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- 2025年07月12日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
50
- 英文名：
DAB Peroxidase Substrate Kit for IHC (Blue Color)
- 保质期：
详见说明书
- 供应商：
上海研生
- 保存条件：
低温冷藏
- 规格：
1Kit
操作步骤(仅供参考)：
1、DAB显色试剂盒蓝色(IHC)哪家好贴壁细胞的消化
①吸除培养液，用无菌 PBS、Hanks 液或无血清培养液洗涤细胞一次，以去除残余的血清。
②加入少量 源叶生物 Trypsin-EDTA solution，略盖过细胞即可，室温放置 0.5～2min， 不同的细胞消化时间有所不同。
③显微镜下观察，细胞明显收缩，并且肉眼观察培养器皿底部发现细胞的形态发生明显的变
化；或者用枪吹打细胞发现细胞刚好可以被吹打下来，吸除胰酶细胞消化液。加入含血清的 完全细胞培养液，吹打下细胞，即可直接用于后续实验。
④如果发现消化不足，则加入 Trypsin-EDTA solution 重新消化。
⑤如果发现细胞消化时间过长，未及吹打细胞，细胞已经有部分直接从培养器皿底部脱落， 直接用胰酶细胞培养液把细胞全部吹打下来。1000～2000g 离心 1min，沉淀细胞，尽量去除胰酶细胞消化液后，加入含血清的完全培养液重新悬浮细胞，即可用于后续实验。
2、组织的消化不同的组织需要消化的时间相差很大，通常以消化后可以充分打散组织为宜。
【细胞冻存】
待细胞生长状态良好时，可进行293/HEK-293细胞|细胞冻存。贴壁细胞冻存时，弃去培养基后加入少量胰酶，细胞变圆脱落后，加入约1ml含血清的培养基后加入冻存管中，再添加10%DMSO后进行冻存。悬浮细胞冻存时，应将细胞收集，1000RPM条件下离心4分钟，少量保存上清液(防止细胞吸走)，加入部分新鲜培养基，加入到冻存管中，在冻存管中加入10%DMSO后进行冻存。
中文名称：DAB显色试剂盒蓝色(IHC)哪家好
英文名称：DAB Peroxidase Substrate Kit for IHC (Blue Color)
产品规格：1Kit
发货周期：1～3天
DAB即二氨基联（3,3’-diaminobenzidine），辣根过氧化物酶（Peroxidase）最常用的生色底物，在过氧化氢的存在下失去电子而呈现出颜色变化和积累，形成浅棕色不溶性产物，在加金属镍盐的情况下，不仅增强了显色强度，而且使显色呈鲜艳的蓝色，适用于免疫组化及各种印迹显色法。本试剂盒采用液体性滴瓶包装，使用方便，并且减少了接触有潜在毒性的DAB。
产品组份
20×DAB浓缩液————3ml
20×H2O2浓缩液————3ml
20×TBS缓冲液（含氯镍）————3ml
操作方法
1）抗原-过氧化物酶标记抗体复合物形成后，对组织用TBS或PBS充分洗涤，5min/次，共4次。
2）往1ml蒸馏水加显色剂A，B，C各1滴，混匀后即得到完整的DAB工作液。加至标本上。一般显色10-30min。若无背景出现则可继续显色。
3）显色后蒸馏水充分洗涤以终止反应。必要时核固红复染5min左右。水洗。
4）中性树胶封片，显微镜观察。
储存条件-20℃，有效期一年。
【培养指南】
对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察Ⅱ型肺泡上皮细胞|细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
3. 按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。
4. 将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
【复苏的原则】
产品名称快速融化：必须将冻存在-196℃液氮中的细胞快速融化至37℃，使细胞外冻存时的冰晶迅速融化，避免冰晶缓慢融化时进入细胞形成再结晶，对细胞造成损害。复旦细胞库全国各地均可发货，全国统一价格，本公司出售的所有细胞仅供科研使用。
细胞的种类：
第一种：
是冻存产品，由液氮直接拿出，干冰运输给客户。一般不推荐这种，也较少使用这种方式，因为复苏手法对于细胞状态影响较大，一旦细胞状态不好，很难说是细胞自身不行，还是复苏没操作好；另外温度对细胞、基因功能状态影响很大，也不是细胞储存的zui好方式，快递时间也很难控制，多种因素影响产品的质量；干冰运输需要额外添加400元的运费(顺丰)。
第二种：
是我们复苏好细胞，QC通过后，T-25灌满培养基常温运输给客户，排除复苏造成影响，常温运输也对细胞影响也不大，只需加25元运费(顺丰)。
质量保证：我们的细胞株来源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等，购买到货后，由我们实验室扩增、冻存，冻存的产品全部经过QC检测，100%进口来源，100%保证5代以内，活力>95%，无细菌、真菌、支原体污染。的冻存是细胞培养的基本操作，不同的实验室采用的方法略有差异，但是都会遵循慢冻速溶的宗旨。
细胞培养操作规程：
一．培养基及培养冻存条件准备：
1）准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640：GIBCO，货号21875-091)，90%；优质胎牛血清，10%。
2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。
3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配，液氮储存。
二．细胞处理：
1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于冻存管盖部）摇晃解冻，移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。
2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：
方法一：收集细胞，1000RPM，常温条件下离心5分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
1(4Aminophenoxy)3ethoxy2propanol4(32羟)94056981
2Chlorobenzyl cyanide邻2856635
Lithium tritertbutoxyaluminum hydride三叔铝锂17476049
Sennoside A番泻苷 A81276
1PHENYL1BUTYNE11炔622764
4Methylphenylsulfonylurea对酰脲1694060
2,4,6TRICHLOROPHENYL ISOCYANATE异2,4,6三2505319
2,6Naphthalenediol2,6二羟581431
2Nitrobenzaldehyde2552896
Cocamidopropyl betaine椰油酰甜菜86438791
IODINE SOLUTION, ACCORDING TO WIJS, 0.1 MOL ICL/L标准溶
pAminobenzamide对酰2835689
NACETYLTHIOUREAN酰脲591082
Iridium(III) chloride hydrate三铱14996613
Poly(3,4ethylenedioxythiophene)poly(styrenesulfonate)聚(3,4亚二)聚()155090838
蛋白胨/细菌蛋白胨 含量： 规格：20mg/支
Bacteriological Peptone 含量：≥ 98% 规格：10mg/支
钴 含量：0.98 规格：10mg/支
balt (II) chloride, hexahydrate 含量：0.98 规格：10mg/支
含量：HPLC≥90% 规格：20mg/支
Barbital 含量： 规格：20mg/支
含量： 规格：20mg/支
Barbital sodium 含量：>98% 规格：20mg/支
DAB显色试剂盒蓝色(IHC)哪家好CalciumLactate48T/96T进口、国产1620ButylatedHydroxytolueneHPLC≥98%
CalciumLactobionate48T/96T进口、国产16202-tert-Butyl-4-hydroxyanisoleHPLC≥98%
CalciumLevulinate(AS)48T/96T进口、国产16203-tert-Butyl-4-hydroxyanisoleHPLC≥98%
48T/96T进口、国产1620tert-ButylmethyletherHPLC≥98%
48T/96T进口、国产1620ButylparabenHPLC≥98%
CalciumSaccharate48T/96T进口、国产1620CabergolineHPLC≥98%
CalciumStearate(AS)48T/96T进口、国产1620CalcifediolHPLC≥98%
1、DAB显色试剂盒蓝色(IHC)哪家好贴壁细胞的消化
①吸除培养液，用无菌 PBS、Hanks 液或无血清培养液洗涤细胞一次，以去除残余的血清。
②加入少量 源叶生物 Trypsin-EDTA solution，略盖过细胞即可，室温放置 0.5～2min， 不同的细胞消化时间有所不同。
③显微镜下观察，细胞明显收缩，并且肉眼观察培养器皿底部发现细胞的形态发生明显的变
化；或者用枪吹打细胞发现细胞刚好可以被吹打下来，吸除胰酶细胞消化液。加入含血清的 完全细胞培养液，吹打下细胞，即可直接用于后续实验。
④如果发现消化不足，则加入 Trypsin-EDTA solution 重新消化。
⑤如果发现细胞消化时间过长，未及吹打细胞，细胞已经有部分直接从培养器皿底部脱落， 直接用胰酶细胞培养液把细胞全部吹打下来。1000～2000g 离心 1min，沉淀细胞，尽量去除胰酶细胞消化液后，加入含血清的完全培养液重新悬浮细胞，即可用于后续实验。
2、组织的消化不同的组织需要消化的时间相差很大，通常以消化后可以充分打散组织为宜。
【细胞冻存】
待细胞生长状态良好时，可进行293/HEK-293细胞|细胞冻存。贴壁细胞冻存时，弃去培养基后加入少量胰酶，细胞变圆脱落后，加入约1ml含血清的培养基后加入冻存管中，再添加10%DMSO后进行冻存。悬浮细胞冻存时，应将细胞收集，1000RPM条件下离心4分钟，少量保存上清液(防止细胞吸走)，加入部分新鲜培养基，加入到冻存管中，在冻存管中加入10%DMSO后进行冻存。
中文名称：DAB显色试剂盒蓝色(IHC)哪家好
英文名称：DAB Peroxidase Substrate Kit for IHC (Blue Color)
产品规格：1Kit
发货周期：1～3天
DAB即二氨基联（3,3’-diaminobenzidine），辣根过氧化物酶（Peroxidase）最常用的生色底物，在过氧化氢的存在下失去电子而呈现出颜色变化和积累，形成浅棕色不溶性产物，在加金属镍盐的情况下，不仅增强了显色强度，而且使显色呈鲜艳的蓝色，适用于免疫组化及各种印迹显色法。本试剂盒采用液体性滴瓶包装，使用方便，并且减少了接触有潜在毒性的DAB。
产品组份
20×DAB浓缩液————3ml
20×H2O2浓缩液————3ml
20×TBS缓冲液（含氯镍）————3ml
操作方法
1）抗原-过氧化物酶标记抗体复合物形成后，对组织用TBS或PBS充分洗涤，5min/次，共4次。
2）往1ml蒸馏水加显色剂A，B，C各1滴，混匀后即得到完整的DAB工作液。加至标本上。一般显色10-30min。若无背景出现则可继续显色。
3）显色后蒸馏水充分洗涤以终止反应。必要时核固红复染5min左右。水洗。
4）中性树胶封片，显微镜观察。
储存条件-20℃，有效期一年。
【培养指南】
对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察Ⅱ型肺泡上皮细胞|细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
3. 按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。
4. 将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
【复苏的原则】
产品名称快速融化：必须将冻存在-196℃液氮中的细胞快速融化至37℃，使细胞外冻存时的冰晶迅速融化，避免冰晶缓慢融化时进入细胞形成再结晶，对细胞造成损害。复旦细胞库全国各地均可发货，全国统一价格，本公司出售的所有细胞仅供科研使用。
细胞的种类：
第一种：
是冻存产品，由液氮直接拿出，干冰运输给客户。一般不推荐这种，也较少使用这种方式，因为复苏手法对于细胞状态影响较大，一旦细胞状态不好，很难说是细胞自身不行，还是复苏没操作好；另外温度对细胞、基因功能状态影响很大，也不是细胞储存的zui好方式，快递时间也很难控制，多种因素影响产品的质量；干冰运输需要额外添加400元的运费(顺丰)。
第二种：
是我们复苏好细胞，QC通过后，T-25灌满培养基常温运输给客户，排除复苏造成影响，常温运输也对细胞影响也不大，只需加25元运费(顺丰)。
质量保证：我们的细胞株来源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等，购买到货后，由我们实验室扩增、冻存，冻存的产品全部经过QC检测，100%进口来源，100%保证5代以内，活力>95%，无细菌、真菌、支原体污染。的冻存是细胞培养的基本操作，不同的实验室采用的方法略有差异，但是都会遵循慢冻速溶的宗旨。
细胞培养操作规程：
一．培养基及培养冻存条件准备：
1）准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640：GIBCO，货号21875-091)，90%；优质胎牛血清，10%。
2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。
3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配，液氮储存。
二．细胞处理：
1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于冻存管盖部）摇晃解冻，移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。
2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：
方法一：收集细胞，1000RPM，常温条件下离心5分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
1(4Aminophenoxy)3ethoxy2propanol4(32羟)94056981
2Chlorobenzyl cyanide邻2856635
Lithium tritertbutoxyaluminum hydride三叔铝锂17476049
Sennoside A番泻苷 A81276
1PHENYL1BUTYNE11炔622764
4Methylphenylsulfonylurea对酰脲1694060
2,4,6TRICHLOROPHENYL ISOCYANATE异2,4,6三2505319
2,6Naphthalenediol2,6二羟581431
2Nitrobenzaldehyde2552896
Cocamidopropyl betaine椰油酰甜菜86438791
IODINE SOLUTION, ACCORDING TO WIJS, 0.1 MOL ICL/L标准溶
pAminobenzamide对酰2835689
NACETYLTHIOUREAN酰脲591082
Iridium(III) chloride hydrate三铱14996613
Poly(3,4ethylenedioxythiophene)poly(styrenesulfonate)聚(3,4亚二)聚()155090838
蛋白胨/细菌蛋白胨 含量： 规格：20mg/支
Bacteriological Peptone 含量：≥ 98% 规格：10mg/支
钴 含量：0.98 规格：10mg/支
balt (II) chloride, hexahydrate 含量：0.98 规格：10mg/支
含量：HPLC≥90% 规格：20mg/支
Barbital 含量： 规格：20mg/支
含量： 规格：20mg/支
Barbital sodium 含量：>98% 规格：20mg/支
DAB显色试剂盒蓝色(IHC)哪家好CalciumLactate48T/96T进口、国产1620ButylatedHydroxytolueneHPLC≥98%
CalciumLactobionate48T/96T进口、国产16202-tert-Butyl-4-hydroxyanisoleHPLC≥98%
CalciumLevulinate(AS)48T/96T进口、国产16203-tert-Butyl-4-hydroxyanisoleHPLC≥98%
48T/96T进口、国产1620tert-ButylmethyletherHPLC≥98%
48T/96T进口、国产1620ButylparabenHPLC≥98%
CalciumSaccharate48T/96T进口、国产1620CabergolineHPLC≥98%
CalciumStearate(AS)48T/96T进口、国产1620CalcifediolHPLC≥98%
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文献和实验相关实验
高度的脂溶性， 使其易形成多聚体，在HRP活性部位产生粗大的、深兰色沉淀物，这使得TMB成为组化实验中的一种很好的发色团。同时反应产物的沉淀，使得HRP的活性部 位更加暴露，利于酶氧化反应进行。TMB的反应产物为深蓝色，利于光镜观察，且反应产物越聚越大，常超出单个细胞器的范围（而DAB则被限制在其内），故 TMB反应的检测阈较低。由于上述优点，目前TMB常用于光镜及超微结构水平的HRP及HRP-WGA神经投射的研究。需要注意的是：TMB显色液中的A 液和B液应在2h内新鲜配制。另外，TMB是一种
或细胞中目的抗原表达水平低：可延长DAB显色时间或延长二抗孵育时间。 （3）试剂超过有效使用期：及时更换试剂。 （4）操作中，滴加试剂时缓冲液未沥干，致使试剂稀释：可每步滴加试剂前沥干切片中多余的缓冲液（但防止切片干燥）。 （5） 蛋白封闭过度：封闭时间不要超过 2h。 Q3：为什么出现高背景染色，怎么办？ （1）一抗浓度过高：对抗体进行滴定以确定获得特异性反应的最佳浓度。 （2）显色过度：缩短显色试剂 DAB 孵育时间。 （3）洗涤不充分：适当增加抗体孵育后的浸洗次数和延长浸洗时间。 （4）封闭
啊！」「IHC，啥来头？」李湿兄扶了扶眼镜， 「IHC 可不是啥新鲜事儿，早在上个世纪七十年代，便已有人使用这项技术。近年来，随着『无图无真相，王道即真理』观念的强化，越来越多的研究使用这项古老且神秘的技术检测组织标本中特定蛋白的表达和分布，使科学假想与体内环境有机结合，让科学论文的质量得以升华。」以下是烧脑宝典，欲练此功，无需自宫IHC 简而言之，统共分成七步：脱蜡／复水，抗原修复，淬灭（去除内源性过氧化物酶），封闭，抗体孵育及 DAB 显色。前三步形似泡澡堂，后三步形似 Western blot。泡澡
技术资料暂无技术资料 索取技术资料
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