普通RIPA裂解液(组织/细胞)

产品名称：普通RIPA裂解液(组织/细胞)
别名:蛋白提取试剂盒
英文名称:RIPA buffer
储存条件:附件PMSF-20℃，裂解液4℃。有效期:1年
单位:瓶

产品名称	普通RIPA裂解液(组织/细胞)
英文名称	RIPA buffer
货号	BH-DB021

普通RIPA裂解液(组织/细胞)产品配有一支PMSF（100mM，1.5ml）
产品简介：RIPA 组织/细胞裂解液是利用表面活性剂等来裂解细胞膜（包括核膜）。本试剂提取的蛋白为可溶性总蛋白。
使用说明 ：
如发现RIPA有沉淀，请放室温半小时或者常温水浴使沉淀溶解。
根据使用量，取每1ml RIPA 加入10ul PMSF，使PMSF的最终浓度为1mM，混匀备用 （PMSF现用现加）。
1、样品前处理：
a)对于贴壁细胞：去除培养液，用 PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍。按照 6 孔板每孔细胞量加入150-250 ul裂解液的比例加入裂解液。用枪吹打数下，使裂解液和细胞充分接触。
b)对于悬浮细胞：离心收集细胞，按照6孔板每孔细胞量加入150-250ul裂解液的比例加入裂解液，用手指轻弹悬浮细胞以充分裂解。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。如果细胞量较多，必需分装成 5-10×105细胞/管，然后再裂解。
c)对于组织样品：把组织剪切成细小的碎片。按照每20mg组织加入150-250ul裂解液的比例加入裂解液
(如果裂解不充分可以适当添加更多的裂解液，如果需要高浓度的蛋白样品，可以适当减少裂解液的用量) 。
用玻璃匀浆器匀浆，直至充分裂解。
2、后处理：
将裂解后的样品10000-14000g离心3-5分钟，取上清，即可进行后续的PAGE、Western和免疫沉淀等操作。

操作步骤：
Ⅰ 实体组织蛋白的提取
 1． 在每1mL 冷Lysis Buffer加入10 μL磷酸酶抑制剂， 1 μL蛋白酶抑制剂和 5μL 100mM PMSF，混匀。冰上保存数分钟待用。
2．  每100mg固体组织置于培养皿中，手术剪剪碎成3mm×3mm左右的小块，加入0.5～1 mL冷 Lysis Buffer，玻璃匀浆器上下手动匀浆15次，注意低温操作；
3． 取组织匀浆液转移到1.5mL预冷的离心管，离心10000转/分，4℃离心5 min；
4． 取上清转移至新的预冷的离心管中，即为全蛋白提取物，蛋白定量（Bradford法、BCA法）；
5． 分装保存于-70℃,避免反复冻融。
Ⅱ 培养细胞蛋白提取
1． 贴壁培养的细胞，吸去培养基后，加入10mL/150mm培养板的冷PBS洗两次，每次振摇数次以尽量去除培养液；
2． 悬浮培养的细胞或用细胞刮子刮下的贴壁细胞，将细胞及培养液移至离心管中， 1000转/分离心10 min，再用10mL/150mm培养板的冷PBS，1000转/分离心5 min洗两次；
3． 在每 1mL冷 Lysis Buffer加入10μL磷酸酶抑制剂， 1μL蛋白酶抑制剂和5μL 100mM PMSF，混匀。冰上保存数分钟待用。
4． 细胞洗涤后，转至新的预冷的离心管中，加入上述配制好的冷Lysis Buffer，加入量如下表所示：

细胞数量	Lysis Buffer加入量
107个	0.5 mL～1 mL
5×106个	0.2 mL～0.5 mL

5．置于4℃摇床平台上，温和振荡15 min；
6． 14,000rpm，4℃离心15min，取上清为全蛋白提取物, 蛋白定量（Bradford法、BCA法）；
7． 分装保存于-70℃,避免反复冻融。
以下是普通RIPA裂解液(组织/细胞)的相关产品：
原始广泛存在蛋白1抗体  Anti-AUP1  WB IHC-P
锚蛋白重复结构域蛋白37抗体  Anti-ANKRD37  WB IHC-P
α1,4-半乳糖基转移酶1  Anti-A4GALT  WB IHC-P
血管紧张素Ⅱ受体相关蛋白抗体  Anti-AGTRAP  WB IHC-P
血管紧张素1转换酶抑制剂抗体  Anti-ACEI  WB IHC-P
淋巴细胞抗原抗体6重复位点蛋白G6F抗体  Anti-LY6G6F  WB IHC-P
桩蛋白抗体  Anti-Leupaxin  WB IHC-P
脂蛋白受体相关蛋白/低密度脂蛋白相关蛋白的相关蛋白1抗体  Anti-LRPAP1  WB IHC-P
皮屑样蛋白2抗体  Anti-LEPREL2  WB IHC-P
层粘蛋白α3抗体  Anti-LAMA3  WB IHC-P
无水二氢钠（标准品）  Sodium Dihydrogen Phosphate Anhydrous  质量规格：供检查用 小鼠山梨醇脱氢酶(SDH)ELISA试剂盒 ，英文名： SDH ELISA Kit
长春西汀（标准品）  Vinpocetine  质量规格：含量测定 小鼠上皮中性粒细胞活化肽78(ENA-78/CXCL5)ELISA试剂盒 ，英文名： ENA-78/CXCL5 ELISA Kit
枸橼酸铋雷尼替丁（标准品）  Ranitidine bismuth citrate  质量规格：供检查用 小鼠少突胶质细胞髓鞘糖蛋白抗体(OMgp-Ab)ELISA试剂盒 ，英文名： OMgp-Ab ELISA Kit
丹曲林钠（标准品）  Dantrolene Sodium hemiheptahydrate  质量规格：含量测定 小鼠神经胶质纤维酸性蛋白(GFAP)ELISA检测试剂盒Mouseglialfibrillaryacidicprotein,GFAPELISAKit 96T/48T
呱西替柳（标准品）  Guacetisal  质量规格：含量测定 小鼠神经胶质纤维酸性蛋白(GFAP)ELISA试剂盒 ，英文名： GFAP ELISA Kit
盐酸黄酮哌酯（标准品）  Flavoxate hydrochloride  质量规格：含量测定 小鼠神经趋化蛋白(fractalkine/CX3CL1)ELISA试剂盒 ，英文名： fractalkine/CX3CL1 ELISA Kit
3-甲基黄酮-8-羧酸（标准品）  3-Methylflavone-8-carboxylic acid  质量规格：供检查用 小鼠神经生长导向因子Slit2ELISA检测试剂盒MouseNeuronalChemorepelleSlit2ELISAKit 96T/48T
盐酸番茄碱（标准品）  Tomatidine hydrochloride  质量规格：HPLC≥98%,标准品 小鼠神经生长因子(NGF)ELISA检测试剂盒MouseNervegrowthfactor,NGFELISAkit 96T/48T
盐酸头孢唑兰  Cefozopran hydrochloride  质量规格：>97%,BR 小鼠神经生长因子(NGF)ELISA试剂盒 ，英文名： NGF ELISA Kit
阿嗪米特（标准品）  Azintamide  质量规格：含量测定 小鼠神经生长因子前体(proNGF)ELISA试剂盒 ，英文名： proNGF ELISA Kit
小鼠色素上皮衍生因子(PEDF)ELISA检测试剂盒Mousepigmeepithelium-derivedfactor,PEDF 96T/48T 普伐他汀四甲基丁胺（标准品）  Pravastatin1,1,3,3-tetramethylbutylamine  质量规格：含量测定
小鼠色素上皮衍生因子(PEDF)ELISA试剂盒 ，英文名： PEDF ELISA Kit 盐酸伊托必利（标准品）  Itopride Hydrochloride  质量规格：含量测定
小鼠沙眼衣原体抗体IgG(CT IgG)ELISA试剂盒 ，英文名： CT IgG ELISA Kit 福辛普利钠（标准品）  Fosinopril sodium  质量规格：含量测定
小鼠山梨醇脱氢酶(SDH)ELISA试剂盒 ，英文名： SDH ELISA Kit 无水二氢钠（标准品）  Sodium Dihydrogen Phosphate Anhydrous  质量规格：供检查用
小鼠上皮中性粒细胞活化肽78(ENA-78/CXCL5)ELISA试剂盒 ，英文名： ENA-78/CXCL5 ELISA Kit 长春西汀（标准品）  Vinpocetine  质量规格：含量测定
小鼠少突胶质细胞髓鞘糖蛋白抗体(OMgp-Ab)ELISA试剂盒 ，英文名： OMgp-Ab ELISA Kit 枸橼酸铋雷尼替丁（标准品）  Ranitidine bismuth citrate  质量规格：供检查用
小鼠神经胶质纤维酸性蛋白(GFAP)ELISA检测试剂盒Mouseglialfibrillaryacidicprotein,GFAP 96T/48T 丹曲林钠（标准品）  Dantrolene Sodium hemiheptahydrate  质量规格：含量测定
小鼠神经胶质纤维酸性蛋白(GFAP)ELISA试剂盒 ，英文名： GFAP ELISA Kit 呱西替柳（标准品）  Guacetisal  质量规格：含量测定
小鼠神经趋化蛋白(fractalkine/CX3CL1)ELISA试剂盒 ，英文名： fractalkine/CX3CL1 ELISA Kit 盐酸黄酮哌酯（标准品）  Flavoxate hydrochloride  质量规格：含量测定
小鼠神经生长导向因子Slit2ELISA检测试剂盒MouseNeuronalChemorepelleSlit2 96T/48T 3-甲基黄酮-8-羧酸（标准品）  3-Methylflavone-8-carboxylic acid  质量规格：供检查用
普通RIPA裂解液(组织/细胞)Ratmacrophageinflammatoryprotein2,MIP-2ELISA试剂盒大鼠巨噬细胞炎性蛋白2(MIP-2)ELISA试剂盒规格：96T/48T 腺苷一二钠盐 HPLC≥98% 20mg
小鼠血管生成素样蛋白2(ANGPTL2)ELISA试剂盒 ，英文名： ANGPTL2 ELISA Kit 腺苷二二钠盐 HPLC≥98% 20mg
兔子前列腺素E1(PGE1)ELISA检测试剂盒rabbitProstaglandinE1,PGE1ELISAKit 96T/48T 腺苷三二钠盐 HPLC≥98% 20mg
犬S100B蛋白(S100B)试剂盒 Dog S100 calcium binding protein B,S100B ELISA kit 大豆异黄酮 80% 20mg
英文名称Human-3ELISAKit人神经营养素3(-3)规格：96T/48T 栀子 对照药材 1g
胆转运功能检测试剂盒20 硬脂酸  GC≥98% 20mg
Ratmacrophageinflammatoryprotein3α,MIP-3αELISA试剂盒大鼠巨噬细胞炎性蛋白3α(MIP-3α/CCL20)ELISA试剂盒规格：96T/48T KFY HPLC≥99% 20mg
小鼠血管生成素样蛋白1(ANGPTL1)ELISA试剂盒 ，英文名： ANGPTL1 ELISA Kit 苯甲酰乌头原碱 HPLC≥98% 20mg
兔子前列腺素E2(PGE2)ELISA检测试剂盒rabbitProstaglandinE2,PG-E2ELISAKit 96T/48T 苯甲酰新乌头原碱 HPLC≥98% 20mg
犬P选择素(SELP)试剂盒 Dog P-selectin,SELP ELISA kit 苯甲酰乌头原碱 HPLC≥98% 20mg
固定液的应用：
1．单纯固定液(1)4％中性甲醛固定液：zui常用的固定液，能满足常规HE及免疫组化、PCR等工作。一般无特殊要求的病理标本均适用。尤其值得注意的是，中性甲醛是以pH7 2～7 4的磷酸缓冲液为溶剂配制的，其固定效果及对组织抗原性的保存均优于一般的4％甲醛固定液。此固定液配制后应密封…
1．单纯固定液
(1)4％中性甲醛固定液：zui常用的固定液，能满足常规HE及免疫组化、PCR等工作。一般无特殊要求的病理标本均适用。尤其值得注意的是，中性甲醛是以 pH 7.2～7.4的磷酸缓冲液为溶剂配制的，其固定效果及对组织抗原性的保存均优于一般的4％甲醛固定液。此固定液配制后应密封并保存在阴凉处，保存时间不 超过一个月。
(2)乙醇固定液：使用时以80％～95％的浓度为宜，具有硬化、固定、脱水等作用，对组织渗透力较弱，因此很少单独使用，但其保存组织中的核酸强于中性甲醛，故常用于有核酸操作的实验或检查，如果用于证明尿酸结晶和保存糖原，可用100%乙醇固定组织。
(3)4％的多：主要用于培养细胞的固定。
2．混合固定液
(1)乙醇一甲醛(乙醇－福尔马林，AF)固定液：适用于皮下组织中肥大细胞的固定。该固定液有固定兼脱水作用，固定后的标本可直接入95％乙醇脱水。
(3)Bouin固定液：特别适用于睾丸活检组织的固定。Bouin液对组织固定较均匀，收缩很少，不会使组织变硬变脆。需现配现用。
(4)Carnoy固定液：穿透能力强，可很好的固定细胞质和细胞核，特别适合于固定外膜致密的组织，亦适用于糖原及尼氏小体的固定。
(5)Zenker固定液：经此液固定的标本，细胞核和细胞质染色颇为清晰，但成本较昂贵且需特殊处理汞。该固定液要避免接触阳光，以免引起化学变化而失效