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- 2025年07月08日
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- 详细信息
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- 技术资料
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27
- 英文名：
Streptavidin/Cy3
- 保质期：
详见说明书
- 供应商：
上海研生
- 保存条件：
详见说明书
- 规格：
瓶
英文名称: Streptavidin/Cy3
应用: ICC=1:500-5W;IF=1:500-5W;not yet tested in other applications.optimal dilutions/concentrations should be determined by the end user.
浓度: 1mg/ml
实验操作步骤：
荧光素Cy3标记链霉亲和素规格是用于测定细胞增殖或毒性实验中活细胞数目的一种高灵敏度，无放射性的比色检测法。CCK法应用非常广泛，如药物筛选、细胞增殖测定、细胞毒性测定、肿瘤药敏试验以及生物因子的活性检测等。下面以engreen的CCK8试剂盒为例，简要说明细胞增殖-毒性检测的操作步骤
方法/步骤
在96孔板中配制100μl的细胞悬液。将培养板在培养箱预培养 24 小时 (在 37℃，5% CO2 的条件下)。
向培养板加入 10μl 不同浓度的待测物质。
将培养板在培养箱孵育一段适当的时间 (例如: 6,12, 24 或 48 小时)。
向每孔加入 10μl CCK8 溶液（engreen） (注意不要在孔中生成气泡，它们会影响 OD 值的读数)。
5. 将培养板在培养箱内孵育 1-4 小时。
用酶标仪测定在 450 nm 处的吸光度。
如果暂时不测定OD值，打算以后测定的话，可以向每孔中加10μl0.1 M HCl溶液或者1%wSDS 溶液，并遮盖培养板避光保存在室温条件下。在24小时内吸光度不会发生变化 。
细胞周期检测的原理：
PI法是经典的周期检测方法。PI为插入性核酸荧光染料，能选择性的嵌入核酸DNA和RNA双链螺旋的碱基之间与之结合，其结合的量与DNA的含量成正比例关系，用流式细胞仪进行分析，就可以得到细胞周期各个阶段的DNA分布状态，从而计算出各个期的百分含量。PI染色后，假设G0/G1期细胞的荧光强度为1，那么含有双份基因组DNA的G2/M期细胞的荧光强度的理论值为2，正在进行DNA复制的S期细胞的荧光强度为1-2之间。
常用的细胞染色方法有:
1.简单染色法,常用碱性染料如美蓝等进行简单染色;
2.革兰氏染色法,主要包括结晶紫初染、碘液媒染、乙醇(或)脱色以及番红复染四个过程;
3.瑞氏染色法,瑞氏染料溶剂主要是由伊红美蓝组成;
4.吉姆萨染色法,吉姆萨染色原理与结果和瑞特染色法基本相同;
5.细胞免疫荧光染色法,免疫荧光染色的主要原理是利用抗原抗体之间的特异性结合。
蛋白提取/定量
蛋白提取频道,提供蛋白提取实验用蛋白提取试剂盒，蛋白裂解液，蛋白浓度测定试剂盒等蛋白质实验用试剂及耗材。其中蛋白提取系列包括：植物蛋白提取试剂盒，细胞组织蛋白提取试剂盒，胞膜/细胞核蛋白提取试剂盒，全蛋白提取试剂盒等。
操作说明：
一，微孔酶标仪法
1. 完全溶解蛋白标准品，取10ml，加240ulPBS稀释至250ml ，使终浓度为0.2mg/ml。待测蛋白样品在什么溶液中，标准品也宜用什么溶液稀释。但是为了简便起见，也可以用0.9%NaCl或PBS稀释标准品。
2. 5×G250染色液使用前请颠倒3-5次混匀，取1ml 5×G250染色液，加入4ml双蒸水，混匀成1×G250染色液，此1×G250染色液可在4℃保存一周。
3. 将标准品按0, 2,4,6,8,12,16,20微升分别加到96孔板中，加PBS稀释液补足到20微升。
4. 将样品作适当稀释（zui好多做几个梯度，如作2倍、4倍、8倍稀释），加20微升到96孔板的样品孔中。由于移液器在取小量时的误差，标准线前面的点可能不很准确，所以尽可能的让样品点落在标准线1/2后。
5. 各孔加入200微升稀释后的1×G250染色液，室温放置3-5分钟。
6. 用酶标仪测定A595，或560-610nm之间的其它波长的吸光度。
7. 根据标准曲线计算出样品中的蛋白浓度。
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文献和实验位。 IF（免疫荧光检测）是采用荧光素标记物作为探针，形成的抗原抗体复合物上带有荧光素，在荧光显微镜下，受激发光的照射后发出一定波长的荧光，从而对细胞、组织中的抗原进行定位或定量。 表 1 IHC/ICC与IF特点对比 IHC/ICC 与 IF 染色中使用的抗体主要为一抗与二抗，根据是否选用二抗以及二抗标记物类型可形成多种不同的检测系统。信号放大是免疫组化实验中的重要步骤，信号放大可以使目标蛋白质的信号从微弱到明显，从而更容易被观察和定量。现有的信号放大技术多为链霉亲和素-生物素法，该方法基于链酶亲和
条带。 五、 二抗的选择 二抗应选用与使用的一抗相同的物种来源，例如：如果你的一抗是小鼠的单克隆抗体，二抗则选抗小鼠的二抗anti-mouse secondary。建议检查二抗说明书确保该抗体适用于你的检测应用， 二抗一般连接荧光素FITC 或发光团。 六、双重染色抗体的选择 用未偶联一抗进行细胞培养物或组织切片的双重免疫染色要求一抗来源于不同物种并且二抗分别识别其中之一，二抗说明书应描述其与其它物种来源的免疫球蛋有否有交叉吸附。 七、荧光和化学发光标记 连接于二抗的标记
发光波长为550nm；最大发射光波长为620nm，呈橙红色荧光，与FITC发出的黄绿色荧光对比鲜明，常用于免疫荧光组织化学双重染色。 (3)四乙基罗丹明(RB200)：能与细胞内蛋白质结合，不溶于水，易溶于乙醇和丙酮，性质稳定，可长期保存，广泛应用于双标记示踪染色。最大激发光波长为570nm，最大发射光波长为595-600nm，呈橙红色荧光。 (4)花青类染料：常用的有Cy3、Cy5等，能与细胞内蛋白质结合。这类染料的荧光特性与传统荧光素类似，但水溶性和对光稳定性较强，荧
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