Human KGF/FGF-7 ELISA Kit

碧云天的KGF/FGF-7 ELISA Kit (Human Keratinocyte Growth Factor Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay Kit)，即人角质细胞生长因子酶联免疫吸附检测试剂盒，是一种用于特异性地高灵敏地定量检测人血清、血浆或细胞培养上清液中的KGF/FGF-7的ELISA试剂盒。
本产品检测灵敏度高，特异性强，重复性好。多次重复检测结果表明，最小检出量为16.2pg/ml，与FGF-4、FGF-5、FGF-6、FGF acidic等均没有交叉反应，板内、板间变异系数均小于10%。
人角质细胞生长因子(Keratinocyte Growth Factor, KGF)，又称成纤维细胞生长因子7 (Fibroblast Growth Factor, FGF-7)，是一种分子量为28kDa的单链肝素结合糖蛋白。成熟的KGF含有163个氨基酸，具有5个半胱氨酸残基。在FGF家族中，KGF与FGF-2和FGF-3分别具有29%和38%的氨基酸同源性。表达KGF的细胞主要有成纤维细胞、胚胎间质细胞和平滑肌细胞。
KGF受体是bek基因的编码产物，是一种具有酪氨酸激酶活性的细胞表面受体，又称FGF R2。FGF R2分子量为135kDa，属于I型跨膜糖蛋白，胞外域包含3个免疫球蛋白样区域和一个肝素结合区。该受体在体内表达广泛，且与FGF-1、FGF-2和FGF-4具有较高亲和力，FGF-5和FGF-9也能与之结合，但亲和力较低。KGF R受体与标准的FGF R2仅在免疫球蛋白样区域有差异，这样微小的改变会导致该受体与FGF2亲和力明显下降，但使得KGF能够与之结合。体内仅有一些上皮细胞能够表达KGF R，例如角质细胞、变移上皮细胞、胃柱状上皮细胞、乳腺上皮细胞和肝细胞等。除了KGF R，KGF还能够与硫酸乙酰肝素蛋白聚糖(Heparan Sulfate Proteoglycan Protein, HSPG)结合，但是结合后HSPG所起到的生物学功能暂时还不明确。
KGF主要作为一种旁分泌调节因子调节多种表皮细胞的增殖和分化。在伤口愈合期间，KGF和促炎性因子共同作用促进表皮再生。细胞因子IL-1和IL-6不仅仅能激活周围结缔组织细胞导致组织重塑，还能够刺激成纤维细胞产生KGF，促进表皮再生和伤口愈合。
本试剂盒采用双抗体夹心ELISA法(Sandwich ELISA)检测样品中人KGF/FGF-7的浓度，其原理见图1。人KGF/FGF-7特异的单克隆捕获抗体已预包被于酶标板上，当加入标准品或样品时，其中的人KGF/FGF-7会与捕获抗体结合。当加入生物素化的抗人KGF/FGF-7抗体后，生物素化抗人KGF/FGF-7抗体与人KGF/FGF-7结合，形成夹心的免疫复合物。随后加入辣根过氧化物酶标记Streptavidin (HRP-Streptavidin)，由于生物素与链霉亲和素(Streptavidin)可以特异性地结合，因此链霉亲和素连接的HRP就会与夹心的免疫复合物连接起来而被固相捕获。最后加入显色剂TMB溶液，固相捕获的辣根过氧化物酶就会催化无色的显色剂氧化成蓝色物质，在加入终止液后呈黄色。通过酶标仪检测450nm处的吸光度值就能实现定量检测。人KGF/FGF-7浓度与A450值呈正比，通过绘制标准曲线，对照样品吸光度值，即可计算出样品中人KGF/FGF-7浓度。

图1. 双抗体夹心ELISA原理图。

一个包装的本试剂盒，包括标准品检测，可以进行96次检测。
包装清单：

产品编号	产品名称	包装
PK678-1	人KGF/FGF-7抗体预包被板	8孔×12条
PK678-2	样品分析缓冲液	5ml
PK678-3	标准品稀释液	10ml
PK678-4	人KGF/FGF-7标准品	2-4瓶
PK678-5	人KGF/FGF-7生物素化抗体	10ml
PK678-6	辣根过氧化物酶标记Streptavidin	10ml
PK678-7	洗涤液(20X)	30ml
PK678-8	TMB溶液	10ml
PK678-9	终止液	5ml
PK678-10	封板膜(透明)	2张
PK678-11	封板膜(白色)	2张
-	说明书	1份

保存条件：
标准品4℃保存，1-2周内有效，-20℃保存6个月内有效；试剂盒其它组分4℃保存6个月内有效。除标准品外，试剂盒其它组分严禁冻存。
注意事项：
由于标准品一般是冻干粉，在制备后需要严格校准，所以标准品的瓶数及每瓶标准品所需加入的稀释液体积请以实际收到的试剂盒及标准品标签上的标注为准。
洗涤液(20X)在低温下可能有结晶，如果发现有结晶，请室温水浴加热使结晶完全溶解后再配制工作液。
为保证标准品的精确性，标准品配制使用后，如果有剩余请勿再次使用。
TMB溶液请勿接触氧化剂和金属，否则容易失效。
加样时，请注意每个样品或标准品必须更换枪头，一方面避免交叉污染，另一方面也避免吸取体积的误差。
由于本试剂盒均经过独立测试，所以请勿混用不同货号和不同批次的试剂盒组分，即使是同种试剂盒不同批次的试剂盒组分也不能混用。多个试剂盒同时检测时，请独立使用各个试剂盒中的试剂，请勿使用不同试剂盒中相同名称的组分。
充分混匀对保证反应结果的精准性很重要，在加液后请轻轻晃动整个96孔板，以保证混匀。
本试剂盒很多操作在室温进行，要求严格控制室温在25-28℃。温度低于25℃会导致最终检测到的吸光度显著下降。
洗涤过程非常重要，洗涤不充分会使精确度下降并导致结果误差较大。
检测标准品和样品时建议设置重复孔，以确保检测结果的可信度。
加样过程中须避免气泡的产生。
本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。