体的方法主要是超离法和试剂盒法,那这两种方法研究人员该如何选择呢?为了解决大家的疑惑,我们专门做了对比实验进行阐述。 四、超速离心法与试剂盒法比较 (一)实验分组和开展实验确定: 此实验共分为 3 组,每组设置 2 个重复,所选原始样本是 293T 细胞培养上清。 组1:超离法分离(UC-1,UC-2); 组2:使用某国外试剂盒 SXX(SXX-1,SXX-2); 组3:使用某国内试剂盒 UXX(UXX-1,UXX-2)。 开展
远远比常规试剂盒提取高,更好的保留外泌体的活性和形态; 大规模提取是有参考的解决方案的,这两篇文献很好的做了阐释。 关键步骤 [1]: ● 收集条件培养基(CM):收集神经母细胞瘤 N2a 和成肌细胞 C2C12 的培养基,经过低速离心和 0.22 μm 过滤去除大颗粒和细胞碎片。 ● 处理大体积培养基:对于大体积培养基(50 ml 至 200 mL),使用切向流过滤(TFF)系统进行浓缩和透析,然后加载到结合-洗脱分子筛层析(BE-SEC)柱上进行纯化。 ● 分离 EVs:根据 280 nm
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