- ￥180 - 1600
- 普利莱
- 北京
- P1513-1/2/3
- 2025年12月24日
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普利莱
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2500次/200次/500次
| 规格： | 2500次 | 产品价格： | ￥1600.0 |
|---|---|---|---|
| 规格： | 200次 | 产品价格： | ￥180.0 |
| 规格： | 500次 | 产品价格： | ￥350.0 |
描述：Bicinchoninic acid (BCA )法是近来广为应用的蛋白定量方法。其原理与Lowery法蛋白定量相似，即在碱性环境下蛋白质与Cu2+络合并将Cu2+还原成Cu1+。BCA与Cu1+结合形成稳定的紫蓝色复合物，在562 nm处有高的光吸收值并与蛋白质浓度成正比，据此可测定蛋白质浓度。与Lowery法相比，BCA蛋白测定方法灵敏度高，操作简单，试剂及其形成的颜色复合物稳定性俱佳，并且受干扰物质影响小。与Bradford法相比，BCA法的显著优点是不受去垢剂的影响。
组成与储存：
(1) BCA Reagent 100 ml，室温保存；
(2) Cu Reagent 2 .5ml，室温保存；
(3) BSA standard 4 mg/ml 1 ml，−20ºC冻存。1.5年有效。
可进行500次微板(microplate)测定或100次1 ml比色杯测定。
所需设备：比色计、酶标仪、或微板比色仪，最佳工作波长562 nm，可在540-590 nm之间。
工作溶液(Working Reagent, WR)配制：将50体积BCA Reagent与1体积Cu Reagent混合即为WR工作试剂，呈嫩绿色，立即使用或者4℃保存不超过一天。
标准蛋白溶液配制：用双蒸水、0.9%生理盐水、PBS、或与待测蛋白样品匹配之缓冲液进行倍比稀释,得到BSA标准溶液80、40、20、10、5、2.5、1.25 µg/ml。
蛋白测定
微量蛋白质浓度线性检测范围为1-100 µg/ml。标准测定用1 cm光程玻璃或塑料比色皿，反应终体积1.2 ml，用比色计测定。微板测定用96孔板，反应终体积240 µl，用酶标仪、微板比色仪测定。
注意事项
表2 BCA法物质干扰及耐受的最大浓度
参考文献：
Smith P et al, 1995, Measurment of protein using bicinchiconic acid, Anal. Biochem. 150, 76-85
组成与储存：
(1) BCA Reagent 100 ml，室温保存；
(2) Cu Reagent 2 .5ml，室温保存；
(3) BSA standard 4 mg/ml 1 ml，−20ºC冻存。1.5年有效。
可进行500次微板(microplate)测定或100次1 ml比色杯测定。
所需设备：比色计、酶标仪、或微板比色仪，最佳工作波长562 nm，可在540-590 nm之间。
工作溶液(Working Reagent, WR)配制：将50体积BCA Reagent与1体积Cu Reagent混合即为WR工作试剂，呈嫩绿色，立即使用或者4℃保存不超过一天。
标准蛋白溶液配制：用双蒸水、0.9%生理盐水、PBS、或与待测蛋白样品匹配之缓冲液进行倍比稀释,得到BSA标准溶液80、40、20、10、5、2.5、1.25 µg/ml。
蛋白测定
微量蛋白质浓度线性检测范围为1-100 µg/ml。标准测定用1 cm光程玻璃或塑料比色皿，反应终体积1.2 ml，用比色计测定。微板测定用96孔板，反应终体积240 µl，用酶标仪、微板比色仪测定。
- 标准测定：将0.2 ml标准品或待测样本与0.8ml WR工作溶液混合。微板测定：将50 µl标准品或待测样本与200 µl WR工作溶液混合。
- 37ºC反应30min；也可25ºC室温2小时或过夜。
- 将反应管温度冷却至室温。测定562 nm (可在540-590 nm之间)光密度(OD)值。
- 绘制标准曲线。X轴为BSA标准蛋白浓度(mg/ml或µg/ml)，Y轴为各标准管对应的OD562值。用Excel拟合曲线并计算蛋白浓度。
| 微板(microplate)测定方案 | 标准比色杯测定方案 | ||||
| 标号 | 蛋白浓度(µg/ml) | 标准或待测蛋白体积 (µl) | WR工作试剂(µl) | 标准或待测蛋白体积 (ml) | WR工作试剂(ml) |
| 1 | 0 | 50 | 200 | 0.2 | 0.8 |
| 2 | 1.25 | 50 | 200 | 0.2 | 0.8 |
| 3 | 2.5 | 50 | 200 | 0.2 | 0.8 |
| 4 | 5 | 50 | 200 | 0.2 | 0.8 |
| 5 | 10 | 50 | 200 | 0.2 | 0.8 |
| 6 | 20 | 50 | 200 | 0.2 | 0.8 |
| 7 | 40 | 50 | 200 | 0.2 | 0.8 |
| 8 | 80 | 50 | 200 | 0.2 | 0.8 |
| 待测样品 | 50 | 200 | 0.2 | 0.8 | |
注意事项
- 37ºC 30min或25ºC室温反应2小时对测量较为便利，但严格来讲此时反应尚未达到终点，通常每10 min OD562值升高约2.3%。然而，通常在10min内可以测定30管而不明显影响测定精度。
- 微量蛋白质定量试剂盒 (BCA法)检测范围为1~100µg/ml。
- BCA法在样品含有脂类时光吸收值偏高。样品中EDTA或葡萄糖浓度大于10 mM不能使用BCA方法，葡萄糖浓度大于10 mM时可用改良Lowry法蛋白定量试剂盒 #P1512，EDTA大于10 mM的样品可用Bradford法蛋白质定量试剂盒(# P1510)。另外，蛋白质样品经液体样品蛋白抽提试剂(#P1255)沉淀后，可彻底去除干扰BCA法、Bradford法、和Lowry法蛋白测定的物质。
- 欲使测量能耐受下面表2所提示的最大干扰物质浓度，并保持测量精度，应在蛋白标准管中加入相应浓度的干扰物质，但会给操作带来不便。
- 可测量吸附于固相支持物乳酶标板、琼脂糖、亲和层系凝胶上的蛋白。
- 每次测定应该制备单独的标准曲线。
表2 BCA法物质干扰及耐受的最大浓度
| Buffer Systems | Sodium phosphate 25 mM |
| Bicine, pH 8.4 20 mM | Sucrose 40% |
| Bis-Tris, pH 6.5 33 mM | Sodium ortho-Vanadate in PBS, pH 7.2, 1 mM |
| Calcium chloride in TBS, pH 7.2 10 mM | Urea 3 M |
| CHES, pH 9.0 100 mM | Chelating agents |
| Cobalt chloride in TBS, pH 7.2 0.8 M | EDTA 10 mM |
| Ferric chloride in TBS, pH 7.2 10 mM | EGTA,any level, not compatible |
| HEPES 100 mM | Sodium citrate 200 mM |
| MOPS, pH 7.2 100 mM | Detergents |
| Nickel chloride in TBS 10 mM | Brij-35 5% |
| PBS; no interference | Brij-52 1% |
| NaCl (0.15 M), pH 7.2, no interference | CHAPS 5% |
| PIPES, pH 6.8 100 mM | CHAPSO 5% |
| Sodium acetate, pH 4.8 200 mM | Deoxycholic acid 5% |
| Sodium citrate, pH 4.8 or pH 6.4 200 mM | Nonidet P-40 (Igepal CA-630) 5% |
| Tricine, pH 8.0 25 mM | SDS 5% |
| Triethanolamine, pH 7.8 25 mM | Span 20 1% |
| Tris 250 mM | Triton X-100 5% |
| TBS buffer, no interference | Triton X-114 1% |
| 1 x SDS-PAGE loading buffer, no interference | Tween-20 5% |
| Zinc chloride (10 mM) in TBS, pH 7.2, 10 mM | Tween-60 5% |
| Buffer Additives | Tween-80 5% |
| Ammonium sulfate 1.5 mM | Zwittergents 1% |
| Aprotinin 10 mg/L | Reducing & Thiol Containing Agents |
| Glucose 10 mM | Dithioerythritol (DTE) 1 mM |
| Glycerol 10% | Dithiothreitol (DTT) 1 mM |
| Guanidine•HCl 4 M | 2-Mercaptoethanol 1 mM |
| HCl 100 mM | Tributyl Phosphine 0.01% |
| Imidazole 50 mM | Solvents |
| Leupeptin 10 mg/L | |
| PMSF 1 mM | Acetonitrile 10% |
| Sodium azide 0.20% | DMF 10% |
| Sodium bicarbonate 100 mM | DMSO 10% |
| Sodium chloride 1 M | Ethanol 10% |
| Sodium hydroxide 100 mM | Methanol 10% |
参考文献：
Smith P et al, 1995, Measurment of protein using bicinchiconic acid, Anal. Biochem. 150, 76-85
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- Liu X, Jia R, Meng X, et al. Retinal degeneration in humanized mice expressing mutant rhodopsin under the control of the endogenous murine promoter[J]. Experimental Eye Research, 2022, 215: 108893
- Wufuer R, Fan Z, Yuan J, et al. Distinct roles of Nrf1 and Nrf2 in monitoring the reductive stress response to dithiothreitol (DTT)[J]. Antioxidants, 2022, 11(8): 1535.
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相关实验
发光基团pNA游离出来，可通过酶标仪或分光光度计（λ=405nm 或400nm）测定其吸光值，通过测定吸光度来检测Caspase的活性。 二、自备试剂 PBS、蛋白定量试剂盒(Bradford法,选用) 三、实验操作指南 1．准备工作： A、 裂解液溶解后混匀，冰浴备用。 B、 裂解液工作液制备：每50 μL裂解液中加入0.5 μL DTT，冰浴备用。 2．样本处理： A、悬浮细胞 1） 诱导完成后的细胞，2000 rpm离心5 min，弃上清，收集细胞，PBS轻轻重悬细胞并计数
%匀浆（例如10mg加入100ulRIPA裂解液），进行匀浆。冰上孵育20min后，13000rpm（4度）离心20min。取上清，分装-80度保存，待测。 2. BCA法蛋白定量 按照BCA蛋白定量试剂盒使用说明操作，测定蛋白浓度。 1、根据样品数量，试剂A：B=50:1配制适量BCA工作液，充分混匀。BCA工作液室温24小时内稳定。 2、完全溶解蛋白标准品，取10μl稀释至100μl，使终浓度为0.5mg/ml。 3、将标准品按0, 1, 2, 4, 8, 12, 16, 20μl加
在上清中。 3. 取离心后的上清，转移至新管，立即使用或－70°C冻存。通常上清内植物色素已基本去除，如有少量残留亦不影响蛋白定量及电泳实验。建议用BCA方法进蛋白定量（我公司的BCA蛋白定量试剂盒#P1511）。 如进行双向电泳或欲彻底清除色素等杂质可进行以下内骤: 1. 取上清液加入4倍体积的丙酮或甲醇混匀，－20°C至少一小时以充分沉淀蛋白质。 2. 12000 g离心15分钟沉淀蛋白。 3. 弃去上清。自然干燥蛋白沉淀，依据试验将沉淀溶于相应的缓冲液。如进行Western
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