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- 2025年07月10日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
37
- 英文名：
Recombinant human epidermal growth factor
- 保质期：
详见说明书
- 供应商：
上海研生
- 保存条件：
低温冷藏
- 规格：
50μg|200μg|1mg
【细胞冻存】
待细胞生长状态良好时，可进行293/HEK-293细胞|细胞冻存。贴壁细胞冻存时，弃去培养基后加入少量胰酶，细胞变圆脱落后，加入约1ml含血清的培养基后加入冻存管中，再添加10%DMSO后进行冻存。悬浮细胞冻存时，应将细胞收集，1000RPM条件下离心4分钟，少量保存上清液(防止细胞吸走)，加入部分新鲜培养基，加入到冻存管中，在冻存管中加入10%DMSO后进行冻存。
中文名称：重组hEGF规格
英文名称：Recombinant human epidermal growth factor
产品规格：50μg|200μg|1mg
发货周期：1～3天
本品表皮生长因子是一种蛋白家族的生长因子，该家族的蛋白胞外区至少含有一个由6个保守的Cys组成3对二硫键结构域（EGF结构单元）。EGF具有促进间叶细胞和上皮细胞的增殖和分化。在体外，EGF是纤维母细胞、上皮细胞和内皮细胞的有丝分裂原，促进上皮细胞培养中的集落形成。在体内，EGF促进上皮细胞和血管的形成，并抑制胃酸的分泌。
说明重组人EGF由原核表达系统（E.coli）重组表达制备，由53个氨基酸残基组成的非糖基化多肽，分子量为6.2kDa。
制剂成分本产品为无菌冻干粉剂，由含20mM磷酸盐，50mM氯化钠pH为7.0的蛋白溶液经0.2um过滤后分装冻干。
复溶建议将冻干rHuEGF溶解在灭菌超纯水（18MΩ-cm）中，浓度不低于100μg/ml，以待进一步稀释至工作浓度。
质量控制
1.生物学活性小鼠BALB/c3T3细胞剂量依赖增殖试验测定ED50小于2ng/ml,相应比活性为5.0×10^5IU/mg。
2.纯度纯度大于95.0%（高效液相色谱，及还原和非还原SDS-PAGE银染）。
3.分子量还原性SDS-PAGE，分子量为6.0KD±10%。
4.等电点IEF分析，等电点为4.0～5.0。
5.氨基酸序列N末端氨基酸序列为Asn-Ser-Asp-Ser-Glu。
6.内毒素残留LAL检测，小于0.1ng/μg(1EU/μg)。
储存条件-18℃，有效期一年。
【培养指南】
对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察Ⅱ型肺泡上皮细胞|细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
3. 按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。
4. 将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
【复苏的原则】
产品名称快速融化：必须将冻存在-196℃液氮中的细胞快速融化至37℃，使细胞外冻存时的冰晶迅速融化，避免冰晶缓慢融化时进入细胞形成再结晶，对细胞造成损害。复旦细胞库全国各地均可发货，全国统一价格，本公司出售的所有细胞仅供科研使用。
细胞的种类：
第一种：
是冻存产品，由液氮直接拿出，干冰运输给客户。一般不推荐这种，也较少使用这种方式，因为复苏手法对于细胞状态影响较大，一旦细胞状态不好，很难说是细胞自身不行，还是复苏没操作好；另外温度对细胞、基因功能状态影响很大，也不是细胞储存的zui好方式，快递时间也很难控制，多种因素影响产品的质量；干冰运输需要额外添加400元的运费(顺丰)。
第二种：
是我们复苏好细胞，QC通过后，T-25灌满培养基常温运输给客户，排除复苏造成影响，常温运输也对细胞影响也不大，只需加25元运费(顺丰)。
质量保证：我们的细胞株来源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等，购买到货后，由我们实验室扩增、冻存，冻存的产品全部经过QC检测，100%进口来源，100%保证5代以内，活力>95%，无细菌、真菌、支原体污染。的冻存是细胞培养的基本操作，不同的实验室采用的方法略有差异，但是都会遵循慢冻速溶的宗旨。
细胞培养操作规程：
一．培养基及培养冻存条件准备：
1）准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640：GIBCO，货号21875-091)，90%；优质胎牛血清，10%。
2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。
3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配，液氮储存。
二．细胞处理：
1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于冻存管盖部）摇晃解冻，移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。
2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：
方法一：收集细胞，1000RPM，常温条件下离心5分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
人游离状FT4定量检测试剂盒 免疫测定
猪可溶性血管细胞粘附分子sVCAM定量检测试剂盒 免疫测定
人状T4定量检测试剂盒 免疫测定
人三状腺原T3定量检测试剂盒 免疫测定
猪免疫球蛋白EIgE定量检测试剂盒 免疫测定
人游离睾FTESTO定量检测试剂盒 免疫测定
小鼠抵御素(Rsistin)试剂盒,ELISA分析检测试剂盒 Mouse Rsistin（m）ELISA kit
小鼠调节活蛋白(Rantes)试剂盒,ELISA分析检测试剂盒 Mouse Rantes ELISA kit
小鼠PSelectin Mouse PSelectin ELISA kit
小鼠Peiotrophin Mouse Peiotrophin ELISA kit
小鼠血小板源性生长子(PDGFAB)试剂盒,ELISA分析检测试剂盒 Mouse PlateletDerived Growth Factor，PDGF ELISA kit
小鼠血小板源性生长子可溶性受体α ( PDGF sRα)试剂盒,ELISA分析检测试剂盒 Mouse PlateletDerived Growth Factor Soluble Receptor，PDGF sRα ELISA kit
小鼠抑瘤素M(OSM)试剂盒,ELISA分析检测试剂盒 Mouse Oncostatin M，OSM ELISA KIT
重组hEGF规格 CD27抗体 IL-12/P40 ELISA Kit 白细胞介素12(IL-12/P40)ELISA试剂盒
苦参;Matrine 订购|咨询 规格 20mg
CD30抗体 IL-11 ELISA Kit 白细胞介素11(IL-11)ELISA试剂盒
京平;Genipin 订购|咨询 规格 20mg
CD48抗体 CD40/TNFRSF5 ELISA Kit 白细胞分化抗原配体40(CD40/TNFRSF5)ELISA试剂盒
胡黄连苷Ⅱ;Picroside Ⅱ 订购|咨询 规格 20mg
CD43抗体 IL-10 ELISA Kit 白细胞介素10(IL-10)ELISA试剂盒
葫芦巴;Trigonelline 订购|咨询 规格 20mg
CD44抗体 CD40L/TNFSF5 ELISA Kit 白细胞分化抗原CD40配体(CD40L/TNFSF5)ELISA试剂盒
格列喹;Gliquidone 订购|咨询 规格 20mg
整合素αX抗体 IL-6R ELISA Kit 白介素6受体(IL-6R)ELISA试剂盒
反式茴香脑;trans-Anethole 订购|咨询 规格 0.1ml
细胞表面趋化子受体5抗体 IL-20 ELISA Kit 白介素20(IL-20)ELISA试剂盒
γ-倒捻子素;γ- Mangostin 订购|咨询 规格 20mg
CD2抗体 IL-1RA ELISA Kit 白介素1受体拮抗剂(IL-1RA)ELISA试剂盒
靛蓝;Indigo 订购|咨询 规格 20mg
操作步骤(仅供参考)：
1、重组hEGF规格贴壁细胞的消化
①吸除培养液，用无菌 PBS、Hanks 液或无血清培养液洗涤细胞一次，以去除残余的血清。
②加入少量 源叶生物 Trypsin-EDTA solution，略盖过细胞即可，室温放置 0.5～2min， 不同的细胞消化时间有所不同。
③显微镜下观察，细胞明显收缩，并且肉眼观察培养器皿底部发现细胞的形态发生明显的变
化；或者用枪吹打细胞发现细胞刚好可以被吹打下来，吸除胰酶细胞消化液。加入含血清的 完全细胞培养液，吹打下细胞，即可直接用于后续实验。
④如果发现消化不足，则加入 Trypsin-EDTA solution 重新消化。
⑤如果发现细胞消化时间过长，未及吹打细胞，细胞已经有部分直接从培养器皿底部脱落， 直接用胰酶细胞培养液把细胞全部吹打下来。1000～2000g 离心 1min，沉淀细胞，尽量去除胰酶细胞消化液后，加入含血清的完全培养液重新悬浮细胞，即可用于后续实验。
2、组织的消化不同的组织需要消化的时间相差很大，通常以消化后可以充分打散组织为宜。
待细胞生长状态良好时，可进行293/HEK-293细胞|细胞冻存。贴壁细胞冻存时，弃去培养基后加入少量胰酶，细胞变圆脱落后，加入约1ml含血清的培养基后加入冻存管中，再添加10%DMSO后进行冻存。悬浮细胞冻存时，应将细胞收集，1000RPM条件下离心4分钟，少量保存上清液(防止细胞吸走)，加入部分新鲜培养基，加入到冻存管中，在冻存管中加入10%DMSO后进行冻存。
中文名称：重组hEGF规格
英文名称：Recombinant human epidermal growth factor
产品规格：50μg|200μg|1mg
发货周期：1～3天
本品表皮生长因子是一种蛋白家族的生长因子，该家族的蛋白胞外区至少含有一个由6个保守的Cys组成3对二硫键结构域（EGF结构单元）。EGF具有促进间叶细胞和上皮细胞的增殖和分化。在体外，EGF是纤维母细胞、上皮细胞和内皮细胞的有丝分裂原，促进上皮细胞培养中的集落形成。在体内，EGF促进上皮细胞和血管的形成，并抑制胃酸的分泌。
说明重组人EGF由原核表达系统（E.coli）重组表达制备，由53个氨基酸残基组成的非糖基化多肽，分子量为6.2kDa。
制剂成分本产品为无菌冻干粉剂，由含20mM磷酸盐，50mM氯化钠pH为7.0的蛋白溶液经0.2um过滤后分装冻干。
复溶建议将冻干rHuEGF溶解在灭菌超纯水（18MΩ-cm）中，浓度不低于100μg/ml，以待进一步稀释至工作浓度。
质量控制
1.生物学活性小鼠BALB/c3T3细胞剂量依赖增殖试验测定ED50小于2ng/ml,相应比活性为5.0×10^5IU/mg。
2.纯度纯度大于95.0%（高效液相色谱，及还原和非还原SDS-PAGE银染）。
3.分子量还原性SDS-PAGE，分子量为6.0KD±10%。
4.等电点IEF分析，等电点为4.0～5.0。
5.氨基酸序列N末端氨基酸序列为Asn-Ser-Asp-Ser-Glu。
6.内毒素残留LAL检测，小于0.1ng/μg(1EU/μg)。
储存条件-18℃，有效期一年。
【培养指南】
对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察Ⅱ型肺泡上皮细胞|细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
3. 按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。
4. 将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
【复苏的原则】
产品名称快速融化：必须将冻存在-196℃液氮中的细胞快速融化至37℃，使细胞外冻存时的冰晶迅速融化，避免冰晶缓慢融化时进入细胞形成再结晶，对细胞造成损害。复旦细胞库全国各地均可发货，全国统一价格，本公司出售的所有细胞仅供科研使用。
细胞的种类：
第一种：
是冻存产品，由液氮直接拿出，干冰运输给客户。一般不推荐这种，也较少使用这种方式，因为复苏手法对于细胞状态影响较大，一旦细胞状态不好，很难说是细胞自身不行，还是复苏没操作好；另外温度对细胞、基因功能状态影响很大，也不是细胞储存的zui好方式，快递时间也很难控制，多种因素影响产品的质量；干冰运输需要额外添加400元的运费(顺丰)。
第二种：
是我们复苏好细胞，QC通过后，T-25灌满培养基常温运输给客户，排除复苏造成影响，常温运输也对细胞影响也不大，只需加25元运费(顺丰)。
质量保证：我们的细胞株来源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等，购买到货后，由我们实验室扩增、冻存，冻存的产品全部经过QC检测，100%进口来源，100%保证5代以内，活力>95%，无细菌、真菌、支原体污染。的冻存是细胞培养的基本操作，不同的实验室采用的方法略有差异，但是都会遵循慢冻速溶的宗旨。
细胞培养操作规程：
一．培养基及培养冻存条件准备：
1）准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640：GIBCO，货号21875-091)，90%；优质胎牛血清，10%。
2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。
3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配，液氮储存。
二．细胞处理：
1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于冻存管盖部）摇晃解冻，移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。
2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：
方法一：收集细胞，1000RPM，常温条件下离心5分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
人游离状FT4定量检测试剂盒 免疫测定
猪可溶性血管细胞粘附分子sVCAM定量检测试剂盒 免疫测定
人状T4定量检测试剂盒 免疫测定
人三状腺原T3定量检测试剂盒 免疫测定
猪免疫球蛋白EIgE定量检测试剂盒 免疫测定
人游离睾FTESTO定量检测试剂盒 免疫测定
小鼠抵御素(Rsistin)试剂盒,ELISA分析检测试剂盒 Mouse Rsistin（m）ELISA kit
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小鼠血小板源性生长子(PDGFAB)试剂盒,ELISA分析检测试剂盒 Mouse PlateletDerived Growth Factor，PDGF ELISA kit
小鼠血小板源性生长子可溶性受体α ( PDGF sRα)试剂盒,ELISA分析检测试剂盒 Mouse PlateletDerived Growth Factor Soluble Receptor，PDGF sRα ELISA kit
小鼠抑瘤素M(OSM)试剂盒,ELISA分析检测试剂盒 Mouse Oncostatin M，OSM ELISA KIT
重组hEGF规格 CD27抗体 IL-12/P40 ELISA Kit 白细胞介素12(IL-12/P40)ELISA试剂盒
苦参;Matrine 订购|咨询 规格 20mg
CD30抗体 IL-11 ELISA Kit 白细胞介素11(IL-11)ELISA试剂盒
京平;Genipin 订购|咨询 规格 20mg
CD48抗体 CD40/TNFRSF5 ELISA Kit 白细胞分化抗原配体40(CD40/TNFRSF5)ELISA试剂盒
胡黄连苷Ⅱ;Picroside Ⅱ 订购|咨询 规格 20mg
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整合素αX抗体 IL-6R ELISA Kit 白介素6受体(IL-6R)ELISA试剂盒
反式茴香脑;trans-Anethole 订购|咨询 规格 0.1ml
细胞表面趋化子受体5抗体 IL-20 ELISA Kit 白介素20(IL-20)ELISA试剂盒
γ-倒捻子素;γ- Mangostin 订购|咨询 规格 20mg
CD2抗体 IL-1RA ELISA Kit 白介素1受体拮抗剂(IL-1RA)ELISA试剂盒
靛蓝;Indigo 订购|咨询 规格 20mg
操作步骤(仅供参考)：
1、重组hEGF规格贴壁细胞的消化
①吸除培养液，用无菌 PBS、Hanks 液或无血清培养液洗涤细胞一次，以去除残余的血清。
②加入少量 源叶生物 Trypsin-EDTA solution，略盖过细胞即可，室温放置 0.5～2min， 不同的细胞消化时间有所不同。
③显微镜下观察，细胞明显收缩，并且肉眼观察培养器皿底部发现细胞的形态发生明显的变
化；或者用枪吹打细胞发现细胞刚好可以被吹打下来，吸除胰酶细胞消化液。加入含血清的 完全细胞培养液，吹打下细胞，即可直接用于后续实验。
④如果发现消化不足，则加入 Trypsin-EDTA solution 重新消化。
⑤如果发现细胞消化时间过长，未及吹打细胞，细胞已经有部分直接从培养器皿底部脱落， 直接用胰酶细胞培养液把细胞全部吹打下来。1000～2000g 离心 1min，沉淀细胞，尽量去除胰酶细胞消化液后，加入含血清的完全培养液重新悬浮细胞，即可用于后续实验。
2、组织的消化不同的组织需要消化的时间相差很大，通常以消化后可以充分打散组织为宜。
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聚合酶还有Pfu，Deep Vent，Pwo，UlTma等，Pfu是其中出错率最低的，比Taq DNA聚合酶低10倍。在本论文中，为了减少hEGF 在 PCR过程的错误扩增，在人工合成hEGF的过程中使用了Vent DNA聚合酶。 随着PCR技术的不断发展成熟(扩增长度、保证性、产量和特异性等)，质粒构建过程的大多数细胞内的DNA复制将被PCR这一细胞外的DNA复制所代替，质粒构建效率将有质的飞跃。 4、密码子的偏好性的原则 酵母菌对外源基因的表达也和外源基因密码子的选用
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