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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存:
50
- 英文名:
CTAB抽提液 / CTAB Extract Solution 植物DNA提取
- 保质期:
有效期24个月
- 供应商:
上海信裕生物科技有限公司
- 保存条件:
Store at RT,有效期24个月
- 规格:
500mL
试剂组分
试剂(A): CTAB抽提液----500ml---Store at RT
试剂(B): 2-ME----10ml----Store at RT away from light
自备材料:1、 液氮/研钵或匀浆器;2、 恒温箱或水浴锅;3、 氯仿/:1;4、75%乙醇;6、离心管;
产品简介
CTAB是一种阳离子去污剂,具有从低离子强度的溶液中沉淀核酸和酸性多聚糖的特性,在这种条件下,蛋白质和中性多聚糖仍留在溶液里,在高离子强度的溶液里,CTAB与蛋白质和大多数酸性多聚糖以外的多聚糖形成复合物,只是不能沉淀核酸。因此,CTAB可以用于从大量产生粘多糖的有机体如植物以及某些革兰氏阴性菌(包括E.coli的某些株)中制备纯化DNA 。
从植物组织中制备基因组DNA较常采用的方法有氯化离心法、CTAB抽提法等。CTAB抽提法是经典的植物DNA提取法,可以用于多种不同类型植物样品DNA的提取,获得的量很高,但是纯度一般,但是足够用于大多数分子生物学实验。CTAB抽提液的有效成分主要由CTAB、氯化钠、EDTA等组成,附送 2-ME,临用前加入2-ME,使其更有效,更稳定。
使用参考
1、 取5ml或适量CTAB抽提液,按CTAB抽提液:2-ME=50:1的比例混匀,置于15ml或其它规格的离心管中,60℃预热。
2、称取1.0~1.5g或适量新鲜植物组织或叶片,用预冷的液氮或干冰冷却研钵或匀浆器,将新鲜植物组织或叶片粉碎成细粉末,将冷冻的组织转移至离心管中。
3、向粉碎的组织中按4~5ml/g加入预热的CTAB抽提液,充分混匀,65℃温育15~60min,并不时混匀。
4、加入等体积24:1氯,颠倒充分混匀,8000g离心5min~10min,回收上层水相(即上清液,该上清液中含有所需DNA)。
5、转移上清液至新的离心管中,加入1/2~2/3体积预冷的异丙醇,轻轻混匀,室温静置使核酸沉至管底。如果观察不到沉淀,可在室温下静置数小时至过夜。
6、 2000g离心2min,轻轻弃上清液。
7、在松散的DNA沉淀物上加入75%乙醇,室温静置20min,4000g离心10min,轻轻弃上清液。
8、自然干燥DNA,加入适量去离子水或TE缓冲液,低温保存。
注意事项
1、 如果每次的使用量很小,可以适当分装后再使用。
2、 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
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文献和实验1. 液氮研磨1g左右的植物组织,转移到离心管中。改用研磨枪在冰上研磨,不加β-巯基乙醇 研磨时可加入适量的PVP、β-巯基乙醇。若CTAB准备2-3天内用完,则可将PVP、β-巯基乙醇直接加入其中。 2. 加入500µl的2*CTAB (60℃或65℃预热) ,颠倒混合均匀后在60℃或65℃水浴30m-1h小时,其间要上下颠倒混匀数次。 3.取出离心管,加入
℃ Add 166 µl of 3M NaCl and mix thoroughly Add 80 µl of 10% CTAB in 0.7 M NaCl and thoroughly mix Incubate for 10 minutes at 65 ℃ In the hood in the back: Add an approximately equal volume of chloroform (700 µl) In the lab: Centrifuge
%26micro;l of 3M NaCl and mix thoroughly Add 80 %26micro;l of 10% CTAB in 0.7 M NaCl and thoroughly mix Incubate for 10 minutes at 65 ℃ In the hood in the back: Add an approximately equal volume of chloroform (700 %26micro;l)
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