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- 百奥莱博
- QN2700-UZJ
- 北京
- 2025年07月14日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
137
- 英文名：
ECL Western Blotting Detection Kit(Mouse/Rabbit IgG)
- 保质期：
三个月
- 供应商：
北京百奥莱博科技有限公司
- 保存条件：
-20℃避光密闭
- 规格：
1盒
特别提示：包括化学发光法检测试剂盒(小鼠/兔IgG)在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！
产品名称：化学发光法检测试剂盒(小鼠/兔IgG)
英文名称：ECL Western Blotting Detection Kit(Mouse/Rabbit IgG)
产品货号：QN2700
产品规格：1盒
SDS-PAGE电泳后，蛋白质按照分子量大小分离，转移到固相载体（例如硝酸纤维素薄膜）后，固相载体以非共价键形式吸附蛋白质，以固相载体上的蛋白质或多肽作为抗原，与对应的抗体起免疫反应，再与酶标记的第二抗体起反应，加入发光底物后，能让胶片感光。经显影和定影后，可以在胶片上显示出条带（抗原所在位置）。
1．封闭试剂：30g(可配制 400ml)。
2．10倍浓缩抗体稀释液，50ml。
3．HRP标记抗小鼠/兔IgG二抗，0.3ml，效价为1:500～1000。
4．ECL显色液，25mlA+25mlB。
保存：-20℃避光密闭保存，一年有效。若经常使用，可将封闭试剂，抗体稀释液和ECL显色液存放于2-8℃以方便使用。
使用方法(常规电泳转膜后)：
1．清洗转印膜：将膜剥离下后，作好标记，一般在左上角剪一缺口。室温用 TBS-T 漂洗 3 次每次 5min,以尽量洗去转印膜上的 SDS，防止影响后面的抗体结合。
2．按 5g 封闭试剂加 100ml 双蒸水计，配制膜封闭液，配好的膜封闭液为乳白色悬液，将漂洗过的转印膜放入封闭液内，置摇床孵育，室温封闭 30min。用 TBS-T 缓冲液（PH7.6）洗膜，室温漂洗 3 次每次 5min。
3．将 10×抗体稀释液用双蒸水稀释成 1×（10ml 10×抗体稀释液加入 90ml 双蒸水，混匀，可 4℃保存三个月）。此稀释液可作为一抗和二抗的稀释液。
4．用 1×的抗体稀释液稀释一抗。根据用量以及一抗的推荐稀释浓度来稀释一抗。将杂交膜放入杂交袋中，加入一抗工作液，封口，4℃孵育过夜或 37℃摇动孵育 2h。此用过的抗体一般可回收第二天再使用一次。
注：如果所加一抗不同，可在此步将膜沿电泳方向剪成条，分别作好标记，分开孵育。
5．用 TBS-T 缓冲液（PH7.6）洗膜，室温漂洗 3 次每次 5min。
6．用 1×的抗体稀释液稀释二抗。根据用量，按 10ml 抗体稀释液加入 15μl HRP 标记二抗的比例，配制二抗工作液。将杂交膜放入杂交袋中，加入二抗工作液，封口，37℃摇动孵育 1h。此用过的抗体一般可回收第二天再使用一次。
7．用 TBS-T 缓冲液（PH7.6）洗膜，室温漂洗 3 次每次 10min。
8．根据用量，取 ECL 发光液 A、B 等量混匀，加在膜正面，暗室显色液，在上面盖一层平整的透明纸。再取出感光胶片，做好标记，轻轻的放在膜上，显色 30 秒到 1 分钟，取出胶片浸入显影液中，观察显色情况，再放入定影液中 1 分钟。根据条带强弱，再次感光时可减短或者加长感光时间（从5 秒到 30 分钟）以期达到理想结果。
注意事项：
1．请根据一抗来源选择试剂盒。
2．可以根据显色结果来优化实验反应时间。如背景过深，可延长膜封闭时间，加长最终漂洗次数与时间。如果条带过弱，可增加抗体浓度，可延长抗体孵育时间或加长感光时间。
3．TBS-T（0.01M，PH7.6）配制方法：称取 NaCl 8.5g ，Tris 1.21g ，用 800ml 的双蒸水溶解，用盐酸调 pH 到 7.6，再加入0.5ml Tween-20，用双蒸水 加至 1000ml，混匀即可。（也可按照自己的配制习惯来配制）
我公司销售的 化学发光法检测试剂盒(小鼠/兔IgG)现货供应，质量上佳，价格普惠，欢迎广大新老客户踊跃订购。
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文献和实验,Santa Cruz等公司的原装抗体或进口分装抗体.具体请参见免疫学部分产品----第一抗体. C.标记二抗: 根据一抗的来源选择二抗. 购买信息: 请参见免疫学部分试剂---各种标记抗体 D.底物系统: 采用常规底物或化学发光底物. (1)显色法: 常用底物为BCIP/NBT或DAB .此法简单,但灵敏度不高,并难以从膜上去除. (2)化学发光法: 目前比较常用的方法.灵敏度较高,检测时可采用X光胶片或CCD成像系统. 不同显色方法产品比较
激活－核转运检测试剂盒仅染色p65，不染色RelB、C-Rel、p50和p52。使用本试剂盒染色后NF-κB呈红色荧光，细胞核呈蓝色荧光.思考信号转导和检测的理论 我做了这样的回答(个人意见.大家可以讨论!)： 这种理论上来讲可行,但是实际操作可能拿不到你想要得结果,原因很简单,凭染色来判断是很难区分程度上的差异的,就比如做WB实验,经典的还是化学发光的方法,显色的方法只能得到信号比较强的蛋白,遇到信号比较弱的蛋白就误差很大了, 第二点,并不是所有能进核的蛋白都有结合DNA
但是不可逆的方式结合。由于表面包被层的多孔性和厚度使单位面积的DNA结合能力比常规化学表面处理玻片要高得多，使得检测更加灵敏。其杂交方式和传统的杂交一样。适用的检测方法包括同位素检测、化学发光法和荧光检测——由于包被的多聚物有效降低对入射光的散射，FAST Slide同样适合用激光共聚焦成像系统进行荧光检测。 TeleChem ArrayIt Super Microarray Substrates（25mm x 76mm）采用高清洁度，超平表面的的玻片并进行化学修饰，各项技术指标居同类产品前列
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