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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
33
- 英文名：
SABC Kit-AP(Mouse IgG)
- 保质期：
详见说明书
- 供应商：
上海研生
- 保存条件：
低温冷藏
- 规格：
100T-200T
中文名称：免疫组化检测试剂盒(AP显色)(小鼠IgG)哪家好
英文名称：SABC Kit-AP(Mouse IgG)
产品规格：100T-200T
发货周期：1～3天
本试剂盒适合于一抗为小鼠IgG的免疫组化实验AP显色。SABC是专为免疫组化和其他免疫检测而设计的，用以显示组织和细胞中抗原分布。链霉亲和素(StreptAvidin)是一种从链霉菌中提取的蛋白质，同亲和素一样，对生物素有极高的亲和力，亲和素是一个碱性蛋白质（IP=10），经改造后可以转变成中性蛋白质。链霉亲和素等电点接近中性，对组织和细胞的非特异吸附很低，基于链霉亲和素的免疫组化方法背景很低。SABC即StreptAvidin—BiotinComplex。
保存条件-20℃
操作步骤（以石蜡切片为例，仅作参考）
1．切片常规脱蜡至水(三次二甲，三次乙醇)。
2．可选步聚
a、热修复抗原，
b、酶消化，
c、跳过此步，直接进入下一步。
3．滴加5%BSA封闭液，室温20分钟。甩去多余液体，不洗。
4．用稀释液将一抗按一定比例稀释（稀释后的一抗4℃可保存一周），也可另行购买抗体稀释液。滴加稀释的一抗37℃1小时左右或20℃时2小时左右。也可4℃过夜。TBS（pH7.2-7.4）洗2分钟×3次。（一抗的稀释度、孵育时间和温度与染色强度、背景有直接关系。具体稀释度和孵育时间参考一抗说明书。）
5．根据用量，用稀释液将Bio-羊抗小鼠IgG浓缩液按1100稀释成工作液(1ml稀释液加入10μlBio-羊抗小鼠IgG浓缩液混匀。此工作液4℃可保存一周)。滴加Bio-羊抗小鼠IgG工作液，20-37℃30分钟。TBS（pH7.2-7.4）洗2分钟×3次。
6．根据使用量，用稀释液将SABC-AP浓缩液按1100稀释成工作液(1ml稀释液加入10μlSABC-AP浓缩液混匀。此工作液4℃可保存一周)。滴加SABC-AP工作液，20-37℃，30分钟。TBS（pH7.2-7.4）洗5分钟×4次。
7．根据用量，1mlAP缓冲液中加入40μlNBT溶液，混匀后再加入40μlBCIP溶液。此工作液现用现配。室温显色,镜下控制反应时间。蒸馏水洗涤终止反应。
*对于冰冻切片，固定后，TBS漂洗两次，接上述第二步
注意事项
如果染色背景过高，在SABC反应之后，AP显色之前，用加有0.01～0.02%TWEEN-20的TBST（pH7.2-7.4）洗涤切片4次，TBS洗2次，然后AP显色。因为免疫组化指标众多，标本不一，本操作步骤仅作参考。
实验报告：
一、分离与培养：
1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，最后将组织剪成1mm3左右大小；
2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 胰酶和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；
3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织完全被消化；
4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；
5、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；
二、免疫荧光鉴定：
1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%在室温条件下固定细胞15min；
2、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
3、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；
4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；
5、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；
6、用PBS冲洗3次，每次10min，最后在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。
培养操作步骤：
1．免疫组化检测试剂盒(AP显色)(小鼠IgG)哪家好用盖片镊将盖玻片自75%乙醇中取出，用无菌丝绸布擦拭干净，不要用纱布；
2．将盖玻片轻轻放入6孔培养板（每孔一片）或培养皿中（每个平皿可放置2-3片）；
3．在距离紫外灯直射范围内20-30 厘米处照射2-3小时；
4．将经过计数的细胞悬浮液移入培养板中，使盖玻片完全浸在培养液中；
5．将培养板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，当贴壁细胞生长至覆盖培养板底部2/3面积时，将培养板取出，用盖片镊轻轻取出盖玻片，用蒸馏水漂洗后即可进行快速固定以及免疫细胞化学检测。
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LorazepamRelatedCompoundCCLASP1细胞连接相关蛋白1抗体ELISAKitforInhibinBetaC(INHbC)
LorazepamRelatedCompoundDCLASP2细胞连接相关蛋白2抗体ELISAKitforEndoglin(ENG)
LorazepamRelatedCompoundEDIS3有丝分裂控制蛋白dis3抗体ELISAKitforLipase,Hepatic(LIPC)
LosartanPotassiumDPEP3膜二肽酶3抗体ELISAKitforLipase,Hepatic(LIPC)
LovastatinDSN1着丝粒相关蛋白DSN1抗体ELISAKitforLipase,Hepatic(LIPC)
注意事项：
尽管经测试Annexin V-FITC反复冻融5次对于其检测效果无显著影响，但为取得良好的使用效果，3-6个月内推荐4℃保存，并适当注意避免反复冻融。
如果有细菌或真菌污染，会严重影响检测效果。
染色后宜尽快检测，时间过长可能会导致凋亡或坏死细胞的数量增加。
如果细胞收集过程中使用了胰酶，需注意设法去除残留的胰酶。残留的胰酶会消化并降解Annexin V-FITC，导致染色失败。
荧光物质均易发生淬灭，在进行荧光观察时，尽量缩短观察时间，同时在操作和存放过程中也尽量注意避光保存。
用于流式细胞仪检测时，如果发现Annexin V-FITC单独染色时出现了过多的PI假阳性细胞，并且通过调整相关设置和参数也无法改善，可以用PBS将Annexin V-FITC稀释3-10倍后再进行检测，这样通常可以有效减少假阳性的坏死细胞。
需自备PBS。
本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
英文名称：SABC Kit-AP(Mouse IgG)
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操作步骤（以石蜡切片为例，仅作参考）
1．切片常规脱蜡至水(三次二甲，三次乙醇)。
2．可选步聚
a、热修复抗原，
b、酶消化，
c、跳过此步，直接进入下一步。
3．滴加5%BSA封闭液，室温20分钟。甩去多余液体，不洗。
4．用稀释液将一抗按一定比例稀释（稀释后的一抗4℃可保存一周），也可另行购买抗体稀释液。滴加稀释的一抗37℃1小时左右或20℃时2小时左右。也可4℃过夜。TBS（pH7.2-7.4）洗2分钟×3次。（一抗的稀释度、孵育时间和温度与染色强度、背景有直接关系。具体稀释度和孵育时间参考一抗说明书。）
5．根据用量，用稀释液将Bio-羊抗小鼠IgG浓缩液按1100稀释成工作液(1ml稀释液加入10μlBio-羊抗小鼠IgG浓缩液混匀。此工作液4℃可保存一周)。滴加Bio-羊抗小鼠IgG工作液，20-37℃30分钟。TBS（pH7.2-7.4）洗2分钟×3次。
6．根据使用量，用稀释液将SABC-AP浓缩液按1100稀释成工作液(1ml稀释液加入10μlSABC-AP浓缩液混匀。此工作液4℃可保存一周)。滴加SABC-AP工作液，20-37℃，30分钟。TBS（pH7.2-7.4）洗5分钟×4次。
7．根据用量，1mlAP缓冲液中加入40μlNBT溶液，混匀后再加入40μlBCIP溶液。此工作液现用现配。室温显色,镜下控制反应时间。蒸馏水洗涤终止反应。
*对于冰冻切片，固定后，TBS漂洗两次，接上述第二步
注意事项
如果染色背景过高，在SABC反应之后，AP显色之前，用加有0.01～0.02%TWEEN-20的TBST（pH7.2-7.4）洗涤切片4次，TBS洗2次，然后AP显色。因为免疫组化指标众多，标本不一，本操作步骤仅作参考。
实验报告：
一、分离与培养：
1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，最后将组织剪成1mm3左右大小；
2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 胰酶和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；
3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织完全被消化；
4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；
5、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；
二、免疫荧光鉴定：
1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%在室温条件下固定细胞15min；
2、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
3、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；
4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；
5、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；
6、用PBS冲洗3次，每次10min，最后在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。
培养操作步骤：1．免疫组化检测试剂盒(AP显色)(小鼠IgG)哪家好用盖片镊将盖玻片自75%乙醇中取出，用无菌丝绸布擦拭干净，不要用纱布；
2．将盖玻片轻轻放入6孔培养板（每孔一片）或培养皿中（每个平皿可放置2-3片）；
3．在距离紫外灯直射范围内20-30 厘米处照射2-3小时；
4．将经过计数的细胞悬浮液移入培养板中，使盖玻片完全浸在培养液中；
5．将培养板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，当贴壁细胞生长至覆盖培养板底部2/3面积时，将培养板取出，用盖片镊轻轻取出盖玻片，用蒸馏水漂洗后即可进行快速固定以及免疫细胞化学检测。
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为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
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文献和实验相关实验
一般 沉淀颜色 紫色 蓝紫色 蓝紫色 棕红色 用途 AP显色 AP或者葡糖氧化酶 WB、原位杂交和免疫组化 AP和免疫组化 四种常用AP显色方法的比较 上表列举了常用的AP显色方法比较，包括BCIP（5-溴-4-氯-3-吲哚-磷酸盐）、NBT（四唑硝基蓝）和INT（硝基四紫唑），以及它们之间的组合使用。其中，BCIP/NBT是碱性磷酸酶的最佳底物组合之一，具有灵敏度最高、显色锐利、成像性能好等特点，是最常
。如果单克隆一抗是小鼠IgG的某一亚类（IgG1，IgG2a，IgG2b，IgG3），那么几乎所有的抗小鼠IgG都可以与之结合，或者你也可以选择专门针对这一亚类的二抗，例如，如果你的一抗是小鼠IgG1，那么你可以选择抗IgG1的二抗，此种抗体在双标记实验中尤其适合。在不清楚一抗为何种类/亚类的情况下，可以选用抗相应物种IgG。艾美捷能为您提供通用的IgG（H+L）二抗，或者特异性只结合IgM的Anti IgM （mu） Antibody、IgA的Anti IgA （alpha-Antibody、IgE
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