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羊抗人IgG-HRP

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  • 2025年07月12日
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    • 英文名

      Goat anti-Human IgG/HRP

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      详见说明书

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      上海博湖

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      储存条件: -20°C

    • 规格

    产品细节图片1
    产品名称:羊抗人IgG-HRP
    英文名称: Goat anti-Human IgG/HRP

    储存条件: -20°C
    酶标记抗体,是一类广泛用于免疫学、分子生物学及临床医学的各个分支学科中的特异、敏感和安全的免疫化学制剂。目前较为常用的是将辣根过氧化物酶(HRP),经过钠氧化而标记在抗体IgG分子上,而制成HRP—抗体结合物。公司向用户提供的各类酶标物,均根据本公司建立的改良过钠氧化法标记而成。每种成品已加入一定浓度的BSA作为稳定剂。产品的工作浓度根据方法不同而别,用前最好-20℃冻存,避免反复化冻。
    应用范围:
    抗原决定族的抗原性分析鉴定,各种抗原、抗体的定量、定性及定位分析测定等。
    工作中易产生的问题:
    1.包被抗体或抗原不适,易产生阳性值较小,或产生变异,即跳管现象。
    2.用抗血清不纯化,或纯化程度太低的抗体包被,则阳性值较小,或没有阳性梯度。
    3.封闭不好或标记物过浓可产生对照较高。
    主要性能:
    每支0.1ml液体,内含有HRP200μg/支,IgG约含400μg/支,BSA300μg/支,-20℃保存,稳定一年。4℃保存约36个月,1:10稀释,4℃可30天左右。稀释液为:pH7.4PBST
    工作效价:
    直接ELISA法:1:500~1:1000,用TMB作底物(OD450nm)P/N2.53.0为阳性。
    免疫印迹法:1:200400,免疫组化:1:2040,斑点免疫1:200~400
    备注:产品信息可能会有优化升级。请以实际标签信息为准。
    产品名称 羊抗人IgG-HRP
    英文名称 Goat anti-Human IgG/HRP
    货号 BH-DB1046
    操作步骤:
    Ⅰ 实体组织蛋白的提取
     1. 在每1mL 冷Lysis Buffer加入10 μL磷酸酶抑制剂, 1 μL蛋白酶抑制剂和 5μL 100mM PMSF,混匀。冰上保存数分钟待用。
    2.  每100mg固体组织置于培养皿中,手术剪剪碎成3mm×3mm左右的小块,加入0.5~1 mL冷 Lysis Buffer,玻璃匀浆器上下手动匀浆15次,注意低温操作;
    3. 取组织匀浆液转移到1.5mL预冷的离心管,离心10000转/分,4℃离心5 min;
    4. 取上清转移至新的预冷的离心管中,即为全蛋白提取物,蛋白定量(Bradford法、BCA法);
    5. 分装保存于-70℃,避免反复冻融。
    Ⅱ 培养细胞蛋白提取
    1. 贴壁培养的细胞,吸去培养基后,加入10mL/150mm培养板的冷PBS洗两次,每次振摇数次以尽量去除培养液;
    2. 悬浮培养的细胞或用细胞刮子刮下的贴壁细胞,将细胞及培养液移至离心管中, 1000转/分离心10 min,再用10mL/150mm培养板的冷PBS,1000转/分离心5 min洗两次;
    3. 在每 1mL冷 Lysis Buffer加入10μL磷酸酶抑制剂, 1μL蛋白酶抑制剂和5μL 100mM PMSF,混匀。冰上保存数分钟待用。
    4. 细胞洗涤后,转至新的预冷的离心管中,加入上述配制好的冷Lysis Buffer,加入量如下表所示:
            细胞数量         Lysis Buffer加入量
            107         0.5 mL~1 mL
            5×106         0.2 mL~0.5 mL
    5.置于4℃摇床平台上,温和振荡15 min;
    6. 14,000rpm,4℃离心15min,取上清为全蛋白提取物, 蛋白定量(Bradford法、BCA法);
    7. 分装保存于-70℃,避免反复冻融。

    固定液的应用:
    1.单纯固定液(1)4%中性甲醛固定液:zui常用的固定液,能满足常规HE及免疫组化、PCR等工作。一般无特殊要求的病理标本均适用。尤其值得注意的是,中性甲醛是以pH7 2~7 4的磷酸缓冲液为溶剂配制的,其固定效果及对组织抗原性的保存均优于一般的4%甲醛固定液。此固定液配制后应密封…
    1.单纯固定液
    (1)4%中性甲醛固定液:zui常用的固定液,能满足常规HE及免疫组化、PCR等工作。一般无特殊要求的病理标本均适用。尤其值得注意的是,中性甲醛是以 pH 7.2~7.4的磷酸缓冲液为溶剂配制的,其固定效果及对组织抗原性的保存均优于一般的4%甲醛固定液。此固定液配制后应密封并保存在阴凉处,保存时间不 超过一个月。
    (2)乙醇固定液:使用时以80%~95%的浓度为宜,具有硬化、固定、脱水等作用,对组织渗透力较弱,因此很少单独使用,但其保存组织中的核酸强于中性甲醛,故常用于有核酸操作的实验或检查,如果用于证明尿酸结晶和保存糖原,可用100%乙醇固定组织。
    (3)4%的多:主要用于培养细胞的固定。
    2.混合固定液
    (1)乙醇一甲醛(乙醇-福尔马林,AF)固定液:适用于皮下组织中肥大细胞的固定。该固定液有固定兼脱水作用,固定后的标本可直接入95%乙醇脱水。
    (3)Bouin固定液:特别适用于睾丸活检组织的固定。Bouin液对组织固定较均匀,收缩很少,不会使组织变硬变脆。需现配现用。
    (4)Carnoy固定液:穿透能力强,可很好的固定细胞质和细胞核,特别适合于固定外膜致密的组织,亦适用于糖原及尼氏小体的固定。
    (5)Zenker固定液:经此液固定的标本,细胞核和细胞质染色颇为清晰,但成本较昂贵且需特殊处理汞。该固定液要避免接触阳光,以免引起化学变化而失效

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      问:有没有做辣根过氧化物标记的朋友啊,能不能把你们的步骤发给我。本人开始做,发现很多人用的浓度都不一样。答:1.1 试剂准备1) 10mg/mL HRP2) 0.06mol/L NaIO43) 0.16mol/L乙二醇4) 碳酸盐缓冲液(Na2CO3 0.7952g NaHCO3 1.4702g 溶于500mL蒸馏水中,调pH值到9.5)5) 2.5mg/mL NaBH46) 0.01mol/L磷酸盐缓冲液,pH7.41.2 操作步骤1. 10mg/mL取HRP VmL,溶液为棕黄色,加入

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