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- 2025年07月10日
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- 详细信息
- 文献和实验
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57
- 英文名：
Cell Apoptosis Detection Kit(PI)
- 保质期：
详见说明书
- 供应商：
上海研生
- 保存条件：
低温冷藏
- 规格：
100T
英文名称：Cell Apoptosis Detection Kit(PI)
产品规格：100T
发货周期：1～3天
荧光标记是研究细胞凋亡的最基本方法。细胞凋亡的形态学变化及生化学变化都可以通过荧光标记的的方法而检测出来，从而区别鉴别出正常细胞、凋亡细胞、坏死细胞以及不同凋亡时期或细胞周期。
化丙啶（PropidiumIodide,PI）是一种DNA结合性染料，其激发和发射波长分别为536nm和617nm，产生红色荧光，但无膜通透性，不能透过活细胞膜，只能染死细胞。
在荧光显微镜下观察，正常细胞不能着色，早期凋亡细胞呈微弱红光，晚期凋亡细胞红光加强，坏死细胞呈强红色荧光。采用流式细胞仪检测细胞周期时，凋亡细胞因内源性核酸酶被激活，使DNA广泛降解、断裂，DNA结构发生剧变，随着凋亡的进程，DNA断裂产生的小分子量DNA溢出胞外，细胞总DNA量降低，于正常G0/G1细胞群前出现一DNA低染细胞群，即G1峰前出现亚二倍体峰（sub-G1）或称A0细胞群，即凋亡细胞群。用本试剂盒的PI直接对细胞DNA染色后，进行流式细胞仪分析，即可检测到凋亡细胞DNA的变化。
储存2-8℃，避光，有效期一年。
实验报告：
一、分离与培养：
1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，最后将组织剪成1mm3左右大小；
2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 胰酶和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；
3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织完全被消化；
4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；
5、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；
二、免疫荧光鉴定：
1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%在室温条件下固定细胞15min；
2、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
3、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；
4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；
5、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；
6、用PBS冲洗3次，每次10min，最后在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。
培养操作步骤：1．碘化丙啶PI染色试剂盒价格用盖片镊将盖玻片自75%乙醇中取出，用无菌丝绸布擦拭干净，不要用纱布；
2．将盖玻片轻轻放入6孔培养板（每孔一片）或培养皿中（每个平皿可放置2-3片）；
3．在距离紫外灯直射范围内20-30 厘米处照射2-3小时；
4．将经过计数的细胞悬浮液移入培养板中，使盖玻片完全浸在培养液中；
5．将培养板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，当贴壁细胞生长至覆盖培养板底部2/3面积时，将培养板取出，用盖片镊轻轻取出盖玻片，用蒸馏水漂洗后即可进行快速固定以及免疫细胞化学检测。
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注意事项：
尽管经测试Annexin V-FITC反复冻融5次对于其检测效果无显著影响，但为取得良好的使用效果，3-6个月内推荐4℃保存，并适当注意避免反复冻融。
如果有细菌或真菌污染，会严重影响检测效果。
染色后宜尽快检测，时间过长可能会导致凋亡或坏死细胞的数量增加。
如果细胞收集过程中使用了胰酶，需注意设法去除残留的胰酶。残留的胰酶会消化并降解Annexin V-FITC，导致染色失败。
荧光物质均易发生淬灭，在进行荧光观察时，尽量缩短观察时间，同时在操作和存放过程中也尽量注意避光保存。
用于流式细胞仪检测时，如果发现Annexin V-FITC单独染色时出现了过多的PI假阳性细胞，并且通过调整相关设置和参数也无法改善，可以用PBS将Annexin V-FITC稀释3-10倍后再进行检测，这样通常可以有效减少假阳性的坏死细胞。
需自备PBS。
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为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
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文献和实验的时候出问题了 细胞估计已经破裂 固定时候应该缓慢添加固定液 有的时候固定液就是用PBS和无水乙醇配置的。 Fasta921 我做的步骤：接种适当浓度细胞于培养皿中，培养过夜后，经0.25%胰蛋白酶消化,冷磷酸盐缓冲液(PBS)洗涤后离心,用70%(体积分数)预冷乙醇悬浮细胞于-20度固定过夜后,离心收集细胞,用PBS洗3次去除乙醇,细胞团重悬于PBS中,用20 μg/ml含RNaseA的碘化丙啶PI染色液避光染色30 min,经100目尼龙
一、概述 在正常细胞中，磷脂酰丝氨酸只分布在细胞膜脂质双层的内侧，细胞发生凋亡最早期，膜磷脂酰丝氨酸（PS）由脂膜内侧翻向外侧，这一变化早于细胞皱缩、染色质浓缩、DNA片断化和细胞膜的通透性增加等凋亡现象。 AnnexinV是一种磷脂结合蛋白，与磷脂酰丝氨酸有高度亲和力，故可通过细胞外侧暴露的磷脂酰丝氨酸与凋亡早期细胞的胞膜结合。因此AnnexinV被作为检测细胞早期凋亡的灵敏指标之一。 碘化丙啶（Propidium Iodide,PI）是一种核酸染料，它不能透过完整的细胞
示例： Jurkat细胞用1μM喜树碱(Camptothecin) (左)或未加药 (右)处理4h，FITC-Annexin V/PI荧光双染细胞凋亡检测试剂盒染色后，流式细胞仪荧光检测。 Annexin V-FITC单阳性细胞为早期凋亡细胞，Annexin V-FITC和PI染色双阳性的细胞为坏死细胞或者晚期凋亡。PI单染色阳性位裸核细胞。 实测数据可能会因细胞类型、细胞凋亡情况，检测仪器等的不同而存在差异，图中数据仅供参考。 流式检测细胞凋亡的数据分析方法： 1） 选中所有颗粒，将FSC
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