Human Osteopontin ELISA Kit

碧云天的Human OsteopontinELISA Kit(Human OsteopontinEnzyme-Linked ImmunoSorbent AssayKit)，即人骨桥蛋白酶联免疫吸附检测试剂盒，是一种用于特异性地高灵敏地定量检测人血清、血浆或细胞培养上清液中的Osteopontin的ELISA试剂盒。

本产品检测灵敏度高，特异性强，重复性好。多次重复检测结果表明，最小检出量为59.7pg/ml，与人的Enteropeptidase、MMP-7及小鼠OPN没有交叉反应，板内、板间变异系数均小于10%。

骨桥蛋白(osteopontin, OPN)是一种分子量为35kDa的粘附性糖蛋白，主要在骨、牙、肾、上皮衬里组织(epithelial lining tissues)、活化的T细胞、巨噬细胞和母乳中表达。OPN经MMP-3和MMP-4以及凝血酶(thrombin)处理，以细胞因子样可溶性蛋白或固定化细胞外基质蛋白的形式存在。OPN在多种生理和病理过程中起重要作用，包括细胞存活、粘附、迁移、血管生成、凋亡和炎症。高表达的OPN被作为乳腺癌、多发性骨髓瘤(multiple myeloma)和前列腺癌患者预后不良的生物标志物。此外，OPN也作为巨噬细胞、树突状细胞和T细胞的趋化因子参与免疫应答。它影响细胞介导的免疫和体液免疫，以及Th1细胞因子功能，还可促进B淋巴细胞增殖和免疫球蛋白的产生。

本试剂盒采用双抗体夹心ELISA法(Sandwich ELISA)检测样品中人OPN的浓度，其原理见图1。人OPN特异的单克隆捕获抗体已预包被于酶标板上，当加入标准品或样品时，其中的人OPN会与捕获抗体结合。当加入生物素化的抗人OPN抗体后，生物素化抗人OPN抗体与人OPN结合，形成夹心的免疫复合物。随后加入辣根过氧化物酶标记Streptavidin(HRP-Streptavidin)，由于生物素与链霉亲和素(Streptavidin)可以特异性地结合，因此链霉亲和素连接的HRP就会与夹心的免疫复合物连接起来而被固相捕获。最后加入显色剂TMB溶液，固相捕获的辣根过氧化物酶就会催化无色的显色剂氧化成蓝色物质，在加入终止液后呈黄色。通过酶标仪检测450nm处的吸光度值就能实现定量检测。人OPN浓度与A450值呈正比，通过绘制标准曲线，对照样品吸光度值，即可计算出样品中靶蛋白浓度。

图1.双抗体夹心ELISA原理图。

一个包装的本试剂盒，包括标准品检测，可以进行96次检测。

标准品4℃保存，1-2周内有效，-20℃保存6个月内有效，试剂盒其它组分4℃保存6个月内有效。除标准品外，试剂盒其它组分严禁冻存。

由于标准品一般是冻干粉，在制备后需要严格校准，所以标准品的瓶数及每瓶标准品所需加入的稀释液体积请以实际收到的试剂盒及标准品标签上的标注为准。

洗涤液(20X)在低温下可能有结晶，如果发现有结晶，请室温水浴加热使结晶完全溶解后再配制工作液。

为保证标准品的精确性，标准品配制使用后，如果有剩余请勿再次使用。

TMB溶液请勿接触氧化剂和金属，否则容易失效。

加样时，请注意每个样品或标准品必须更换枪头，一方面避免交叉污染，另一方面也避免吸取体积的误差。

由于本试剂盒均经过独立测试，所以请勿混用不同货号和不同批次的试剂盒组分，即使是同种试剂盒不同批次的试剂盒组分也不能混用。多个试剂盒同时检测时，请独立使用各个试剂盒中的试剂，请勿使用不同试剂盒中相同名称的组分。

充分混匀对保证反应结果的精准性很重要，在加液后请轻轻晃动整个96孔板，以保证混匀。

本试剂盒很多操作在室温进行，要求严格控制室 温在25-28℃。温度低于25℃会导致最终检测到的吸光度显著下降。

洗涤过程非常重要，洗涤不充分会使精确度下降并导致结果误差较大。

检测标准品和样品时建议设置重复孔，以确保检测结果的可信度。

加样过程中须避免气泡的产生。

本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。