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- 详细信息
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- 库存:
大量
- 英文名:
CHAPS Lysis Buffer(CHAPS裂解液)
- 保质期:
2年
- 供应商:
上海泽叶生物科技有限公司
- 保存条件:
4-25℃
- 规格:
250 mL
CHAPS Lysis Buffer(CHAPS裂解液)
| 名称 | 编号 | 规格 | 价格 |
| CHAPS Lysis Buffer(CHAPS裂解液) | ZY-N191053 | 250 mL | 390 |
| 英文名称:CHAPS Lysis Buffer(CHAPS裂解液) 运输:常温 保存:4-25℃ 有效期:2年 货期:1-3天 其他: 产品介绍: |
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1. 根据pH计校准说明。选择一点校准(常规7.01或6.86),两点校准或者三点校准。
2. 取出电极(及感温探头),用蒸馏水清洗 pH 电极,吸水纸拭干。
1.将电极 (及感温探头) 浸入标准缓冲液中进行第1点校准(缓慢搅动,确保电极完全接触溶液,下同)。
2.完成第一点校准后,用蒸馏水清洗电极,吸水纸拭干,进行第二点,以及第三点校准。
3.校准完毕后,用蒸馏水清洗电极,吸水纸拭干后,进行后续pH测定或者浸入电极保护液保存。
二、电极的维护与保养
(一)清洗电极
为了确保 pH 电极的正常使用,每次测量或校准后,请务必使用蒸馏水冲洗电极的玻璃敏感膜以及参比部位。如果长时间不使用电极,请将电极浸泡在电极保护液中保存,禁止使用纯水或蒸馏水浸泡电极。
测定样品含有以下物质,建议测量后按下述方法清洗电极:
1.盐类物质:将电极浸入自来水中 10 至 15 分钟,再用蒸馏水清洗。
2.油脂类物质:用少量洗涤剂清洗玻璃敏感膜。如果必要,可使用适量的酒精清洗,再用蒸馏水彻底冲洗电极,拭干,并浸入电极保护液中至少 30 分钟后使用。
3.蛋白质残留物:配制 0.1M 的 HCl 溶液并加入 1%的胃蛋白酶,将电极浸入上述溶液中 10 - 15 分钟。
4.参比端堵塞:将电极浸入60℃的稀溶液 10 分钟,再浸入电极保护液中冷却后使用。
(二)激活电极
电极储存适当经清洗拭干后可立即使用。电极的玻璃敏感膜已干燥,测量的响应时间将变得非常缓慢。可以使用 pH4.01 标准液浸泡电极 10-30 分钟以加速响应,如果效果不佳,则需要激活电极。
1.将电极浸入 0.1M 的 HCl 溶液 5 分钟。
2.用蒸馏水清洗,拭干后,再浸入 0.1M 的 NaOH 溶液 5 分钟。
3. 再次用蒸馏水清洗,拭干后,浸入电极保护液 30 分钟。
使用说明:
1.每瓶粉剂可配制成1000ml的50×浓度的TAE缓冲液。
2.配制时用去离子水或双蒸水作为溶剂。
3.将包装袋中的粉剂全部溶于800ml的去离子水或者蒸馏水中,定容至1000ml
注意事项:
1.配制溶液前确保所需器材洁净。
2.拆包装时,避免袋中粉末撒出;袋内残留少许干粉,略有结块不影响实验效果。
3.操作中请穿戴实验服和一次性手套,废弃包装袋及用品请弃于专用的垃圾袋内。
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文献和实验9M Urea,2.5mM EDTA,2.5mM EGTA,1% DTE,4% CHAPS make 10ml and aliquot 10x1ml,freeze at -70℃ Lysate preparation wash the cells 2x with PBS wash the cells 1x with 10mM Tris,250mM Sucrose lyse the cells with 100 – 350μl of urea lysis buffer
,三个一起上 从以上三个结果可以看到,第一种孵育方法抗原得率最高,第三种抗原得率最低。如果靶蛋白丰度较高,第一种和第二种差别并不显著。注意,整个体系选择同样的孵育顺序,以确保结果的重复性。 5、各种 buffer 整个 co-IP 系统,涉及到裂解液,结合液,洗涤液,洗脱液,这4种溶液要如何考量呢? 裂解液---样本质量很大程度受限于裂解液,要考虑其中的去垢剂种类。 非变性裂解液,含有非离子型去垢剂,有助于稳定天然蛋白构象,比如 IP lysis buffer。不建议使用变性裂解液
进行实验,则磷酸化 c-Src 丢失[4] 。就是说使用溶液法提取的蛋白谱是不完整的,蛋白有非等比例的丢失,内参也有可能存在丢失情况,那么如果做磷酸化蛋白定量,就会出现数据偏差。β整联蛋白是一种磷酸化蛋白,使用 Chaps 进行原代鸡胚成纤维细胞蛋白质提取,Chaps 不可溶组分使用 RIPA 裂解液再次提取,RIPA 不可溶组分再使用 sample buffer 提取,在五次采样(见下图)中,在 Chaps 不可溶组分和 RIPA 不可溶组分中都发现了大量的整联蛋白[5] 。caveolin
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