Human CCL11/Eotaxin ELISA Kit

碧云天的Human CCL11/Eotaxin ELISA Kit (Human CCL11/Eotaxin Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay Kit)，即人嗜酸性粒细胞趋化因子酶联免疫吸附检测试剂盒，是一种用于特异性地高灵敏地定量检测人血清、血浆或细胞培养上清液中的CCL11/Eotaxin的ELISA试剂盒。
ImmunoSorbent Assay Kit)，即小鼠单核细胞趋化蛋白1酶联免疫吸附检测试剂盒，是一种用于特异性地高灵敏地定量检测小鼠血清、血浆、或细胞培养上清液中的MCP-1的ELISA试剂盒。
本产品检测灵敏度高，特异性强，重复性好。多次重复检测结果表明，最小检出量为12.6pg/ml，与人的MCP-1、MCP-2、MCP-3、MCP-4、 RANTES及小鼠的Eotaxin等均没有交叉反应，板内、板间变异系数均小于10%。
人嗜酸性粒细胞趋化因子(Eotaxin)，又称CCL11 (Chemokine C-C motif Ligand 11)，是一种分子量为8.3kDa、含有74个氨基酸的非糖基化多肽，属于CC细胞因子家族。人Eotaxin具有一定的种间交叉反应性，与小鼠和豚鼠具有60%的氨基酸同源性。与其它CC家族细胞因子相比，Eotaxin与MCP-1具有66%的氨基酸同源性，与MCP-4具有58%的氨基酸同源性，与Eotaxin-2仅有39%的氨基酸同源性。炎性细胞因子IL-1、TNF-α和IFN-γ能够诱导Eotaxin产生。能够产生Eotaxin的细胞有许多类型，例如内皮细胞、成纤维细胞、巨噬细胞、支气管上皮细胞、平滑肌细胞、软骨细胞和嗜酸性粒细胞等。
在炎性和过敏反应中，Eotaxin是嗜酸性粒细胞有效的选择性化学诱导物，CCR3受体参与调节Eotaxin活性。CCR3分子量在45-55kDa，含有355个氨基酸，具有7次跨膜结构。尽管CCR3是目前已知的Eotaxin唯一受体，但其它细胞因子例如Eotaxin-2、MCP-4、MCP-3、Leukotactin-1和RANTES也能与CCR3结合，只是亲和力有所不同。pH和离子强度的改变会影响Eotaxin和CCR3的结合，这表明组织微环境中的细微变化可能是调控Eotaxin生物学效应的机制之一。表达CCR3的细胞主要嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒细胞和Th2辅助T细胞。
      本试剂盒采用双抗体夹心ELISA法(Sandwich ELISA)检测样品中人CCL11/Eotaxin的浓度，其原理见图1。人CCL11/Eotaxin特异的单克隆捕获抗体已预包被于酶标板上，当加入标准品或样品时，其中的人CCL11/Eotaxin会与捕获抗体结合。当加入生物素化的抗人CCL11/Eotaxin抗体后，生物素化抗人CCL11/Eotaxin抗体与人CCL11/Eotaxin结合，形成夹心的免疫复合物。随后加入辣根过氧化物酶标记Streptavidin (HRP-Streptavidin)，由于生物素与链霉亲和素(Streptavidin)可以特异性地结合，因此链霉亲和素连接的HRP就会与夹心的免疫复合物连接起来而被固相捕获。最后加入显色剂TMB溶液，固相捕获的辣根过氧化物酶就会催化无色的显色剂氧化成蓝色物质，在加入终止液后呈黄色。通过酶标仪检测450nm处的吸光度值就能实现定量检测。人CCL11/Eotaxin浓度与A450值呈正比，通过绘制标准曲线，对照样品吸光度值，即可计算出样品中人CCL11/Eotaxin浓度。

图1. 双抗体夹心ELISA原理图。

一个包装的本试剂盒，包括标准品检测，可以进行96次检测。
包装清单：

产品编号	产品名称	包装
PC115-1	人CCL11/Eotaxin抗体预包被板	8孔×12条
PC115-2	样品分析缓冲液	5ml
PC115-3	标准品稀释液	10ml
PC115-4	人CCL11/Eotaxin标准品	2-4瓶
PC115-5	人CCL11/Eotaxin生物素化抗体	10ml
PC115-6	辣根过氧化物酶标记Streptavidin	10ml
PC115-7	洗涤液(20X)	30ml
PC115-8	TMB溶液	10ml
PC115-9	终止液	5ml
PC115-10	封板膜(透明)	2张
PC115-11	封板膜(白色)	2张
-	说明书	1份

保存条件：
标准品4℃保存，1-2周内有效，-20℃保存6个月内有效；试剂盒其它组分4℃保存6个月内有效。除标准品外，试剂盒其它组分严禁冻存。
注意事项：
由于标准品一般是冻干粉，在制备后需要严格校准，所以标准品的瓶数及每瓶标准品所需加入的稀释液体积请以实际收到的试剂盒及标准品标签上的标注为准。
洗涤液(20X)在低温下可能有结晶，如果发现有结晶，请室温水浴加热使结晶完全溶解后再配制工作液。
为保证标准品的精确性，标准品配制使用后，如果有剩余请勿再次使用。
TMB溶液请勿接触氧化剂和金属，否则容易失效。
加样时，请注意每个样品或标准品必须更换枪头，一方面避免交叉污染，另一方面也避免吸取体积的误差。
由于本试剂盒均经过独立测试，所以请勿混用不同货号和不同批次的试剂盒组分，即使是同种试剂盒不同批次的试剂盒组分也不能混用。多个试剂盒同时检测时，请独立使用各个试剂盒中的试剂，请勿使用不同试剂盒中相同名称的组分。
充分混匀对保证反应结果的精准性很重要，在加液后请轻轻晃动整个96孔板，以保证混匀。
本试剂盒很多操作在室温进行，要求严格控制室温在25-28℃。温度低于25℃会导致最终检测到的吸光度显著下降。
洗涤过程非常重要，洗涤不充分会使精确度下降并导致结果误差较大。
检测标准品和样品时建议设置重复孔，以确保检测结果的可信度。
加样过程中须避免气泡的产生。
本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。