Human FGF-acidic ELISA Kit

碧云天的Human FGF-acidic ELISA Kit (Human Fibroblast Growth Factor acidic Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay Kit)，即人酸性成纤维细胞生长因子酶联免疫吸附检测试剂盒，是一种用于特异性地高灵敏地定量检测人血清、血浆或细胞培养上清液中的FGF-acidic的ELISA试剂盒。
本产品检测灵敏度高，特异性强，重复性好。多次重复检测结果表明，最小检出量为68.8pg/ml，与人的EGF、FGF basic、FGF-4、FGF-10、G-CSF、GM-CSF，小鼠的G-CSF、GM-CSF、M-CSF、VEGF165，大鼠GM-CSF、β-NGF、PDGF-BB等均没有交叉反应，板内、板间变异系数均小于10%。
酸性成纤维细胞生长因子(Fibroblast Growth Factor acidic, FGF acidic)，又称FGF-1、内皮细胞生长因子(Endothelial Cell Growth Factor, ECGF)或肝素结合生长因子(Heparin-Binding Growth Factor, HBGF-1)，是一种分子量在17-18kDa之间的非糖基化多肽，由多种细胞分泌产生。FGF-acidic分子具有155个氨基酸，不存在明显的信号肽序列，因此排除了FGF-acidic以经典的ER/Golgi通路分泌的可能。FGF-acidic可能具有一种特殊的分泌方式，并且需要热休克蛋白、磷酯酰丝氨酸、突触结合蛋白1和膜联蛋白的参与。FGF-acidic以二聚体的形式分泌，还原剂能够破坏分子间的共价键，从而释放具有生物活性的FGF-acidic。与FGF-2不同，FGF-acidic不具有可变的5’端转录起始位点，目前发现的FGF-acidic剪切变体是一种氨基酸长度为66的变体，其能与FGF受体结合但不能激活受体，具体的生物功能尚不明确。全长形式的FGF-acidic具有一个氨基酸长度在21-27之间的细胞核定位序列。人FGF-acidic与小鼠和大鼠FGF-acidic具有95%的氨基酸同源性，与牛FGF-acidic具有92%的氨基酸同源性。表达FGF-acidic的细胞主要有乳腺上皮细胞、神经细胞、骨骼及平滑肌细胞、肾近端小管上皮细胞、内皮细胞、巨噬细胞、角质细胞和成纤维细胞。
FGF家族共有5个相应受体(FGF R1-R5)，其中FGF R1-R4都属于免疫球蛋白家族(Ig-Superfamily, IgSF) I型跨膜酪氨酸激酶受体，而FGF R5虽然也属于免疫球蛋白家族成员，但缺少酪氨酸激酶区域。FGF acidic主要与FGF R1-R4结合。FGF acidic与受体结合后能够激活酪氨酸激酶介导的信号通路，FGF和肝素之间的相互作用既能激活受体也能抑制受体，当表现为激活作用时，肝素主要是作为FGF与FGF R之间的中心连接物而存在。FGF acidic也能与细胞表面的肝素单独结合，此时只能诱导发生内化作用而并不存在细胞活化作用。
FGF acidic能够促进内皮细胞发生有丝分裂，无论是细胞膜表面受体激活还是内化作用对完整的有丝分裂应答都必不可少。另外，FGF acidic还能促进平滑肌细胞、肝细胞、乳腺上皮细胞和成纤维细胞增殖。在发育和再生过程中FGF acidic同样具有重要作用。FGF-acidic能够通过Notch-Delta通路抑制神经元细胞的分化，诱导垂体前叶泌乳素细胞分化，促进受损外周神经轴突再生。另外，在CD4+T细胞增殖过程中，FGF-acidic还是重要的共刺激分子，能够促进IL-2的分泌。
本试剂盒采用双抗体夹心ELISA法(Sandwich ELISA)检测样品中人FGF-acidic的浓度，其原理见图1。人FGF-acidic特异的单克隆捕获抗体已预包被于酶标板上，当加入标准品或样品时，其中的人FGF-acidic会与捕获抗体结合。当加入生物素化的抗人FGF-acidic抗体后，生物素化抗人FGF-acidic抗体与人FGF-acidic结合，形成夹心的免疫复合物。随后加入辣根过氧化物酶标记Streptavidin (HRP-Streptavidin)，由于生物素与链霉亲和素(Streptavidin)可以特异性地结合，因此链霉亲和素连接的HRP就会与夹心的免疫复合物连接起来而被固相捕获。最后加入显色剂TMB溶液，固相捕获的辣根过氧化物酶就会催化无色的显色剂氧化成蓝色物质，在加入终止液后呈黄色。通过酶标仪检测450nm处的吸光度值就能实现定量检测。人FGF-acidic浓度与A450值呈正比，通过绘制标准曲线，对照样品吸光度值，即可计算出样品中人FGF-acidic浓度。

图1. 双抗体夹心ELISA原理图。

一个包装的本试剂盒，包括标准品检测，可以进行96次检测。
包装清单：

产品编号	产品名称	包装
PF319-1	人FGF-acidic抗体预包被板	8孔×12条
PF319-2	样品分析缓冲液	5ml
PF319-3	标准品稀释液	10ml
PF319-4	人FGF-acidic标准品	2-4瓶
PF319-5	人FGF-acidic生物素化抗体	10ml
PF319-6	辣根过氧化物酶标记Streptavidin	10ml
PF319-7	洗涤液(20X)	30ml
PF319-8	TMB溶液	10ml
PF319-9	终止液	5ml
PF319-10	封板膜(透明)	2张
PF319-11	封板膜(白色)	2张
-	说明书	1份

保存条件：
标准品4℃保存，1-2周内有效，-20℃保存6个月内有效；试剂盒其它组分4℃保存6个月内有效。除标准品外，试剂盒其它组分严禁冻存。
注意事项：
由于标准品一般是冻干粉，在制备后需要严格校准，所以标准品的瓶数及每瓶标准品所需加入的稀释液体积请以实际收到的试剂盒及标准品标签上的标注为准。
洗涤液(20X)在低温下可能有结晶，如果发现有结晶，请室温水浴加热使结晶完全溶解后再配制工作液。
为保证标准品的精确性，标准品配制使用后，如果有剩余请勿再次使用。
TMB溶液请勿接触氧化剂和金属，否则容易失效。
加样时，请注意每个样品或标准品必须更换枪头，一方面避免交叉污染，另一方面也避免吸取体积的误差。
由于本试剂盒均经过独立测试，所以请勿混用不同货号和不同批次的试剂盒组分，即使是同种试剂盒不同批次的试剂盒组分也不能混用。多个试剂盒同时检测时，请独立使用各个试剂盒中的试剂，请勿使用不同试剂盒中相同名称的组分。
充分混匀对保证反应结果的精准性很重要，在加液后请轻轻晃动整个96孔板，以保证混匀。
本试剂盒很多操作在室温进行，要求严格控制室温在25-28℃。温度低于25℃会导致最终检测到的吸光度显著下降。
洗涤过程非常重要，洗涤不充分会使精确度下降并导致结果误差较大。
检测标准品和样品时建议设置重复孔，以确保检测结果的可信度。
加样过程中须避免气泡的产生。
本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。