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- 2025年07月14日
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- 详细信息
- 技术资料
- 库存：
44
- 英文名：
Antigen Retrieval Buffer (40×Citrate-EDTA, pH 6.2)
- 保质期：
详见说明书
- 供应商：
上海研生
- 保存条件：
低温冷藏
- 规格：
125ml
操作步骤(仅供参考)：
1、柠檬酸钠-EDTA抗原修复液(40×)说明书贴壁细胞的消化
①吸除培养液，用无菌 PBS、Hanks 液或无血清培养液洗涤细胞一次，以去除残余的血清。
②加入少量 源叶生物 Trypsin-EDTA solution，略盖过细胞即可，室温放置 0.5～2min， 不同的细胞消化时间有所不同。
③显微镜下观察，细胞明显收缩，并且肉眼观察培养器皿底部发现细胞的形态发生明显的变
化；或者用枪吹打细胞发现细胞刚好可以被吹打下来，吸除胰酶细胞消化液。加入含血清的 完全细胞培养液，吹打下细胞，即可直接用于后续实验。
④如果发现消化不足，则加入 Trypsin-EDTA solution 重新消化。
⑤如果发现细胞消化时间过长，未及吹打细胞，细胞已经有部分直接从培养器皿底部脱落， 直接用胰酶细胞培养液把细胞全部吹打下来。1000～2000g 离心 1min，沉淀细胞，尽量去除胰酶细胞消化液后，加入含血清的完全培养液重新悬浮细胞，即可用于后续实验。
2、组织的消化不同的组织需要消化的时间相差很大，通常以消化后可以充分打散组织为宜。
【细胞冻存】
待细胞生长状态良好时，可进行293/HEK-293细胞|细胞冻存。贴壁细胞冻存时，弃去培养基后加入少量胰酶，细胞变圆脱落后，加入约1ml含血清的培养基后加入冻存管中，再添加10%DMSO后进行冻存。悬浮细胞冻存时，应将细胞收集，1000RPM条件下离心4分钟，少量保存上清液(防止细胞吸走)，加入部分新鲜培养基，加入到冻存管中，在冻存管中加入10%DMSO后进行冻存。
中文名称：柠檬酸钠-EDTA抗原修复液(40×)说明书
英文名称：Antigen Retrieval Buffer (40×Citrate-EDTA, pH 6.2)
产品规格：125ml
发货周期：1～3天
免疫染色实验，细胞或组织往往需要经、甲醛或其他醛类固定来维持本身的形态结构，然而此步操作通常会封闭抗原决定簇，使得相当多的抗原不能与抗体很好的进行反应，从而引起染色信号衰减，甚至出现假阴性现象。引起抗原决定簇被掩盖的原因在于1）醛类固定剂导致组织上的许多氨基酸残基在分子内或分子间形成醛键，从而封闭抗原表位；2）醛类固定剂在固定过程中与蛋白质发生交联（cross-link），形成醛交联蛋白，导致抗原表位被封闭。因此，需要对固定组织进行抗原修复（antigenretrieval，AR）来逆转被掩盖的抗原表位，使其重新暴露出来，恢复抗原表位-抗体的结合能力，从而改善染色效果。
抗原修复的方法非常多，主要有热诱导的抗原修复（HeatInducedEpitopeRetrieval，HIER）和酶诱导的抗原修复（ProteolyticInducedEpitopeRetrieval），修复方法的选择需要考虑到抗原表达程度、抗体要求、组织类型以及组织固定方法等因素。作为免疫染色至关重要的一步，抗原修复方法的选择、温度、pH值、修复时间、修复介质都会影响到实验结果。实验者需根据自身的实验体系以及实验条件来选择恰当的修复溶液，从而达到最佳的修复效果。
本品为柠檬酸钠-EDTA抗原修复缓冲液，pH6.2，采用了常用的柠檬酸钠缓冲液和EDTA，结合了两者修复抗原的优点，并经过适当优化，可以更加有效去除醛类固定试剂导致的蛋白之间的交联，充分暴露石蜡切片等样品中的抗原表位，从而大大改善免疫染色效果。本品可以用于石蜡切片、冰冻切片等样品使用、甲醛或其它醛类试剂固定后的抗原修复。
本品为40×浓缩的柠檬酸钠-EDTA抗原修复液，使用前需用ddH2O稀释成1×工作液。
注意事项
1）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
2）抗原修复通常用于醛类固定的石蜡切片，而冰冻切片由于组织比较脆弱，易在修复过程中被破坏掉，因此比较少进行抗原修复。然而醛类固定的冰冻切片同样会发生蛋白交联而封闭抗原表位，导致染色效果不佳。很多文献资料表明采用适当的方法进行冰冻切片抗原修复，也能显著改善染色效果。特别是当染色效果欠佳的前提下，可考虑进行冰冻切片的抗原修复。
3）本产品经冻存后需经适当加热后才能完全溶解。同时由于本产品含有少量的特殊去垢剂，加热后会产生非常细密的气泡而呈现非常均匀的类似浑浊状，属于正常现象，并非不溶解或产生了沉淀。室温放置较长时间后，例如1-2天，溶液会完全澄清。对于溶解后呈现非常均匀的类似浑浊状的本产品，此时即可取适量稀释后使用。抗原修复过程中加热时也会产生非常细密的气泡而呈现均匀的浑浊状，也属于正常现象，请放心使用。
4）修复过程中一定要使用足量的修复液（1×）来完全浸没组织切片。
储存条件4℃，有效期一年。
【培养指南】
对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察Ⅱ型肺泡上皮细胞|细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
3. 按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。
4. 将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
【复苏的原则】
产品名称快速融化：必须将冻存在-196℃液氮中的细胞快速融化至37℃，使细胞外冻存时的冰晶迅速融化，避免冰晶缓慢融化时进入细胞形成再结晶，对细胞造成损害。复旦细胞库全国各地均可发货，全国统一价格，本公司出售的所有细胞仅供科研使用。
细胞的种类：
第一种：
是冻存产品，由液氮直接拿出，干冰运输给客户。一般不推荐这种，也较少使用这种方式，因为复苏手法对于细胞状态影响较大，一旦细胞状态不好，很难说是细胞自身不行，还是复苏没操作好；另外温度对细胞、基因功能状态影响很大，也不是细胞储存的zui好方式，快递时间也很难控制，多种因素影响产品的质量；干冰运输需要额外添加400元的运费(顺丰)。
第二种：
是我们复苏好细胞，QC通过后，T-25灌满培养基常温运输给客户，排除复苏造成影响，常温运输也对细胞影响也不大，只需加25元运费(顺丰)。
质量保证：我们的细胞株来源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等，购买到货后，由我们实验室扩增、冻存，冻存的产品全部经过QC检测，100%进口来源，100%保证5代以内，活力>95%，无细菌、真菌、支原体污染。的冻存是细胞培养的基本操作，不同的实验室采用的方法略有差异，但是都会遵循慢冻速溶的宗旨。
细胞培养操作规程：
一．培养基及培养冻存条件准备：
1）准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640：GIBCO，货号21875-091)，90%；优质胎牛血清，10%。
2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。
3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配，液氮储存。
二．细胞处理：
1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于冻存管盖部）摇晃解冻，移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。
2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：
方法一：收集细胞，1000RPM，常温条件下离心5分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
COPPER(I) CYANIDE亚铜544923
(S)(+)1Aminoindan(S)(+)1茚61341864
SILVER METAVANADATE偏钒银13497944
EC 1.1.1.28脱酶9028368
HEPTADECANOIC ACID十七碳506127
1Methyl2phenylindole12吲哚3558245
4'AMINOPROPIOPHENONE470699
(S)(+)1,2Propanediol(S)(+)1,2二4254153
2FLUORO4(TRIFLUOROMETHYL)BENZYLAMINE24三苄239087059
ZLYS(BOC)OHZ羰赖2389608
N[(Trimethylsilyl)methyl]benzylamineN[(三硅)]苄53215955
6METHOXY2METHYLBENZOTHIAZOLE62并噻唑2941722
ETHYL 3METHYL4OXOCROTONATE3酰262054493
NA树兰浸膏
4(2Aminoethyl)benzenesulfonylfluoride hydrochloride4(2)酰30827997
γCyclodextrin, Hydrate 含量：暂不提供 规格：50次，100次
γ牛血球蛋白 含量：暂不提供 规格：50次，100次
γGlobulins, Bovine Blood 含量：暂不提供 规格：20次，50次
PNPG 含量：暂不提供 规格：20次，50次
对βD半糖苷 含量：暂不提供 规格：50ml，100ml
Ficoll 70 含量：暂不提供 规格：500U，1000U
聚蔗糖70 含量：暂不提供 规格：250U ，500U
Lanthanum(III) nitrate hydrate 含量：暂不提供 规格：250U，500U
柠檬酸钠-EDTA抗原修复液(40×)说明书48T/96T进口、国产1620BiperidenHydrochlorideHPLC≥98%
BromazepamCIV(AS)48T/96T进口、国产1620BisacodylHPLC≥98%
BromocriptineMesylate48T/96T进口、国产1620Bis(2-ethylhexyl)maleateHPLC≥98%
48T/96T进口、国产1620BisdesmethoxycurcuminHPLC≥98%
8-Bromotheophylline48T/96T进口、国产1620BismuthCitrateHPLC≥98%
BromperidolDecanoate48T/96T进口、国产1620BismuthSubcarbonate(AS)HPLC≥98%
BrompheniramineMaleate48T/96T进口、国产1620BisoctrizoleHPLC≥98%
1、柠檬酸钠-EDTA抗原修复液(40×)说明书贴壁细胞的消化
①吸除培养液，用无菌 PBS、Hanks 液或无血清培养液洗涤细胞一次，以去除残余的血清。
②加入少量 源叶生物 Trypsin-EDTA solution，略盖过细胞即可，室温放置 0.5～2min， 不同的细胞消化时间有所不同。
③显微镜下观察，细胞明显收缩，并且肉眼观察培养器皿底部发现细胞的形态发生明显的变
化；或者用枪吹打细胞发现细胞刚好可以被吹打下来，吸除胰酶细胞消化液。加入含血清的 完全细胞培养液，吹打下细胞，即可直接用于后续实验。
④如果发现消化不足，则加入 Trypsin-EDTA solution 重新消化。
⑤如果发现细胞消化时间过长，未及吹打细胞，细胞已经有部分直接从培养器皿底部脱落， 直接用胰酶细胞培养液把细胞全部吹打下来。1000～2000g 离心 1min，沉淀细胞，尽量去除胰酶细胞消化液后，加入含血清的完全培养液重新悬浮细胞，即可用于后续实验。
2、组织的消化不同的组织需要消化的时间相差很大，通常以消化后可以充分打散组织为宜。
【细胞冻存】
待细胞生长状态良好时，可进行293/HEK-293细胞|细胞冻存。贴壁细胞冻存时，弃去培养基后加入少量胰酶，细胞变圆脱落后，加入约1ml含血清的培养基后加入冻存管中，再添加10%DMSO后进行冻存。悬浮细胞冻存时，应将细胞收集，1000RPM条件下离心4分钟，少量保存上清液(防止细胞吸走)，加入部分新鲜培养基，加入到冻存管中，在冻存管中加入10%DMSO后进行冻存。
中文名称：柠檬酸钠-EDTA抗原修复液(40×)说明书
英文名称：Antigen Retrieval Buffer (40×Citrate-EDTA, pH 6.2)
产品规格：125ml
发货周期：1～3天
免疫染色实验，细胞或组织往往需要经、甲醛或其他醛类固定来维持本身的形态结构，然而此步操作通常会封闭抗原决定簇，使得相当多的抗原不能与抗体很好的进行反应，从而引起染色信号衰减，甚至出现假阴性现象。引起抗原决定簇被掩盖的原因在于1）醛类固定剂导致组织上的许多氨基酸残基在分子内或分子间形成醛键，从而封闭抗原表位；2）醛类固定剂在固定过程中与蛋白质发生交联（cross-link），形成醛交联蛋白，导致抗原表位被封闭。因此，需要对固定组织进行抗原修复（antigenretrieval，AR）来逆转被掩盖的抗原表位，使其重新暴露出来，恢复抗原表位-抗体的结合能力，从而改善染色效果。
抗原修复的方法非常多，主要有热诱导的抗原修复（HeatInducedEpitopeRetrieval，HIER）和酶诱导的抗原修复（ProteolyticInducedEpitopeRetrieval），修复方法的选择需要考虑到抗原表达程度、抗体要求、组织类型以及组织固定方法等因素。作为免疫染色至关重要的一步，抗原修复方法的选择、温度、pH值、修复时间、修复介质都会影响到实验结果。实验者需根据自身的实验体系以及实验条件来选择恰当的修复溶液，从而达到最佳的修复效果。
本品为柠檬酸钠-EDTA抗原修复缓冲液，pH6.2，采用了常用的柠檬酸钠缓冲液和EDTA，结合了两者修复抗原的优点，并经过适当优化，可以更加有效去除醛类固定试剂导致的蛋白之间的交联，充分暴露石蜡切片等样品中的抗原表位，从而大大改善免疫染色效果。本品可以用于石蜡切片、冰冻切片等样品使用、甲醛或其它醛类试剂固定后的抗原修复。
本品为40×浓缩的柠檬酸钠-EDTA抗原修复液，使用前需用ddH2O稀释成1×工作液。
注意事项
1）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
2）抗原修复通常用于醛类固定的石蜡切片，而冰冻切片由于组织比较脆弱，易在修复过程中被破坏掉，因此比较少进行抗原修复。然而醛类固定的冰冻切片同样会发生蛋白交联而封闭抗原表位，导致染色效果不佳。很多文献资料表明采用适当的方法进行冰冻切片抗原修复，也能显著改善染色效果。特别是当染色效果欠佳的前提下，可考虑进行冰冻切片的抗原修复。
3）本产品经冻存后需经适当加热后才能完全溶解。同时由于本产品含有少量的特殊去垢剂，加热后会产生非常细密的气泡而呈现非常均匀的类似浑浊状，属于正常现象，并非不溶解或产生了沉淀。室温放置较长时间后，例如1-2天，溶液会完全澄清。对于溶解后呈现非常均匀的类似浑浊状的本产品，此时即可取适量稀释后使用。抗原修复过程中加热时也会产生非常细密的气泡而呈现均匀的浑浊状，也属于正常现象，请放心使用。
4）修复过程中一定要使用足量的修复液（1×）来完全浸没组织切片。
储存条件4℃，有效期一年。
【培养指南】
对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察Ⅱ型肺泡上皮细胞|细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
3. 按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。
4. 将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
【复苏的原则】
产品名称快速融化：必须将冻存在-196℃液氮中的细胞快速融化至37℃，使细胞外冻存时的冰晶迅速融化，避免冰晶缓慢融化时进入细胞形成再结晶，对细胞造成损害。复旦细胞库全国各地均可发货，全国统一价格，本公司出售的所有细胞仅供科研使用。
细胞的种类：
第一种：
是冻存产品，由液氮直接拿出，干冰运输给客户。一般不推荐这种，也较少使用这种方式，因为复苏手法对于细胞状态影响较大，一旦细胞状态不好，很难说是细胞自身不行，还是复苏没操作好；另外温度对细胞、基因功能状态影响很大，也不是细胞储存的zui好方式，快递时间也很难控制，多种因素影响产品的质量；干冰运输需要额外添加400元的运费(顺丰)。
第二种：
是我们复苏好细胞，QC通过后，T-25灌满培养基常温运输给客户，排除复苏造成影响，常温运输也对细胞影响也不大，只需加25元运费(顺丰)。
质量保证：我们的细胞株来源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等，购买到货后，由我们实验室扩增、冻存，冻存的产品全部经过QC检测，100%进口来源，100%保证5代以内，活力>95%，无细菌、真菌、支原体污染。的冻存是细胞培养的基本操作，不同的实验室采用的方法略有差异，但是都会遵循慢冻速溶的宗旨。
细胞培养操作规程：
一．培养基及培养冻存条件准备：
1）准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640：GIBCO，货号21875-091)，90%；优质胎牛血清，10%。
2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。
3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配，液氮储存。
二．细胞处理：
1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于冻存管盖部）摇晃解冻，移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。
2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：
方法一：收集细胞，1000RPM，常温条件下离心5分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
COPPER(I) CYANIDE亚铜544923
(S)(+)1Aminoindan(S)(+)1茚61341864
SILVER METAVANADATE偏钒银13497944
EC 1.1.1.28脱酶9028368
HEPTADECANOIC ACID十七碳506127
1Methyl2phenylindole12吲哚3558245
4'AMINOPROPIOPHENONE470699
(S)(+)1,2Propanediol(S)(+)1,2二4254153
2FLUORO4(TRIFLUOROMETHYL)BENZYLAMINE24三苄239087059
ZLYS(BOC)OHZ羰赖2389608
N[(Trimethylsilyl)methyl]benzylamineN[(三硅)]苄53215955
6METHOXY2METHYLBENZOTHIAZOLE62并噻唑2941722
ETHYL 3METHYL4OXOCROTONATE3酰262054493
NA树兰浸膏
4(2Aminoethyl)benzenesulfonylfluoride hydrochloride4(2)酰30827997
γCyclodextrin, Hydrate 含量：暂不提供 规格：50次，100次
γ牛血球蛋白 含量：暂不提供 规格：50次，100次
γGlobulins, Bovine Blood 含量：暂不提供 规格：20次，50次
PNPG 含量：暂不提供 规格：20次，50次
对βD半糖苷 含量：暂不提供 规格：50ml，100ml
Ficoll 70 含量：暂不提供 规格：500U，1000U
聚蔗糖70 含量：暂不提供 规格：250U ，500U
Lanthanum(III) nitrate hydrate 含量：暂不提供 规格：250U，500U
柠檬酸钠-EDTA抗原修复液(40×)说明书48T/96T进口、国产1620BiperidenHydrochlorideHPLC≥98%
BromazepamCIV(AS)48T/96T进口、国产1620BisacodylHPLC≥98%
BromocriptineMesylate48T/96T进口、国产1620Bis(2-ethylhexyl)maleateHPLC≥98%
48T/96T进口、国产1620BisdesmethoxycurcuminHPLC≥98%
8-Bromotheophylline48T/96T进口、国产1620BismuthCitrateHPLC≥98%
BromperidolDecanoate48T/96T进口、国产1620BismuthSubcarbonate(AS)HPLC≥98%
BrompheniramineMaleate48T/96T进口、国产1620BisoctrizoleHPLC≥98%
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