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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存:
24
- 英文名:
Aldose reductase-IN-1
- 保质期:
详见说明书
- 供应商:
上海研生
- 保存条件:
低温冷藏
- 规格:
1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg
一、醛糖还原酶抑制剂(Aldosereductase-IN-1)价格分离与培养:
1、无菌条件下,取出1-3d 龄SD大鼠心房组织,然后用PBS将此组织块清洗2次,最后将组织剪成1mm3左右大小;
2、往组织块中加入4 mL酶消化液(0.1% 胰酶和0.1% I型胶原酶),混悬10s,置37℃条件下消化10min,之后用滴管吹打制成单细胞悬液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置;
3、剩下的组织再加入3~4mL酶消化液,混悬10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置,重复此步骤2-3次,直至组织完全被消化;
4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液,1200r/min 离心10min,弃去上清,沉淀细胞用含有10% FBS DMEM/F12培养基混悬,接种于25cm2培养瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培养箱中培养;
5、差速贴壁1h后,吸出培养基,按实验需要接种于6孔板中继续培养;
二、免疫荧光鉴定:
1、待心房肌细胞生长至80%融合时,弃去培养基,用温育的PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后用4%在室温条件下固定细胞15min;
2、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在4℃条件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在室温条件下,用4% BSA封闭细胞30min;
4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗,然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜;
5、PBS冲洗细胞3次,每次10min,按1:150的比例稀释抗α-actin的二抗, 37℃条件下放置1h;
6、用PBS冲洗3次,每次10min,最后在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。
中文名称:醛糖还原酶抑制剂(Aldosereductase-IN-1)价格英文名称:Aldose reductase-IN-1
产品规格:1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg
发货周期:1~3天
Aldosereductase-IN-1是一种醛糖还原酶抑制剂,IC50值为28.9pM。
注本品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他用途!
CAS号1355612-71-3
纯度99.72%
分子式C₁₇H₁₀F₃N₅O₃S
分子量421.35
储存条件-20℃,有效期2年,溶入溶剂后-20℃请尽量在一个月内使用。
注意事项:
尽管经测试Annexin V-FITC反复冻融5次对于其检测效果无显著影响,但为取得良好的使用效果,3-6个月内推荐4℃保存,并适当注意避免反复冻融。
如果有细菌或真菌污染,会严重影响检测效果。
染色后宜尽快检测,时间过长可能会导致凋亡或坏死细胞的数量增加。
如果细胞收集过程中使用了胰酶,需注意设法去除残留的胰酶。残留的胰酶会消化并降解Annexin V-FITC,导致染色失败。
荧光物质均易发生淬灭,在进行荧光观察时,尽量缩短观察时间,同时在操作和存放过程中也尽量注意避光保存。
用于流式细胞仪检测时,如果发现Annexin V-FITC单独染色时出现了过多的PI假阳性细胞,并且通过调整相关设置和参数也无法改善,可以用PBS将Annexin V-FITC稀释3-10倍后再进行检测,这样通常可以有效减少假阳性的坏死细胞。
需自备PBS。
本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
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培养操作步骤:
1.用盖片镊将盖玻片自75%乙醇中取出,用无菌丝绸布擦拭干净,不要用纱布;
2.将盖玻片轻轻放入6孔培养板(每孔一片)或培养皿中(每个平皿可放置2-3片);
3.在距离紫外灯直射范围内20-30 厘米处照射2-3小时;
4.将经过计数的细胞悬浮液移入培养板中,使盖玻片完全浸在培养液中;
5.将培养板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,当贴壁细胞生长至覆盖培养板底部2/3面积时,将培养板取出,用盖片镊轻轻取出盖玻片,用蒸馏水漂洗后即可进行快速固定以及免疫细胞化学检测。
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文献和实验问:有关测定醛糖还原酶活性时的反应体系有以下几个疑问:1、67mmol/l钠钾磷酸盐缓冲液如何配置?也有人 用50mmol/l的磷酸钾缓冲液二者哪一种更好。2、整个反映体系配置须注意哪些问题?最后加DL-甘油醛还是NADPH。3、NADPH标准曲线绘制分别用多大浓度?请各位指教,谢谢。答:在测定酶的活性时,有时由于酶的纯化不足,导致影响结果,在检测醛糖还原酶活性时要注意以下几点:(一)其它酶和物质的干扰如组织匀浆中往往含有NADH-细胞色素C还原酶,它将干扰各种还原酶的测定。临床酶测定中最典型
问:请教各位高手:晶状体醛糖还原酶测定方法的具体步骤!谢谢!答:不知你要用那种方法测定?一般常用以下两种你可以作参考:配反应体系时注意要临用前加DL-甘油醛和NADPH。作NADPH标准曲线时NADPH至少要梯度稀释5个浓度。 如果不够详细你可以问问作者,山东潍坊医院内分泌科刘长山教授。荧光法:血样1mI,加肝素抗凝管,1500g离心10分钟,红细胞用10倍体积的等渗盐水冲洗三次,加4倍体积10mmol/l的磷酸钾缓冲液(pH6.o),振荡10分钟,使之完全溶血,然后溶血液以10,000g离心
免疫印迹法检测 MAPK 信号通路表达改变 肾小球硬化的主要发病机制之一是细胞外基质(ECM)的异常沉积。转化生长因子p1(TGF-B1)在ECM沉积中起作用,并与MAPK信号通路有密切关系。醛糖还原酶(AR)是多元醇代谢通路中的限速酶,研究证实AR基因为大鼠肾小球肾炎及肾脏硬化过程中系膜细胞 (MsC)的TGF-6l反应性基因之一。以蛋白质印迹检测正常MsC、AR转基因MsC、应用醛糖还原酶抑制剂索比尼尔(sorbinil)和哇泊司他(zop01restat
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