CTAB抽提液 / CTAB Extract Solution 植物DNA提取
试剂组分
试剂(A): CTAB抽提液----500ml---Store at RT
试剂(B): 2-ME----10ml----Store at RT away from light
自备材料:1、 液氮/研钵或匀浆器;2、 恒温箱或水浴锅;3、 氯仿/:1;4、75%乙醇;6、离心管;
产品简介
CTAB是一种阳离子去污剂,具有从低离子强度的溶液中沉淀核酸和酸性多聚糖的特性,在这种条件下,蛋白质和中性多聚糖仍留在溶液里,在高离子强度的溶液里,CTAB与蛋白质和大多数酸性多聚糖以外的多聚糖形成复合物,只是不能沉淀核酸。因此,CTAB可以用于从大量产生粘多糖的有机体如植物以及某些革兰氏阴性菌(包括E.coli的某些株)中制备纯化DNA 。
从植物组织中制备基因组DNA较常采用的方法有氯化离心法、CTAB抽提法等。CTAB抽提法是经典的植物DNA提取法,可以用于多种不同类型植物样品DNA的提取,获得的量很高,但是纯度一般,但是足够用于大多数分子生物学实验。CTAB抽提液的有效成分主要由CTAB、氯化钠、EDTA等组成,附送 2-ME,临用前加入2-ME,使其更有效,更稳定。
使用参考
1、 取5ml或适量CTAB抽提液,按CTAB抽提液:2-ME=50:1的比例混匀,置于15ml或其它规格的离心管中,60℃预热。
2、称取1.0~1.5g或适量新鲜植物组织或叶片,用预冷的液氮或干冰冷却研钵或匀浆器,将新鲜植物组织或叶片粉碎成细粉末,将冷冻的组织转移至离心管中。
3、向粉碎的组织中按4~5ml/g加入预热的CTAB抽提液,充分混匀,65℃温育15~60min,并不时混匀。
4、加入等体积24:1氯,颠倒充分混匀,8000g离心5min~10min,回收上层水相(即上清液,该上清液中含有所需DNA)。
5、转移上清液至新的离心管中,加入1/2~2/3体积预冷的异丙醇,轻轻混匀,室温静置使核酸沉至管底。如果观察不到沉淀,可在室温下静置数小时至过夜。
6、 2000g离心2min,轻轻弃上清液。
7、在松散的DNA沉淀物上加入75%乙醇,室温静置20min,4000g离心10min,轻轻弃上清液。
8、自然干燥DNA,加入适量去离子水或TE缓冲液,低温保存。
注意事项
1、 如果每次的使用量很小,可以适当分装后再使用。
2、 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。