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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存:
41
- 保质期:
有效期1年
- 供应商:
上海博湖
- 保存条件:
RT
- 规格:
瓶
产品参数:
| 产品名称 | ELISA终止液 |
| 英文名称 | |
| 货号 | BH-DB026 |
别名:ELISA Stop Solution
储存条件:RT,有效期:1年
外观(性状)液体
单位:瓶
本品用于ELISA(酶联免疫吸附实验)中显色反应的终止。
操作说明:
在ELISA实验过程中,酶标板中加入TMB显色至预期深浅后,加入50ul的ELISA终止液终止反应,30分钟内在450nm处测定吸光值。
注意事项:
1、不同细胞或组织样品所需的固定时间有所不同,应当根据细胞或组织的种类以及组织块的大小来调整固定时间。
2、虽然作用温和,但能硬化组织,固定时间过久会导致组织变脆,切片时易碎。因此固定时间通常不宜超过 24 小时。
3、醛基与抗原蛋白的氨基交联形成羧甲基,使抗原决定簇的三维构象出现空间障碍。分子间交联形成的网格结构可能部分或 完全掩盖某些抗原决定簇,使之不能充分暴露,可造成假阴性的染色,影响免疫组化结果。因此,4%固定的细胞或组织样品在进行免疫组化检测时,有时需要对抗原先进行修复,然后才能进行免疫染色等后续操作。
4、本产品对人体有害,操作时请小心,并注意有效防护以避免直接接触人体或吸入体内。
5、为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作
操作步骤 :
根据使用量,取每 1mL RIPA 加入 10uL PMSF,使 PMSF 的zui终浓度为 1mM。混匀备用(PMSF 现用现加)。
1、样品前处理:
a)对于贴壁细胞:去除培养液,用 PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍。按照 6 孔板每孔细胞量加入150-250 uL 裂解液的比例加入裂解液。用枪吹打数下,使裂解液和细胞充分接触。
b)对于悬浮细胞:离心收集细胞,用手指把细胞用力弹散。按照6孔板每孔细胞量加入150-250 uL 裂解液的比例加入裂解液,再用手指轻弹以充分裂解细胞。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。如果细胞量较多,必需分装成 50-100 万细胞/管,然后再裂解。
c)对于组织样品: 把组织剪切成细小的碎片。按照每 20mg 组织加入 150-250 uL 裂解液的比例加入裂解液。(如果裂解不充分可以适当添加更多的裂解液,如果需要高浓度的蛋白样品,可以适当减少裂解液的用量)。用玻璃匀浆器匀浆,直至充分裂解。
2、后处理:
将裂解后的样品 10000-14000g 离心 3-5 分钟,取上清,即可进行后续的蛋白浓度测定、SDS-PAGE、Western blotting 和免疫沉淀等操作。
温馨提示:
工作液与浓缩液选择的技巧,以及各自的优势。
1,工作液的优势:工作液操作方便,降低实验操作步骤,对于要求无菌的实验,降低染菌风险。
2,浓缩液的优势:浓缩液成本相对较低,实验范围更广,对于不要求无菌的实验,可以进行多种浓度的实验分析以及比较。而且由于浓度高,保存更加稳定。
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文献和实验ELISA 实验失败可能由多种因素造成。在实验前阅读并充分了解产品说明书,可以一定程度上避免出现意想不到的结果。参考以下提示来避免实验出现问题。 1. 检查试剂盒的保质期,保证所有试剂按说明书上的建议正确保存; 2. 检查试剂溶液是否存在不稳定或降解迹象,如沉淀或变色等; 3. 底物溶液应为无色; 4. 试剂制备和保存时应使用干净的一次性塑料吸量管、枪头和容器。每次加液(样品、标准品及其他试剂)时,及时更换枪头,避免交叉污染; 5. 确保孵育时间和温度与规定的高度一致; 6. 盒中试剂不能
作为 ELISA 的最后一步,检测结果的计算对整个实验十分重要。 以夹心法为例。 1. ELISA 的样本通常要设置 1~2 个复孔进行检测,分别求出标准品、实验组样本的吸光度的平均值。单个样本的检测值不应超出平均值的 20%。 2. 样本的 OD(吸光度)平均值要减去标准品浓度为 0 时的 OD 平均值。 3. 建立标准曲线 在对数坐标图上拟合四参数的逻辑函数曲线(X 轴上为标准品浓度,Y 轴为对应的 OD 值)。推荐使用 origin 软件。 详细步骤如下: 第一步: 输入 OD 值
一、ELISA的原理 ELISA的基础是抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记。结合在固相载体表面的抗原或抗体仍保持其免疫学活性,酶标记的抗原或抗体既保留其免疫学活性,又保留酶的活性。在测定时,受检标本(测定其中的抗体或抗原)与固相载体表面的抗原或抗体起反应。用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与液体中的其他物质分开。再加入酶标记的抗原或抗体,也通过反应而结合在固相载体上。此时固相上的酶量与标本中受检物质的量呈一定的比例。加入酶反应的底物后,底物被酶催化成为有色产物,产物的量与标本中
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