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细胞外酸化率检测试剂盒ECAR

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  • BB-48311
  • 中国
  • 2025年07月15日
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    • 英文名

      Extracellular Acidification

    • 保质期

      半年

    • 供应商

      BestBio贝博

    • 保存条件

      2-8度避光

    • 规格

      200T

    细胞外酸化检测试剂盒  BB-48311-200T

    贝博® BBcellProbe® 细胞外酸化率(ECAR)检测试剂盒(Extracellular acidification Rate Assay Kit)是利用贝博® 合成的酸化检测荧光探针BBcellProbe® P61来检测细胞外酸化情况变化的试剂盒。可以通过简单的混合基于荧光酶标仪便捷的直接进行细胞外酸化情况的动态实时测定。
    细胞外酸化(Extracellular Acidification ;ECA)测量可以为糖酵解(glycolytic)活性研究提供丰富的信息,本试剂盒可用于代谢表征并确定具体的干预措施(如养分缺失、缺氧、药物治疗或遗传基因操控)如何影响糖酵解通量。

    BBcellProbe® P61最大激发波长为 488nm,最大发射波长为 580nm。其荧光在碱性条件下强度较弱,反之酸性条件下变强,从而BBcellProbe® P61可被用于监测细胞外酸化的变化。在测定中,细胞外酸化率由荧光信号随时间的变化计算。细胞外酸化增加,荧光信号的变化率增加;反之,酸化减少,荧光信号的变化率降低。
    BBcellProbe® P61与乳酸的这种反应是非破坏性且完全可逆的,BBcellProbe® P61没有细胞毒性,其是化学稳定的,惰性的,水溶性的和细胞不渗透的,不能透过完整的细胞膜。因此还可以同时与细胞耗氧率, 线粒体膜电位, ROS和细胞ATP 、LDH等检测的试剂结合使用,进行多参数检测。
    用BBcellProbe® P61进行细胞外酸化检测方法及其简单,不需要适用特殊的仪器设备,只需要荧光酶标仪之类的荧光读板设备即可。
     
    货号 试剂盒名称 荧光颜色 检测波长 检测仪器
    BB-48211 细胞耗氧率检测试剂盒(OCR 红色 468nm/603nm 荧光酶标仪(时间分辨)
    BB-48311 细胞外酸化检测试剂盒(ECAR 橙色 488nm/580nm 荧光酶标仪
    BB-483112 细胞外糖酵解检测试剂盒 绿色 488nm/516nm 荧光酶标仪
    BB-48213 细胞缺氧检测试剂盒 绿色 488nm/518nm 酶标仪/流式/光度计
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    BB-46052 活性氧检测试剂盒         ROS检测试剂盒) 红色 516nm/606nm 流式/酶标仪/光度计

    试剂盒用途:
    1. 细胞代谢研究;
    2. 测量活细胞中的糖酵解活性;
    3. 研究各种处理对细胞酸化量的影响;
    4. 研究基因修饰对细胞酸化量的影响;
    5. 探究细胞代谢变化与氧含量之间的联系;
    6. 直接评估药物处理的线粒体毒性。
    适用样本类型:
    1. 细胞;贴壁细胞/悬浮细胞;
    2. 分离的细胞;
    3. 3D 培养物;组织;
    4. 分离的酶;
    5. 微生物;细菌/酵母/霉菌。
    荧光检测模式:
    1. 荧光强度测定;
    关于仪器设置:
    1. 温度对检测有较大影响。有条件的话,务必使用配有温度控制的酶标仪。
    2. 常规的荧光信号强度测量,使用基于单色仪或基于过滤器的酶标仪,最佳激发波长使用488 nm514 nm,发射波长使用580-590 nm。可根据实际机器和样本选择信号最强的波长。
    3. 具有检测增益参数(PMTParameters)的通常设置为中或高。
    4. 一般使用底部读数bottom read


    关于细胞培养:
    1. 对于贴壁细胞,在200 μL培养基中的96孔板中接种细胞。在37 ℃ CO2培养箱中孵育过夜。
    2. 对于悬浮细胞,在检测当天在100 μL培养基中接种。
    3. 注意所需的接种密度取决于细胞类型。 我们推荐进行细胞接种密度预实验以确定最佳密度。通常从高细胞密度(通常为60,000-80,000个)开始,每孔的最佳细胞数一般为:贴壁细胞每孔80,000个细胞,悬浮细胞每孔5-6 x 10596孔板)。
    4. 检测待测样品都设置3复孔。
    5. 注意始终在每个96孔板上留出至少6个孔,以免添加细胞作为空白对照和信号控制孔。
    6. 如果将细胞在CO2培养箱中培养过夜,则去除二氧化碳非常重要,残留的二氧化碳可能会导致酸化。在进行P61酸化检测之前先将培养板残余二氧化碳进行去除,方法是提前通过在37℃,湿度为95%的无二氧化碳培养箱中培养细胞约两个小时。

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