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- 详细信息
- 技术资料
- 库存:
56
- 英文名:
Permeabilization Wash Buffer
- 保质期:
详见说明书
- 供应商:
上海研生
- 保存条件:
低温冷藏
- 规格:
150ml
操作步骤(仅供参考):
1、细胞膜破膜剂价格贴壁细胞的消化
①吸除培养液,用无菌 PBS、Hanks 液或无血清培养液洗涤细胞一次,以去除残余的血清。
②加入少量 源叶生物 Trypsin-EDTA solution,略盖过细胞即可,室温放置 0.5~2min, 不同的细胞消化时间有所不同。
③显微镜下观察,细胞明显收缩,并且肉眼观察培养器皿底部发现细胞的形态发生明显的变
化;或者用枪吹打细胞发现细胞刚好可以被吹打下来,吸除胰酶细胞消化液。加入含血清的 完全细胞培养液,吹打下细胞,即可直接用于后续实验。
④如果发现消化不足,则加入 Trypsin-EDTA solution 重新消化。
⑤如果发现细胞消化时间过长,未及吹打细胞,细胞已经有部分直接从培养器皿底部脱落, 直接用胰酶细胞培养液把细胞全部吹打下来。1000~2000g 离心 1min,沉淀细胞,尽量去除胰酶细胞消化液后,加入含血清的完全培养液重新悬浮细胞,即可用于后续实验。
2、组织的消化不同的组织需要消化的时间相差很大,通常以消化后可以充分打散组织为宜。
【细胞冻存】
待细胞生长状态良好时,可进行293/HEK-293细胞|细胞冻存。贴壁细胞冻存时,弃去培养基后加入少量胰酶,细胞变圆脱落后,加入约1ml含血清的培养基后加入冻存管中,再添加10%DMSO后进行冻存。悬浮细胞冻存时,应将细胞收集,1000RPM条件下离心4分钟,少量保存上清液(防止细胞吸走),加入部分新鲜培养基,加入到冻存管中,在冻存管中加入10%DMSO后进行冻存。
中文名称:细胞膜破膜剂价格
英文名称:Permeabilization Wash Buffer
产品规格:150ml
发货周期:1~3天
固定剂、破膜剂用于细胞内细胞因子染色前对细胞膜的处理。固定剂起稳定细胞膜、保持细胞膜表面抗体与抗原结合的作用;破膜剂使流动的、完整的细胞膜产生小孔以利于抗体进入细胞。用流式细胞仪检测细胞内抗原及DNA时,对待测细胞进行固定、破膜处理后,加入相应抗体或检测试剂,孵育一定时间即可上机分析。
产品组分
0.1%皂素、0.1%氮钠、1%胎牛血清、HEPES、PBS
应用实例
1.收获待测细胞,1000rpm离心10分钟,弃上清。
2.加入500ul预冷(4℃)固定剂。
3.室温孵育10分钟。
4.1000rpm离心10分钟。
5.弃上清,加入PBS洗一次,1000rpm离心10分钟。
6.弃上清,加入1.5ml破膜剂。
7.室温孵育10-15分钟。
8.1000rpm离心5分钟。
9.弃上清,加入适量破膜剂重悬细胞。
10.加入检测抗体进行染色后,用流式细胞仪进行分析。
储存条件4℃保存,避免强光直射,勿冰冻。有效期一年。
【培养指南】
对于贴壁细胞,传代可参考以下方法:
1. 弃去培养上清,用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中,置于37℃培养箱中消化1-2分钟,然后在显微镜下观察Ⅱ型肺泡上皮细胞|细胞消化情况,若细胞大部分变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
3. 按6-8ml/瓶补加培养基,轻轻打匀后吸出,在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀。
4. 将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
【复苏的原则】
产品名称快速融化:必须将冻存在-196℃液氮中的细胞快速融化至37℃,使细胞外冻存时的冰晶迅速融化,避免冰晶缓慢融化时进入细胞形成再结晶,对细胞造成损害。复旦细胞库全国各地均可发货,全国统一价格,本公司出售的所有细胞仅供科研使用。
细胞的种类:
第一种:
是冻存产品,由液氮直接拿出,干冰运输给客户。一般不推荐这种,也较少使用这种方式,因为复苏手法对于细胞状态影响较大,一旦细胞状态不好,很难说是细胞自身不行,还是复苏没操作好;另外温度对细胞、基因功能状态影响很大,也不是细胞储存的zui好方式,快递时间也很难控制,多种因素影响产品的质量;干冰运输需要额外添加400元的运费(顺丰)。
第二种:
是我们复苏好细胞,QC通过后,T-25灌满培养基常温运输给客户,排除复苏造成影响,常温运输也对细胞影响也不大,只需加25元运费(顺丰)。
质量保证:我们的细胞株来源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等,购买到货后,由我们实验室扩增、冻存,冻存的产品全部经过QC检测,100%进口来源,100%保证5代以内,活力>95%,无细菌、真菌、支原体污染。的冻存是细胞培养的基本操作,不同的实验室采用的方法略有差异,但是都会遵循慢冻速溶的宗旨。
细胞培养操作规程:
一.培养基及培养冻存条件准备:
1)准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640:GIBCO,货号21875-091),90%;优质胎牛血清,10%。
2)培养条件: 气相:空气,95%;二氧化碳,5%。 温度:37℃,培养箱湿度为70%-80%。
3)冻存液:90%血清,10%DMSO,现用现配,液氮储存。
二.细胞处理:
1)复苏细胞:将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于冻存管盖部)摇晃解冻,移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。
2)细胞传代:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。
对于悬浮细胞,传代可参考以下方法:
方法一:收集细胞,1000RPM,常温条件下离心5分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀,将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
人极低密度脂蛋白受体VLDLR定量检测试剂盒 免疫测定
人低密度脂蛋白受体相关蛋白6LRP6定量检测试剂盒 免疫测定
人N端中段骨钙素NMIDOT定量检测试剂盒 免疫测定
人高密度脂蛋白胆固HDLC定量检测试剂盒 免疫测定
人β羟βOHB定量检测试剂盒 免疫测定
人,5脱水葡萄糖/,5脱水山梨,5AG定量检测试剂盒 免疫测定
小鼠6前列(6ketoprostaglandin)试剂盒,ELISA分析检测试剂盒 Mouse 6ketoprostaglandin elisa kit
小鼠载脂蛋白A1(apoA1)试剂盒,ELISA分析检测试剂盒 Mouse apoA1 ELISA Kit
小鼠载脂蛋白B100(apoB100)试剂盒,ELISA分析检测试剂盒 Mouse apoB100 ELISA Kit
小鼠III型前胶原肽(PIIINP)试剂盒,ELISA分析检测试剂盒 Mouse PIIINP ELISA Kit
小鼠II型胶原(Collagen Type II)试剂盒,ELISA分析检测试剂盒 Mouse Collagen Type II ELISA Kit
小鼠I型胶原(Collagen Type I)试剂盒,ELISA分析检测试剂盒 ELISA试剂盒 Mouse Collagen Type I ELISA Kit
小鼠I型前胶原羧端肽(PICP)试剂盒,ELISA分析检测试剂盒 Mouse PICP ELISA Kit
细胞膜破膜剂价格 X染色体开放阅读框21抗体 HELIX-Ⅱ ELISA Kit Ⅱ型胶原螺旋肽(HELIX-Ⅱ)ELISA试剂盒
佛手柑内酯 订购|咨询 规格 HPLC≥98%;20mg
化C端结合蛋白1抗体 CTX-Ⅱ ELISA Kit Ⅱ型胶原交联C端肽(CTX-Ⅱ)ELISA试剂盒
大叶茜草素 订购|咨询 规格 HPLC≥98%;20mg
8号染色体开放阅读框192抗体 CTX-Ⅱ ELISA Kit Ⅱ型胶原C端肽(CTX-Ⅱ)ELISA试剂盒
5-O-维斯阿米醇苷 订购|咨询 规格 HPLC≥98%;20mg
钙粘附蛋白8抗体 C2C ELISA Kit Ⅱ型胶原代谢产物C2C(C2C)ELISA试剂盒
贝母辛 订购|咨询 规格 HPLC≥98%;10mg
21号染色体开放阅读框87抗体 Col Ⅱ ELISA Kit Ⅱ型胶原(Col Ⅱ)ELISA试剂盒
参皂苷Rb3 订购|咨询 规格 HPLC≥97%;20mg
21号染色体开放阅读框91抗体 KL-6/MUC1 ELISA Kit Ⅱ型肺泡细胞表面抗原(KL-6/MUC1)ELISA试剂盒
川芎嗪 订购|咨询 规格 HPLC≥98%;20mg
22号染色体开放阅读框25抗体 PⅠCP ELISA Kit Ⅰ型前胶原羧末端前肽(PⅠCP)ELISA试剂盒
熊 订购|咨询 规格 HPLC≥98%;20mg
20号染色体开放阅读框196抗体 PⅠCP ELISA Kit Ⅰ型前胶原羧端肽(PⅠCP)ELISA试剂盒
金丝桃素 订购|咨询 规格 HPLC≥98%;10mg
1、细胞膜破膜剂价格贴壁细胞的消化
①吸除培养液,用无菌 PBS、Hanks 液或无血清培养液洗涤细胞一次,以去除残余的血清。
②加入少量 源叶生物 Trypsin-EDTA solution,略盖过细胞即可,室温放置 0.5~2min, 不同的细胞消化时间有所不同。
③显微镜下观察,细胞明显收缩,并且肉眼观察培养器皿底部发现细胞的形态发生明显的变
化;或者用枪吹打细胞发现细胞刚好可以被吹打下来,吸除胰酶细胞消化液。加入含血清的 完全细胞培养液,吹打下细胞,即可直接用于后续实验。
④如果发现消化不足,则加入 Trypsin-EDTA solution 重新消化。
⑤如果发现细胞消化时间过长,未及吹打细胞,细胞已经有部分直接从培养器皿底部脱落, 直接用胰酶细胞培养液把细胞全部吹打下来。1000~2000g 离心 1min,沉淀细胞,尽量去除胰酶细胞消化液后,加入含血清的完全培养液重新悬浮细胞,即可用于后续实验。
2、组织的消化不同的组织需要消化的时间相差很大,通常以消化后可以充分打散组织为宜。
【细胞冻存】
待细胞生长状态良好时,可进行293/HEK-293细胞|细胞冻存。贴壁细胞冻存时,弃去培养基后加入少量胰酶,细胞变圆脱落后,加入约1ml含血清的培养基后加入冻存管中,再添加10%DMSO后进行冻存。悬浮细胞冻存时,应将细胞收集,1000RPM条件下离心4分钟,少量保存上清液(防止细胞吸走),加入部分新鲜培养基,加入到冻存管中,在冻存管中加入10%DMSO后进行冻存。
中文名称:细胞膜破膜剂价格
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产品规格:150ml
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固定剂、破膜剂用于细胞内细胞因子染色前对细胞膜的处理。固定剂起稳定细胞膜、保持细胞膜表面抗体与抗原结合的作用;破膜剂使流动的、完整的细胞膜产生小孔以利于抗体进入细胞。用流式细胞仪检测细胞内抗原及DNA时,对待测细胞进行固定、破膜处理后,加入相应抗体或检测试剂,孵育一定时间即可上机分析。
产品组分
0.1%皂素、0.1%氮钠、1%胎牛血清、HEPES、PBS
应用实例
1.收获待测细胞,1000rpm离心10分钟,弃上清。
2.加入500ul预冷(4℃)固定剂。
3.室温孵育10分钟。
4.1000rpm离心10分钟。
5.弃上清,加入PBS洗一次,1000rpm离心10分钟。
6.弃上清,加入1.5ml破膜剂。
7.室温孵育10-15分钟。
8.1000rpm离心5分钟。
9.弃上清,加入适量破膜剂重悬细胞。
10.加入检测抗体进行染色后,用流式细胞仪进行分析。
储存条件4℃保存,避免强光直射,勿冰冻。有效期一年。
【培养指南】
对于贴壁细胞,传代可参考以下方法:
1. 弃去培养上清,用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中,置于37℃培养箱中消化1-2分钟,然后在显微镜下观察Ⅱ型肺泡上皮细胞|细胞消化情况,若细胞大部分变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
3. 按6-8ml/瓶补加培养基,轻轻打匀后吸出,在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀。
4. 将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
【复苏的原则】
产品名称快速融化:必须将冻存在-196℃液氮中的细胞快速融化至37℃,使细胞外冻存时的冰晶迅速融化,避免冰晶缓慢融化时进入细胞形成再结晶,对细胞造成损害。复旦细胞库全国各地均可发货,全国统一价格,本公司出售的所有细胞仅供科研使用。
细胞的种类:
第一种:
是冻存产品,由液氮直接拿出,干冰运输给客户。一般不推荐这种,也较少使用这种方式,因为复苏手法对于细胞状态影响较大,一旦细胞状态不好,很难说是细胞自身不行,还是复苏没操作好;另外温度对细胞、基因功能状态影响很大,也不是细胞储存的zui好方式,快递时间也很难控制,多种因素影响产品的质量;干冰运输需要额外添加400元的运费(顺丰)。
第二种:
是我们复苏好细胞,QC通过后,T-25灌满培养基常温运输给客户,排除复苏造成影响,常温运输也对细胞影响也不大,只需加25元运费(顺丰)。
质量保证:我们的细胞株来源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等,购买到货后,由我们实验室扩增、冻存,冻存的产品全部经过QC检测,100%进口来源,100%保证5代以内,活力>95%,无细菌、真菌、支原体污染。的冻存是细胞培养的基本操作,不同的实验室采用的方法略有差异,但是都会遵循慢冻速溶的宗旨。
细胞培养操作规程:
一.培养基及培养冻存条件准备:
1)准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640:GIBCO,货号21875-091),90%;优质胎牛血清,10%。
2)培养条件: 气相:空气,95%;二氧化碳,5%。 温度:37℃,培养箱湿度为70%-80%。
3)冻存液:90%血清,10%DMSO,现用现配,液氮储存。
二.细胞处理:
1)复苏细胞:将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于冻存管盖部)摇晃解冻,移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。
2)细胞传代:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。
对于悬浮细胞,传代可参考以下方法:
方法一:收集细胞,1000RPM,常温条件下离心5分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀,将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
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风险提示:丁香通仅作为第三方平台,为商家信息发布提供平台空间。用户咨询产品时请注意保护个人信息及财产安全,合理判断,谨慎选购商品,商家和用户对交易行为负责。对于医疗器械类产品,请先查证核实企业经营资质和医疗器械产品注册证情况。
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