乳液 外泌体提取试剂盒

★产品名称：外泌体提取试剂盒（乳液）

★产品用途：适用于牛奶、羊奶、马奶、驼奶等400-500mL的初始乳液；

★目录价格：4600；产品货期：现货；

★产品货号：UR52146；产品规格：20 T；

★保存方式：常温18-25℃；运输条件：常温；

产品描述：

外泌体是由细胞分泌的包含RNA和蛋白质的小囊泡（30-150 nm），在血液、唾液、尿液及乳汁等体液中大量存在。外泌体被认为具有细胞间信使的功能，在特定细胞之间传递它们的效应物或信号分子；然而其构造、效应物组成以及所参与的生物学通路目前尚不明晰。

外泌体的生物学功能研究中需要分离完整的外泌体颗粒，而传统超速离心方法步骤繁琐、硬件要求高、操作难度大。宇玫博生物自主开发的外泌体提取试剂盒，组分经过优化处理，适用于乳液中的外泌体提取，可快速高效地获得外泌体颗粒，可用于电镜分析、NTA粒径分析、核酸分析、蛋白分析、细胞学实验和动物实验等。

产品组成：

组分名称	UR52146	UR52149
Solution A*	50 mL	5 mL
Solution B*	60 mL	6 mL
Solution C*	60 mL	6 mL
Solution D*	120 mL	12 mL
50 mL离心过滤柱	20 个	2 个

* Nuclease-free, Sterile

产品优势：

涵盖组织、细胞上清、血清血浆、乳液、尿液以及其他体液等多种样本；

针对不同样本，预处理、提取、纯化试剂做差异化配方；

样品处理量大，可达同类产品5倍以上；

外泌体可用于细胞共孵育和组学研究；

专注于外泌体提取和配套试剂盒研发；

价格便宜，为您大规模研究节省成本；

数百篇参考文献让您放心使用无忧购；

质控数据：

牛奶                                    细胞上清                                  血清

 

操作视频

包含了丰富全面的实操教学视频，除了组织、细胞上清液、血液、尿液等样本外泌体提取纯化操作视频教学外，还提供了超滤浓缩、 MSC 培养、肿瘤/T 细胞培养操作视频，现在扫描下方二维码即可免费查看。

操作规程：

一、 样品预处理

1、 取样：如果是冻存样品，从冰箱取出后于25℃水浴中进行解冻，将完全融化后的样品置于冰上，如果是新鲜样品，收集样品后置于冰上；

2、 样品初始用量：单次提取时的乳液量建议不低于25 mL；

3、 离心去脂：将样品转移至离心管中，于4℃以10,000 ×g（~9,500 rpm**）离心20 min，去除样品中的脂质及部分蛋白（注：离心后样品分为三层，上层为脂质层，下层为蛋白沉淀，中间层为乳清。离心后上层状态为“致密、稳定、不易脱落”，若上层“松软、易脱落”且下层沉淀较多，可重复此步骤，每次离心取中间层液体）；

**为约10 cm有效离心半径的大离心机换算（≥15 mL离心管），下同。

4、 乳清转移：将去除脂质的乳清（中间层液体）转移至新的50 mL离心管中（注：可用枪头将上层脂质戳破后缓慢倾倒，或用移液器转移，转移后的乳清中带有少量脂质和沉淀是正常现象，不影响后续实验）。

二、 去除杂蛋白

1、 乳清澄清：乳清中加入Solution A，将离心管颠倒混匀至呈现“半透明状”，再加入Solution B，颠倒混匀后于2℃至8℃静置10 min；（注：静置完成后轻轻晃动离心管，呈现“豆花状”固体，液体部分为“透明状”。若未呈现“豆花状”或样品仍为“乳白色”，可再适当加入Solution B至液体为“透明状”）；

注：具体加入量根据乳清体积按上表等比例换算

2、 离心去蛋白：将澄清后的乳清于4℃以10,000 ×g（~9,500 rpm**）离心10 min，收集上清液；

3、 上清液过滤：将收集的上清液转移至50 mL离心过滤柱中，于4℃以5200 rpm（~3000 ×g）离心2 min(注：若未过滤完全，可重复此步骤。50 mL离心过滤柱为一次性耗材，不建议重复使用)；

4、 将过滤后的上清液转移至新离心管中，加入Solution C后颠倒混匀（注：Solution C加入剂量和Solution B剂量保持一致）。

三、 提取外泌体

1、 上清液预处理：在加入Solution C后的上清液中加入Solution D，具体加入剂量如下（其他剂量请根据表中的用量等比例换算）：

2、 溶液混合：加入Solution D后将离心管盖紧，通过涡旋振荡器混匀1 min，再放置于4℃静置1 h以上（注：增加静置时间可提高外泌体得率，但不可超过24 h）；

3、 沉淀外泌体：取出装有混合液的离心管于4℃以10,000 ×g（~9,500 rpm**）离心60 min，弃上清，沉淀中富含外泌体颗粒（注：尽可能吸尽上清液）；

4、 再次离心：将含有沉淀的离心管再次于4℃以10,000 ×g（~9,500 rpm**）离心2 min，弃上清（注：尽可能吸尽上清液）；

5、 外泌体重悬：取合适量的1×PBS均匀吹打离心沉淀物，待其溶解后，将重悬液转移至新的1.5 mL离心管中（建议每25 mL乳液用200 μL左右1×PBS重悬）；

6、 收获外泌体颗粒：将含有重悬液的1.5 mL离心管于4℃以12,000 ×g（~12,400 rpm*）离心2 min，保留上清液，其中富含外泌体颗粒（注：若沉淀较多，可12,000 ×g，2 min离心多次至无明显沉淀，每次取上清液，外泌体溶液可能带有淡淡的乳白色，此为正常现象）。

*为约7 cm有效离心半径的小离心机换算（≤2 mL离心管）。

7、 外泌体的保存：纯化后的外泌体以合适体积进行分装冻存于-80℃低温冰箱中，以备后续实验使用。

QA：乳液提取试剂盒加 solution B 之后无豆花状固体，此时是否可以继续实验？

答：不可以，必须在明确看到豆花状沉淀，溶液变透明后才可进行下一步操作。此时需要继续加入适量 solution B，并在 37 度水浴加热，直至看到豆花状沉淀。

经典案例：