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- 2025年07月16日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
55
- 英文名：
Instant Immunohistochemistry Kit For Primary Antibody From Rabbit Or Mouse（AP Chromogenic System）
- 保质期：
详见说明书
- 供应商：
上海研生
- 保存条件：
低温冷藏
- 规格：
80T|160T
1．即用型免疫组化试剂盒(小鼠/兔源一抗)(AP显色体系)哪家好用盖片镊将盖玻片自75%乙醇中取出，用无菌丝绸布擦拭干净，不要用纱布；
2．将盖玻片轻轻放入6孔培养板（每孔一片）或培养皿中（每个平皿可放置2-3片）；
3．在距离紫外灯直射范围内20-30 厘米处照射2-3小时；
4．将经过计数的细胞悬浮液移入培养板中，使盖玻片完全浸在培养液中；
5．将培养板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，当贴壁细胞生长至覆盖培养板底部2/3面积时，将培养板取出，用盖片镊轻轻取出盖玻片，用蒸馏水漂洗后即可进行快速固定以及免疫细胞化学检测。
中文名称：即用型免疫组化试剂盒(小鼠/兔源一抗)(AP显色体系)哪家好英文名称：Instant Immunohistochemistry Kit For Primary Antibody From Rabbit Or Mouse（AP Chromogenic System）
产品规格：80T|160T
发货周期：1～3天
本试剂盒采用SABC系统，适于一抗为小鼠/兔来源的抗体。SABC是专为免疫组化和其他免疫检测而设计的，用以显示组织和细胞中抗原分布。链霉亲和素对生物素分子有极高的亲和力，是一般抗原抗体亲和力的一百万倍，等电点pI=6.0~6.5，对组织和细胞的非特异吸附很低。根据研究，SABC大约可形成一百个左右的过氧化物酶和五十个左右的链霉亲和素所构成的复合物。大量的酶可以保证SABC具有很高的敏感性。所以SABC兼具高敏感性，低背景和操作简便等优点。采用独特方法的SABC不仅有很强的信号放大作用，而且非常稳定。
保存条件4℃可保存一年，应避免冷冻。
石蜡片染色步骤
1.石蜡切片，常规脱蜡至水。
2.根据需要选择抗原修复方式及强度。可热修复、酶修复或不修复。
3.封闭。滴加5%BSA封闭液,37℃孵育30分钟。甩干，勿洗。
4.滴加适当稀释的一抗（小鼠/兔IgG），37℃孵育1~2小时或4℃过夜。0.01MTBS(ZN1953)洗5分钟×3次。
5.滴加生物素标记山羊抗小鼠/兔IgG,37℃度孵育30分钟。0.01MTBS洗5分钟×3次。
6.滴加SABC—AP,37℃孵育30分钟。0.01MTBS洗5分钟×4次。水洗1次。
7.显色BCIP/NBT用0.01MTBS(pH9.0-9.5)按120的比例稀释，混匀后加至切片。镜下控制反应时间。蒸馏水洗涤。
8.核固红轻度复染。水洗,干燥后水溶性封片剂封片(ZN2946)。
实验报告：
一、分离与培养：
1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，最后将组织剪成1mm3左右大小；
2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 胰酶和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；
3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织完全被消化；
4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；
5、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；
二、免疫荧光鉴定：
1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%在室温条件下固定细胞15min；
2、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
3、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；
4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；
5、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；
6、用PBS冲洗3次，每次10min，最后在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。
注意事项：
尽管经测试Annexin V-FITC反复冻融5次对于其检测效果无显著影响，但为取得良好的使用效果，3-6个月内推荐4℃保存，并适当注意避免反复冻融。
如果有细菌或真菌污染，会严重影响检测效果。
染色后宜尽快检测，时间过长可能会导致凋亡或坏死细胞的数量增加。
如果细胞收集过程中使用了胰酶，需注意设法去除残留的胰酶。残留的胰酶会消化并降解Annexin V-FITC，导致染色失败。
荧光物质均易发生淬灭，在进行荧光观察时，尽量缩短观察时间，同时在操作和存放过程中也尽量注意避光保存。
用于流式细胞仪检测时，如果发现Annexin V-FITC单独染色时出现了过多的PI假阳性细胞，并且通过调整相关设置和参数也无法改善，可以用PBS将Annexin V-FITC稀释3-10倍后再进行检测，这样通常可以有效减少假阳性的坏死细胞。
需自备PBS。
本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
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要，表明这种抗体可能存在种属差异，且这种抗体适合检测哪种种属动物体内的抗原。 4、种属来源，一般兔来源的多是多克隆；而小鼠来源的多是单克隆，但也有另外。根据此来源来选择相应的二抗。 5、生产厂家的选择。如 santa Cruz 公司抗体一般 1 ml，价格 2100 元左右；而 chemicon 公司一抗一般 100 μl，价格 2800 元左右。这两个厂家的同一种抗体，它的实际效价稳定是不同的，我一般用后者抗体做免疫组化效果较好，而前者做 WB 效果还可以。 三、在什么情况下使用
，Dynal MPC是专为磁分离而设计的，并可以根据样品的体积和试管大小来选择不同型号的Dynal MPC。七、细胞分离产品可分为如下两类1、 Ready-to-use primary products即用型产品该产品已包被有针对一定范围的人类细胞表面标志的高质量、纯化的单克隆抗体。2、 Dynabeads for use with your own antibodies用户型产品 该产品适用于分离各种类型的细胞，这些磁珠已经包被有纯化的二抗以识别如小鼠、大鼠、兔等的一抗，或磁珠表面已活化并可直接与蛋白
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