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12 个月
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上海西格
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2-8°C
- 规格:
2500次(250ul×50支)
| 货号 | 产品名称 | 规格 |
| XG-P2903 | 51bp Ladder (for PAGE)分子量标准 | 2500次(250ul×50支) |

PCR反应基本步骤:
一般的聚合酶链式反应由20到35个循环组成,每个循环包括以下3个步骤:
变性(Denaturation):
利用高温(93-98℃)使双链DNA分离。高温将连接两条DNA链的氢键打断。在第一个循环之前,通常加热长一些时间以确保模板和引物完全分离,仅以单链形式存在。该步骤时间1-2分钟,接下来PCR仪就控制温度进入循环阶段。
退火或称接合,复性(Annealling):
在DNA双链分离后,降低温度使得引物可以结合于单链DNA上。此阶段的温度通常低于引物熔点5℃。错误的退火温度可能导致引物不与模板结合或者错误地结合。该步骤时间1-2分钟。
延伸(Extension):
DNA聚合酶由降温时结合上的引物开始沿着DNA链合成互补链。此阶段的温度依赖于DNA聚合酶。该步骤时间依赖于聚合酶以及需要合成的DNA片段长度。传统的Taq估计合成1000bp/min、较新的Tbr(来自于嗜热菌Thermus brockianus)约40秒、商业公司生产的融合型聚合酶仅需约10-15秒。

PCR 反应需要使用哪些试剂?
一、模板DNA:PCR反应需要模板DNA,如从细胞、组织、血液中提取DNA等;
二、引物:PCR反应的两个引物,分别与模板DNA的两端配对扩增所需的特定区域,引物也可以合成为TA克隆等过程中使用到的引物;
三、dNTPs:PCR反应中需要四种dNTPs,包括脱氧腺苷酸(dATP)、脱氧胸苷酸(dCTP)、脱氧鸟苷酸(dGTP)、脱氧胞嘧啶酸(dTTP),用于细胞分裂、DNA合成等生物学过程,用于PCR扩增的模板DNA链的延伸和扩增;四、Taq DNA聚合酶:PCR反应需要的聚合酶,一般使用Taq聚合酶,还有一些其他种类的聚合酶如PFU、Phusion等,用于扩增DNA链;
五、PCR buffer溶液:对PCR反应具有缓冲作用,调节反应pH,硫代硫酸氢盐SDS、小分子有机化合物如甲醛,可增强PCR反应特异性,从而提高反应效率;
六、酶切体系:PCR扩增往往涉及到重组、构建和测序等等实验步骤,常常需要进行酶切操作。
七、MARK:一种分子量标准,用来判别DNA片段大小的工具。
八、DNA纯化试剂盒:用于纯化PCR反应产物;

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文献和实验pmol分子量100,000蛋白质=10μg 100pmol分子量50,000蛋白质=5μg 100pmol分子量10,000蛋白质=1μg 氨基酸的平均分子量=126.7道尔顿 (5)蛋白质/DNA换算: 1kb DNA=333 个氨基酸编码容量=3.7×104MW蛋白质 10,000MW蛋白质=270bp DNA 30,000MW蛋白质=810bp DNA 50,000MW蛋白质=1.35kb 100,000MW蛋白质=2.7kb DNA4.常用蛋白质分子量标准参照
呀,当然如果时间够长的话! wscoco78 :嗯,上次我是选择性抽提的小片段,用的0.8%,是好像条带清晰一些,不过1.5%我也跑出来过,我当时还用到了100bp的marker,所以才用了1.5%,chujun可以综合考虑,那就0.8%~1.5%吧。midas: 自己的实际经验比任何教课书都管用。 brainchip :你们在做LADDER,收集贴壁细胞时,用的是什么方法收集的细胞,胰酶消化么?有没有更好的方法,因为有人说胰酶对已发生调亡的细胞的细胞壁有损害,可以减少凋亡的细胞 数量,是不是真有此事
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