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- 2025年07月14日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
50
- 英文名：
Bouin Fixative Solution
- 保质期：
详见说明书
- 供应商：
上海研生
- 保存条件：
低温冷藏
- 规格：
250mL
1．Bouin固定液哪家好用盖片镊将盖玻片自75%乙醇中取出，用无菌丝绸布擦拭干净，不要用纱布；
2．将盖玻片轻轻放入6孔培养板（每孔一片）或培养皿中（每个平皿可放置2-3片）；
3．在距离紫外灯直射范围内20-30 厘米处照射2-3小时；
4．将经过计数的细胞悬浮液移入培养板中，使盖玻片完全浸在培养液中；
5．将培养板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，当贴壁细胞生长至覆盖培养板底部2/3面积时，将培养板取出，用盖片镊轻轻取出盖玻片，用蒸馏水漂洗后即可进行快速固定以及免疫细胞化学检测。
中文名称：Bouin固定液哪家好英文名称：Bouin Fixative Solution
产品规格：250mL
发货周期：1～3天
Bouin氏液是组织化学中最常用的混合型固定液之一，由苦味饱和液(1.22%)、甲醛和醋酸按1551的比例混合而成。此固定液对大多数组织固定效果良好。
产品特点
1．其渗透能力强，固定均匀，组织收缩小，染色效果好。
2．适用范围广，特别适合于富含结缔组织的标本和胚胎标本。能够软化皮肤角质，并可以用于植物组织的固定。
3．因为本产品含有味酸，会溶解火棉胶，所以如果用于火棉胶包埋，必须进行洗脱味酸处理。
4．标本尺寸不可太大，一般窄边不大于5mm。
储存条件常温运输及保存，保存期为一年。
使用方法
1．标本修块，厚度一般不超过5mm，置入本产品内固定8～24h(根据样品材料、大小不同，固定时间可能会有较大差异)。
2．固定后用70%～80%乙醇洗涤。
实验报告：
一、分离与培养：
1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，最后将组织剪成1mm3左右大小；
2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 胰酶和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；
3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织完全被消化；
4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；
5、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；
二、免疫荧光鉴定：
1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%在室温条件下固定细胞15min；
2、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
3、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；
4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；
5、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；
6、用PBS冲洗3次，每次10min，最后在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。
注意事项：
尽管经测试Annexin V-FITC反复冻融5次对于其检测效果无显著影响，但为取得良好的使用效果，3-6个月内推荐4℃保存，并适当注意避免反复冻融。
如果有细菌或真菌污染，会严重影响检测效果。
染色后宜尽快检测，时间过长可能会导致凋亡或坏死细胞的数量增加。
如果细胞收集过程中使用了胰酶，需注意设法去除残留的胰酶。残留的胰酶会消化并降解Annexin V-FITC，导致染色失败。
荧光物质均易发生淬灭，在进行荧光观察时，尽量缩短观察时间，同时在操作和存放过程中也尽量注意避光保存。
用于流式细胞仪检测时，如果发现Annexin V-FITC单独染色时出现了过多的PI假阳性细胞，并且通过调整相关设置和参数也无法改善，可以用PBS将Annexin V-FITC稀释3-10倍后再进行检测，这样通常可以有效减少假阳性的坏死细胞。
需自备PBS。
本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
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文献和实验事项(1)固定液：以Bouin固定液为佳，也可用70％乙醇固定；(2)与其他组织化学方法一样，染色过程中，应始终保持一定湿度，使切片保持湿润状态；(3)需经预实验确定FITC-凝集素的最佳工作浓度；(4)凝集素的活性部位需重金属离子维持，故可用TBS作为缓冲液，加微量的金属(CaCl2 、MgCl2 、MnCl2 各1．0mmol/L)，可增强凝集素的结合能力。
7.4，最后，补充蒸馏水至1000ml充分混合，4℃冰箱保存备用。 该固定剂适于光镜和电镜免疫细胞化学研究，用于免疫电镜时，最好加入少量新鲜配制的戊二醛，使其终浓度为0.5%～1%。该固定剂较温和，适于组织的长期保存。组织标本于该固定液中，4℃冰箱保存数月仍可获得满意的染色效果。 3．Bouin’s液及改良Bouin’s液 试剂：饱和苦味酸 40%甲醛 250ml 冰醋酸 50
，嘌呤碱基增多，形成的醛基也随之增多，Feulgen反应加强。如果水解时间过长，DNA将完全水解，反而使Feulgen反应减弱。DNA水解时间因组织种类和固定液不同而异，需通过预实验找到合适的水解温度和时间。由于Schiff试剂能与醛基结合，故不能用含醛的固定液固定组织，常用Carnoy固定液。Bouin液不适用于Feulgen反应，因为固定液中含较多的酸，可将DNA水解，影响染色反应。Schiff试剂是显示醛基的特异试剂，其反应原理是碱性品红(为红紫色)经亚硫酸处理后变为五色Schiff液
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