Human GDNF ELISA Kit

碧云天的Human GDNF ELISA Kit (Human Glial cell line-Derived Neurotrophic Factor Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay Kit)，即人胶质细胞源性神经营养因子酶联免疫吸附检测试剂盒，是一种用于特异性地高灵敏地定量检测人血清、血浆或细胞培养上清液中的GDNF的ELISA试剂盒。
本产品检测灵敏度高，特异性强，重复性好。多次重复检测结果表明，最小检出量为20.8pg/ml，与人BDNF、β-NGF、NT-3、 NT-4、CNTF等均没有交叉反应，与大鼠GDNF有35%的交叉反应，板内、板间变异系数均小于10%。
胶质细胞源性神经营养因子(Glial cell line-Derived Neurotrophic Factor,GDNF)属于转化生子因子亚族成员，调控中枢神经系统和外周神经系统中多种细胞的分化及生存能力，能够促进中脑多巴胺神经元的存活，能够为帕金森患者提供神经保护性治疗。成熟的人GDNF是由211个氨基酸的前体蛋白经酶切作用后得到的134个氨基酸多肽所组成，以同源二聚体形式存在。人GDNF与大鼠GDNF具有93%的氨基酸同源性。
GDNF发挥作用主要通过与GDNF家族受体α1 (GFRα1)结合。GFRα1主要以两种形式存在：游离形式或通过糖基磷脂酰肌醇(Glycosyl Phosphatidyl Inositol, GPI)与细胞膜结合。GDNF通过分别与膜绑定GFRα1和游离GFRα1结合，对靶细胞和周围细胞产生作用。由于GFRα1不具有跨膜域，因此GDNF/GFRα1细胞内信号传递需要依赖于辅助受体RET或NCAM。当GDNF与受体结合后会激活细胞内MAPK和AKT活性，在不同的细胞中GDNF会参与调节不同的生物学过程。能够产生GDNF的细胞主要有I型星形胶质细胞、施万细胞、神经元细胞、松果体细胞及骨骼肌细胞等。
本试剂盒采用双抗体夹心ELISA法(Sandwich ELISA)检测样品中人GDNF的浓度，其原理见图1。人GDNF特异的单克隆捕获抗体已预包被于酶标板上，当加入标准品或样品时，其中的人GDNF会与捕获抗体结合。当加入生物素化的抗人GDNF抗体后，生物素化抗人GDNF抗体与人GDNF结合，形成夹心的免疫复合物。随后加入辣根过氧化物酶标记Streptavidin (HRP-Streptavidin)，由于生物素与链霉亲和素(Streptavidin)可以特异性地结合，因此链霉亲和素连接的HRP就会与夹心的免疫复合物连接起来而被固相捕获。最后加入显色剂TMB溶液，固相捕获的辣根过氧化物酶就会催化无色的显色剂氧化成蓝色物质，在加入终止液后呈黄色。通过酶标仪检测450nm处的吸光度值就能实现定量检测。人GDNF浓度与A450值呈正比，通过绘制标准曲线，对照样品吸光度值，即可计算出样品中人GDNF浓度。

图1. 双抗体夹心ELISA原理图。

一个包装的本试剂盒，包括标准品检测，可以进行96次检测。
包装清单：

产品编号	产品名称	包装
PG348-1	人GDNF抗体预包被板	8孔×12条
PG348-2	样品分析缓冲液	5ml
PG348-3	标准品稀释液	10ml
PG348-4	人GDNF标准品	2-4瓶
PG348-5	人GDNF生物素化抗体	10ml
PG348-6	辣根过氧化物酶标记Streptavidin	10ml
PG348-7	洗涤液(20X)	30ml
PG348-8	TMB溶液	10ml
PG348-9	终止液	5ml
PG348-10	封板膜(透明)	2张
PG348-11	封板膜(白色)	2张
-	说明书	1份

保存条件：
标准品4℃保存，1-2周内有效，-20℃保存6个月内有效；试剂盒其它组分4℃保存6个月内有效。除标准品外，试剂盒其它组分严禁冻存。
注意事项：
由于标准品一般是冻干粉，在制备后需要严格校准，所以标准品的瓶数及每瓶标准品所需加入的稀释液体积请以实际收到的试剂盒及标准品标签上的标注为准。
洗涤液(20X)在低温下可能有结晶，如果发现有结晶，请室温水浴加热使结晶完全溶解后再配制工作液。
为保证标准品的精确性，标准品配制使用后，如果有剩余请勿再次使用。
TMB溶液请勿接触氧化剂和金属，否则容易失效。
加样时，请注意每个样品或标准品必须更换枪头，一方面避免交叉污染，另一方面也避免吸取体积的误差。
由于本试剂盒均经过独立测试，所以请勿混用不同货号和不同批次的试剂盒组分，即使是同种试剂盒不同批次的试剂盒组分也不能混用。多个试剂盒同时检测时，请独立使用各个试剂盒中的试剂，请勿使用不同试剂盒中相同名称的组分。
充分混匀对保证反应结果的精准性很重要，在加液后请轻轻晃动整个96孔板，以保证混匀。
本试剂盒很多操作在室温进行，要求严格控制室温在25-28℃。温度低于25℃会导致最终检测到的吸光度显著下降。
洗涤过程非常重要，洗涤不充分会使精确度下降并导致结果误差较大。
检测标准品和样品时建议设置重复孔，以确保检测结果的可信度。
加样过程中须避免气泡的产生。
本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。