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- 信裕生物
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- 2025年07月16日
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- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
20
- 英文名：
Coccidioides immitis
- 保质期：
一年
- 供应商：
上海信裕生物科技有限公司
- 保存条件：
-20℃
Coccidioides immitis. PCR Kit
本产品包含Taq DNA聚合酶、dNTPs、MgCl2、反应缓冲液，浓度为2×。具有快速简便、灵敏度高、特异性强、稳定性好等优点，可最大限度的减少人为误差。使用时只需加入DNA模板和引物既可。使用方便快捷，能避免PCR操作过程中的污染，使用时只需取适量2×TaqPCR MasterMix溶液，加入模板和引物，并加入去离子水补足体积，使MasterMix溶液浓度为1×即可进行反应。使用前请保证充分溶解并混匀，操作需在冰上进行。
Taq：扩增效率最高的耐热 DNA 聚合酶，其扩增速度约为 1-2kb/min。扩增碱基出错率为 10-5 左右。其产物未端带有 A，可直接用于 TA 克隆。
Pfu：目前保真度最高的耐热 DNA 聚合酶，碱基出错率为 10-6，但扩增效率低于 Taq 酶， 一般能很好的扩增 2kb 以下的片段。其扩增速度约为 500bp/min 左右。其产物为平未端，须加 A后才可用于 TA 克隆。
Taq Plus：Taq 和 Pfu 的等比混合物。集扩增效率高和保真度好于一身。扩增效率比 Pfu 高， 保真度比 Taq 好。其扩增速度约为 1000bp/min 左右。其产物未端带有 A，可直接用于 TA 克 隆。 含染料 PCR MasterMix 反应完后可以直接电泳检测。不含染料的 PCR MasterMix 反应完后 加入上样缓冲液后电泳检测。
| 产品名称 | 方法 | 规格 | 价格 |
| 粗球孢子菌LAMP试剂盒 | LAMP | 50次 | 2490元 |
| 粗球孢子菌PCR试剂盒 | PCR | 50次 | 1490元 |
| 粗球孢子菌染料法荧光定量PCR试剂盒 | 染料法 | 50次 | 2490元 |
| 粗球孢子菌探针法荧光定量PCR试剂盒 | 探针法 | 50次 | 3490元 |
1. 即开即用，用户只需要提供 DNA 模板。
2. 引物经过精心优化，专一性强，只扩增粗球孢子菌，与其他微生物没有交叉反应。
3. 提供阳性对照，便于区分假阴性样品。
4. PCR mix 中含上样染料，PCR 后可以直接上样电泳。
5. 本试剂盒足够做 40μL 体系的 PCR 50 次，但只能用于科研。
规格及成分
| 成分 | 编号 | 十孔盒包装 |
| PCR MagicMix 3.0 | 试剂一 | 1 mL（红盖） |
| 超纯水 | 试剂二 | 1 mL（亮黄色） |
| 粗球孢子菌PCR引物混合液 | 试剂三 | 100 μL（白盖） |
| 粗球孢子菌PCR 阳性对照 （1×10E8 拷贝/μL） |
试剂四 | 50 μL（黄盖） |
| 核酸释放剂（试用装） | 试剂五 | 20 次（1 mL，绿盖） |
| 使用手册 | 试剂六 | 1 份 |
自备试剂：样品 DNA。
使用方法：
一、样品 DNA 的制备
1. 用自选方法纯化 N+2 个样品的 DNA，本试剂盒跟市场上大多数核酸提取试剂盒兼容。本试剂盒免费赠送20 次核酸释放剂试用装，其使用手册可以从本公司网站订购核酸释放剂。
2. 如果有 N 个样品，则需要做 N+2 个提取，包括一个样品制备阳性对照和一个样品制备阴性对照。样品制备阳性对照是在适量水（取决于试剂盒要求的样品起始量）中加 10μL 补骨脂 PCR 阳性对照的 1000 倍稀释液而得，样品制备阴性对照是直接用水。提取结束后最后得到模板 DNA 放冰上待用。
二、设置 PCR 反应（40μL 体系）
3. 对 N+2 个样品，在 PCR 时需要增加一个 PCR 阳性对照和一个 PCR 阴性对照，故需要设置 N+4 个反应。在 N+4 个 PCR 管中分别加入下列成分：
| 成分 | N+2 个样品管 | PCR 阴性对照 | PCR 阳性对照 |
| PCR MagicMix 3.0 | 各 20 μL | 20 μL | 20 μL |
| 粗球孢子菌PCR引物混合液 | 各 2 μL | 2 μL | 2 μL |
| N+2 个样品 DNA 模板 | 各 18 μL | -- | -- |
| PCR 阴性对照（水） | -- | 18 μL | -- |
| PCR 阳性对照（粗球孢子菌PCR阳性对照的 1000 倍稀释液） |
-- | -- | 18 μL |
- 按下表设置 PCR 反应：
| 过程 | 温度 | 时间 |
| 预变性 | 95℃ | 5 min |
| PCR 反应（35 个循环） | 95℃ | 15 sec |
| 57℃ | 15 sec | |
| 72℃ | 40 sec | |
| 最后延伸 | 72℃ | 10 min |
5. 取 10-20 μL PCR 产物。电泳检测 PCR 产物。本产品提供的 PCR Mix在扩增结束后可以直接上样，不需要另外再加 loading buffer。PCR 产物阳性对照必须有预期条带出现，阴性对照必须无任何扩增，否则实验无效。对没有扩增产物的样品，可以稀释 10 倍后重复 PCR 扩增以排除 PCR 抑制剂的感染。
粗球孢子菌PCR试剂盒常见问题与解决方法:
| 常见问题 | 可能原因 | 解决方法 |
阳性对照、待测样本均无条带。 |
PCR反应体系或反应条件不合适。 | 使用梯度PCR摸索PCR反应条件。 |
| PCR试剂保存不当失去活性。 | 2× PCR Mix应保存于-20℃，使用时避免反复冻融。若使用频繁，可在4℃短时间存放。 | |
| 引物设计问题。 | 尝试重新设计引物进行检查。 | |
阳性对照有目的条带，待测样本无条带或条带弱。 |
不当储存或长期储存引起试剂活性丧失。 | 使用新鲜的试剂。 |
| 加入组织裂解液过量。 | 增大反应体系，或减少裂解液的用量。 | |
| 样本裂解混合液保存不当或保存时间过久，DNA基因组已经降解。 | 裂解混合液液可在4℃保存2-3天，尽量使用新制备的裂解液混合液进行PCR。 | |
| 模板加入量不适合。 | 在反应体系10-20%范围内优化模板加入量。反应效性能较差时，可以降模板浓度调节到低于10%的范围。 | |
| PCR循环数不足。 | 适当增加PCR的循环数，推荐在35-40循环为佳。因为模板复杂，一般PCR反应要比用纯化的 DNA模板多5-10个循环为佳。 | |
非特异性扩增 |
PCR退火温度太低，循环数、引物浓度或模板浓度太高。 | 增加PCR退火温度，降低PCR循环数、引物浓度或模板浓度。 |
| PCR引物错配。 | 重新设计PCR引物。 | |
| 配制PCR反应体系时温度太高或配制完成后放置时间太久。 | PCR反应体系的配制在低温下进行，配制完成后尽快进行PCR扩增反应。 | |
阴性对照出现目的条带 |
操作工具或试剂污染。 | 实验所有试剂或器材均应高压灭菌。操作时应小心轻柔，防止将靶序列吸入加样枪内或溅出离心管外。 |
| 样本间交叉污染。 | 每个取样器只对一个样本使用；或取完一个样本后，将取样器刃口浸入2%的次中，反复涮洗，然后用干净的纸巾擦干残液。 |
特别提示：本公司的所有产品仅用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！
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