血凝块基因组DNA提取试剂盒（离心吸附柱法)

特别提示：包括血凝块基因组DNA提取试剂盒（离心吸附柱法)在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：血凝块基因组DNA提取试剂盒（离心吸附柱法)
英文名称：Extraction kit for genomic DNA from blood clots
产品货号：WH0006
产品规格：50次

本试剂盒采用可以特异性结合DNA的离心吸附柱和独特的缓冲液系统，提取血液中的基因组DNA。离心吸附柱中采用的硅基质材料为本公司特有新型材料，高效、专一吸附DNA，可zuì大限度去除杂质蛋白及细胞中其他有机化合物。提取的基因组DNA片段大，纯度高，质量稳定可靠。使用本试剂盒回收的DNA可适用于各种常规操作，包括酶切、PCR、文库构建、Southern杂交等实验。简单快速，一小时内即可获得超纯的基因组DNA。常见得率（抗凝血样本）20-60μg/ml。

提取实例：

应用本试剂盒提取不同量的血凝块（液化后的使用量)，洗脱体积为100μl，提取后进行琼脂糖电泳，上样量为3μl，分子量标准D15000（WH0142)

试剂盒组成：

组分	50T
缓冲液GE	40ml
缓冲液GD	13 ml
漂洗液PW	15 ml
洗脱缓冲液TB	15 ml
Proteinase K	2×1 ml
吸附柱CB	10个
收集管（15 ml）	20个

保存条件：室温（15-25℃）干燥条件下，可保存12个月，更长时间的保存可置于2-8℃。2-8℃保存条件下，若溶液产生沉淀，使用前应将试剂盒内的溶液在室温放置一段时间，必要时可在37℃水浴中预热10min，以溶解沉淀。

选配组分：RNase A（100mg/ml）（目录号：WH0217）；液化柱CX2（目录号：WH9002）

注意事项：（请务必在使用本试剂盒之前阅读此注意事项)
1．样品应避免反复冻融，否则会导致提取的DNA片段较小且提取量也下降。
2．若缓冲液GE中有沉淀，可在37℃水浴中重新溶解，摇匀后使用。
3．所有离心步骤均为使用台式离心机，室温下离心。
4．若提取血凝块样本，请自备血凝块液化柱CX2，目录号：WH9002。

使用方法：
第一次使用前请先在缓冲液GD和漂洗液PW中加入无水乙醇，加入体积请参照瓶上的标签。

1．向15 ml离心管加入200μl Proteinase K （20 mg/ml)溶液。
2．处理材料：
a．如果提取血液样本，直接加入0.5-3 ml血液样本，混匀。
b．如果提取血凝块样本，将一个血凝块液化柱CX2（选配组分，目录号：WH9002）放入上述装有Proteinase K溶液的15 ml离心管中，再向过滤柱加入0.5-3 ml血凝块样本，6000rpm（~8228×g）离心1 min。
  注意：也可以先将血液样本加到离心管中，或者先将处理后的血凝块样本离心收集到离心管中，再加入Proteinase K，但要保证彻底混匀。
3．向装有血液样本的离心管中加入2.4 ml缓冲液GE，振荡30 sec混匀。
  注意：若提取2-3 ml样本，可以增加缓冲液GE用量至3.6 ml。
  注意：如果需要去除RNA，可加入40 μl RNase A（100mg/ml）溶液（选配组分，目录号：WH0217），振荡15 sec，室温放置5 min。
4．65℃放置10min，每隔3 min振荡一次，以助裂解。简短离心以收集管盖内壁的水珠（如遇特殊样本，未能很好裂解，请适当延长孵育时间）。
5．向样本中加入2 ml无水乙醇，混匀，此时可能出现絮状沉淀。
  注意：若从水浴锅取出的样本温度过高，请在室温冷却后再加入无水乙醇。若提取2-3 ml血液样本，可以增加无水乙醇量至3 ml。
6．将上一步所得溶液和絮状沉淀的一半转移至一个吸附柱CB5中（吸附柱放入15 ml收集管中），3000rpm （~1850×g)离心3 min，倒掉废液，将吸附柱CB5放回收集管中。
7．将步骤6剩余的溶液再转入同一个吸附柱中，重复步骤6操作。
8．向吸附柱CB5中加入2 ml缓冲液GD（使用前请先检查是否已加入无水乙醇），5000rpm（~4500×g)离心1 min，倒掉废液，将吸附柱CB5放回收集管中。
9．向吸附柱CB5中加入2 ml缓冲液PW（使用前请先检查是否已加入无水乙醇），5000rpm（~4500×g)离心1 min，倒掉废液，将吸附柱CB5放回收集管中。
10．向吸附柱CB5中加入2 ml缓冲液PW，5000rpm （~4500×g)离心15 min，丢弃收集管，将吸附柱CB5放到一个新的15 ml离心管中。
  注意：漂洗液中乙醇的残留会影响后续的酶反应（酶切、PCR等）实验，此步骤目的是将剩余的乙醇清除。
11．向吸附膜的中间部位悬空滴加300 μl洗脱缓冲液TB，室温放置5 min，5000rpm（~4500×g)离心2 min，将溶液收集到离心管中。
  注意：洗脱缓冲液体积不应少于200μl，体积过小影响回收效率。为增加基因组DNA的得率，可将离心得到的溶液再加入吸附柱CB5中，室温放置2 min，5000rpm（~4500×g)离心2 min。洗脱液的pH值对于洗脱效率有很大影响。若用ddH2O做洗脱液应保证其pH值在7.0-8.5范围内，pH值低于7.0会降低洗脱效率；且DNA产物应保存在-20℃，以防DNA降解。

DNA浓度及纯度检测：
1．得到的基因组DNA片段的大小与样品保存时间、操作过程中的剪切力等因素有关。回收得到的DNA片段可用琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计检测浓度与纯度。
2．DNA应在OD₂₆₀处有显著吸收峰，OD₂₆₀值为1相当于大约50 μg/ml双链DNA、40 μg/ml单链DNA。
3．OD₂₆₀/OD₂₈₀比值应为1.7-1.9，如果洗脱时不使用洗脱缓冲液，而使用ddH2O，比值会偏低，因为pH值和离子存在会影响光吸收值，但并不表示纯度低。