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- 2025年07月08日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
59
- 英文名：
详见说明书
- 保质期：
一年
- 供应商：
上海一研
- 保存条件：
4°C保存
- 规格：
100T/盒
1、原装进口抗体----高效、灵敏、特异
2、规范包被操作----吸附均匀，吸附性好，空白值低，孔底透明度高
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5、技术服务要求：专业，规范，高效
6、适用于体液、组织匀浆液、细胞培养上清液、尿液等多种类型的样本
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9、经济、实惠、可靠，完善、稳定的实验体系，优秀的科研队伍，先进的实验设备、准确可靠的实验结果，是您可靠的合作伙伴。
参数规格：
产品名称 POU5F1 mRNA原位杂交试剂盒
规格:100T/盒
特异性: 人
标记方式: 3’—尾段标记
保存条件: 4°C保存一年
试剂盒内容:
1.POU5F1寡核苷酸探针杂交液 2ml；
2.预杂交液 2ml；
3.胃蛋白酶（×10;Pepsin） 2ml；
4.封闭液 5ml；
5.生物素化鼠抗 5ml；
6.SABC-POD 5ml；
7.生物素化过氧化物酶 5ml。
操作程序：
注意：最重要的是及时固定，并在固定液中加入0.1%的DEPC处理，以抑制RNA酶对mRNA的分解作用。此外，过度固定对原位杂交有明显的不利影响。
1．玻片的处理：一般采用多聚赖氨酸或APES。切片厚度10-20μm。
2．细胞在多聚赖氨酸处理的盖玻片上进行培养，条件为37℃和5%的CO2，所用培养基为Dulbecco基础培养基。细胞长好后0.1M PBS(PH7.4)洗2分钟×3次。
3．培养细胞和冰冻切片均可用下述方法固定：固定液为4%/0.1 M PBS(PH7.2-7.6)，含有1/1000 DEPC。室温固定 20--30分钟。蒸馏水充分洗涤，干燥后-20℃冰冻可保存2周以上。
4．30%H2O2 1份+纯甲醇50份混合，室温处理30分钟。蒸馏水洗涤3次。
5．暴露mRNA核酸片段：切片上滴加3%柠檬酸新鲜稀释的胃蛋白酶(1ml 3% 柠檬酸加2滴浓缩型胃蛋白酶，混匀)，37℃或室温消化5—120秒钟。有时也可以不消化。原位杂交用 PBS洗3次×5分钟。蒸馏水洗1次。
6.后固定：胃蛋白酶消化后才需要。固定液为1%/0.1 M PBS(PH7.2-7.6)，含有1/1000 DEPC。室温固定 10分钟。蒸馏水洗涤3次。
7．预杂交：湿盒的准备——干的杂交盒底部加20%甘油20ml以保持湿度。按每张切片20μι加预杂交液。恒温箱38-42℃2—4小时。吸取多余液体，不洗。
8．杂交——按每张切片20μι杂交液，加在切片上。将原位杂交专用盖玻片的保护膜揭开后，盖在切片上。恒温箱38-42℃杂交过夜(根据杂交情况可以调节)。
9．杂交后洗涤：揭掉盖玻片，37℃左右水温的2×SSC洗涤5分钟×2次；37℃0.5×SSC洗涤15分钟×1次; 37℃0.2×SSC洗涤15分钟×1次(如果有非特异性染色，重复0.2×SSC洗涤15分钟×1-2次)。
10.滴加封闭液：37℃30分钟。甩去多余液体，不洗
11.滴加生物素化鼠抗37℃ 60分钟或室温120分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
12.滴加SABC：37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×3次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
13.滴加生物素化过氧化物酶：37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。
14.DAB显色：使用DAB显色试剂盒—1ml蒸馏水加显色剂Ａ，Ｂ，C各一滴，混匀，加至标本上。一般显色20-30分钟。若无背景出现则可继续显色。也可自配DAB显色剂后显色。充分水洗。
15.必要时苏木素复染，充分水洗。
16.酒精脱水，二甲苯透明，封片。
试剂盒组份：
5×Equilibration Buffer————750μl
FITC-12-dUTP Labeling Mix———100 μl
Recombinant TdT Enzyme—————20 μl
Proteinase K (2 mg/ml)————40 μl
DNase I (1 U/μl)———————5μl
10×DNase I Buffer——————100 μl
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POU5F1 mRNA原位杂交试剂盒小鼠心肌肌钙蛋白I(cTnI)Elisa试剂盒
英文名称:Mouse Cardiac Troponin I Elisa Kit
英文别名:CMH7; TNNC1; TNNI3; Troponin I
反应性:Mouse
样品类型:血清/血浆/细胞培养上清
检测范围:781-50000 pg/ml
灵敏度:150 pg/ml
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