Human CCL4/MIP-1βELISA Kit

碧云天的Human CCL4/MIP-1β ELISA Kit (Human Macrophage Inflammatory Protein-1β Enzyme-Linked 
ImmunoSorbent Assay Kit)，即人巨噬细胞炎性蛋白1β酶联免疫吸附检测试剂盒，是一种用于特异性地高灵敏地定量检测人血清、血浆或细胞培养上清液中的CCL4/MIP-1β的ELISA试剂盒。
本产品检测灵敏度高，特异性强，重复性好。多次重复检测结果表明，最小检出量为5.9pg/ml，与人ANG 、EGF 、Epo 、FGF acidic 、HGF、 IFN-γ、 FGF basic、小鼠CCL4等均没有交叉反应，板内、板间变异系数均小于10%。
巨噬细胞炎性蛋白(Macrophage Inflammatory Proteins,MIP-1)，又称趋化因子4 (Chemokine C-C motif Ligand 4,CCL4)，具有两种亚型：MIP-1α和MIP-1β，属于CC趋化因子亚族。人MIP-1β的cDNA首先编码得到MIP-1β前体蛋白，其中包括23个氨基酸的信号肽和69个氨基酸的成熟非糖基化MIP-1β。活化的T细胞、B细胞、单核细胞和肥大细胞都能表达MIP-1β，另外在动脉粥样硬化患者巨噬细胞中也检测到了MIP-1β的表达。成熟的人MIP-1α和MIP-1β与小鼠相应的蛋白分别具有75%和77%的同源性，二者彼此之间也具有70%的氨基酸同源性。小鼠和人的MIP-1蛋白之间存在着种间交叉反应性。
趋化因子参与多种免疫和炎症反应，是特定淋巴细胞的化学引诱物和激活剂。MIP-1β与其它CC趋化因子亚族成员一样，都能够对单核细胞产生化学趋化作用。另外，MIP-1β对T淋巴细胞也有趋化作用，并能诱导T淋巴细胞粘附。趋化因子活性受到G蛋白偶联受体调节，CC趋化因子亚族受体，又称MIP-1α/RANTES受体，与MIP-1α、RANTES、MIP-1β和MCP-1具有不同的亲和力。
本试剂盒采用双抗体夹心ELISA法(Sandwich ELISA)检测样品中人CCL4/MIP-1β的浓度，其原理见图1。人CCL4/MIP-1β特异的单克隆捕获抗体已预包被于酶标板上，当加入标准品或样品时，其中的人CCL4/MIP-1β会与捕获抗体结合。当加入生物素化的抗人CCL4/MIP-1β抗体后，生物素化抗人CCL4/MIP-1β抗体与人CCL4/MIP-1β结合，形成夹心的免疫复合物。随后加入辣根过氧化物酶标记Streptavidin (HRP-Streptavidin)，由于生物素与链霉亲和素(Streptavidin)可以特异性地结合，因此链霉亲和素连接的HRP就会与夹心的免疫复合物连接起来而被固相捕获。最后加入显色剂TMB溶液，固相捕获的辣根过氧化物酶就会催化无色的显色剂氧化成蓝色物质，在加入终止液后呈黄色。通过酶标仪检测450nm处的吸光度值就能实现定量检测。人CCL4/MIP-1β浓度与A450值呈正比，通过绘制标准曲线，对照样品吸光度值，即可计算出样品中人CCL4/MIP-1β浓度。

图1. 双抗体夹心ELISA原理图。

一个包装的本试剂盒，包括标准品检测，可以进行96次检测。
包装清单：

产品编号	产品名称	包装
PC153-1	人CCL4/MIP-1β抗体预包被板	8孔×12条
PC153-2	样品分析缓冲液	5ml
PC153-3	标准品稀释液(5X)	10ml
PC153-4	人CCL4/MIP-1β标准品	2-4瓶
PC153-5	人CCL4/MIP-1β生物素化抗体	10ml
PC153-6	辣根过氧化物酶标记Streptavidin	10ml
PC153-7	洗涤液(20X)	30ml
PC153-8	TMB溶液	10ml
PC153-9	终止液	5ml
PC153-10	封板膜(透明)	2张
PC153-11	封板膜(白色)	2张
-	说明书	1份

保存条件：
标准品4℃保存，1-2周内有效，-20℃保存6个月内有效；试剂盒其它组分4℃保存6个月内有效。除标准品外，试剂盒其它组分严禁冻存。
注意事项：
由于标准品一般是冻干粉，在制备后需要严格校准，所以标准品的瓶数及每瓶标准品所需加入的稀释液体积请以实际收到的试剂盒及标准品标签上的标注为准。
洗涤液(20X)在低温下可能有结晶，如果发现有结晶，请室温水浴加热使结晶完全溶解后再配制工作液。
为保证标准品的精确性，标准品配制使用后，如果有剩余请勿再次使用。
TMB溶液请勿接触氧化剂和金属，否则容易失效。
加样时，请注意每个样品或标准品必须更换枪头，一方面避免交叉污染，另一方面也避免吸取体积的误差。
由于本试剂盒均经过独立测试，所以请勿混用不同货号和不同批次的试剂盒组分，即使是同种试剂盒不同批次的试剂盒组分也不能混用。多个试剂盒同时检测时，请独立使用各个试剂盒中的试剂，请勿使用不同试剂盒中相同名称的组分。
充分混匀对保证反应结果的精准性很重要，在加液后请轻轻晃动整个96孔板，以保证混匀。
本试剂盒很多操作在室温进行，要求严格控制室温在25-28℃。温度低于25℃会导致最终检测到的吸光度显著下降。
洗涤过程非常重要，洗涤不充分会使精确度下降并导致结果误差较大。
检测标准品和样品时建议设置重复孔，以确保检测结果的可信度。
加样过程中须避免气泡的产生。
本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。