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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存:
158
- 英文名:
Blood Direct PCR Kit
- 保质期:
长期
- 供应商:
北京百奥莱博科技有限公司
- 保存条件:
-20℃,避免反复冻融
- 规格:
50μl×40次|50μl×200次
特别提示:包括血液直接PCR扩增试剂盒在内,本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!
产品名称:血液直接PCR扩增试剂盒
英文名称:Blood Direct PCR Kit
产品货号:WE0120
产品规格:50μl×40次|50μl×200次
本试剂盒是由热启动酶、PCR Buffer、dNTPs、Mg2+以及PCR稳定剂和增强剂等组成的预混体系,本产品使用简便,无需事先提纯可直接用血液为模板扩增目的基因,可有效扩增高GC含量的模板和引物。
试剂盒组成:
| 组份 | 50μl×40次 | 50μl×200次 |
| 2×Blood Direct PCR Mix | 1ml | 5×1ml |
| ddH2O | 1ml | 5×1ml |
注意事项:建议使用时添加≤10%的全血为模板,加上血液后用涡旋器将管中各组分轻轻混匀。
使用方法:
以下举例为常规PCR反应体系和反应条件,实际操作中应根据模板、引物结构和目的片段大小不同进行相应的改进和优化。
1、PCR反应体系
| 试剂 | 50μl反应体系 | 20μl反应体系 |
| 2×Blood Direct PCR Mix | 25μl | 10μl |
| Forward Primer,10μM | 1μl | 0.4μl |
| Reverse Primer,10μM | 1μl | 0.4μl |
| Template Blood | 0.5-5μl | 0.25-2μl |
| ddH2O | up to 50μl | up to 20μl |
注意:引物浓度请以终浓度0.1-1.0μM作为设定范围的参考。扩增效率不高的情况下,可提高引物的浓度;发生非特异性反应时,可降低引物浓度,由此优化反应体系。
2、PCR反应条件
| 步骤 | 温度 | 时间 | 循环数 |
| 预变性 | 94℃ | 2 min | |
| 变性 | 94℃ | 30 s | 35-40个循环 |
| 退火 | 55-60℃ | 30 s | |
| 延伸 | 72℃ | 30-60 s | |
| 终延伸 | 72℃ | 5 min |
注意:
1)一般实验中退火温度比扩增引物的熔解温度Tm低5℃,无法得到理想的扩增效率时,适当降低退火温度;发生非特异性反应时,提高退火温度,由此优化反应条件。
2)延伸时间应根据所扩增片段大小设定,本产品中所含热启动酶的扩增效率为1-2 kb/min。
3)可根据扩增产物的下游应用设定循环数。如果循环次数太少,扩增量不足;如果循环次数太多,错配机率会增加,非特异性背景严重。所以在保证产物得率的前提下应尽量减少循环次数。
储存条件:-20℃,避免反复冻融。
我公司销售的血液直接PCR扩增试剂盒优惠促销,质量上佳,价格普惠,欢迎广大新老客户踊跃订购。
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