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自噬研究用抗体
◆ 兔抗大鼠LC3
LC3是芽殖酵母自噬相关蛋白Atg8的哺乳类类似物。LC3在细胞质上合成后,切除C末端形成LC3-I。LC3-I与E1样泛素连接酶Atg7、 E2样泛素连接酶Atg3携带的磷脂结合形成LC3-II。LC3-II结合形成自噬膜型。因此,LC3被用做自噬的标志物之一。本产品可同时识别 LC3-I、LC3-II。
● 形状:抗血清。不含防腐剂、稳定剂
● 抗原:合成肽,与大鼠LC3B的氨基酸序列5-18 相当
● 特异性:与人、大鼠、小鼠LC3B反应
实际稀释倍率:免疫细胞化学 1:200~500(共聚焦显微镜)
Western blotting 1:500~5,000
● 推荐稀释缓冲液:1% BSA in 20mmol/l Tris-HCl(pH 7.5), 0.15mol/l NaCl, 0.1% NaN3
※ 背景较高情况下,请使用加了0.1%Tween20的稀释缓冲液。
小鼠MEF提取液Western blotting
|
一抗:本品(1:5,000)、室温、反应1小时 二抗:HRP标记 山羊抗兔IgG(1:20,000),室温、反应1小时 (数据提供:顺天堂大学医学部生化学 第一讲座 上野隆) |
HeLa细胞的荧光染色
| 样品:经多聚.甲醛固定和毛地黄皂苷处理的HeLa细胞 封闭液:1% BSA和含1%正常羊血清的20mmol/lTris-HCl(pH7.5), 0.15mol/l NaCl, 0.1% NaN3、30℃、反应1小时 一抗:本品(1:500)、30℃、反应1小时 二抗:Cy3标记羊抗兔IgG(1:2,000)、30℃、反应1小时 (数据提供:顺天堂大学大学院医学研究科研基地ー吉川美加) |
| 产品编号 |
产品名称 |
规格 |
容量 |
| 010-22841 |
Anti Rat LC3, Rabbit |
免疫组化用 |
50μl |
◆ 兔抗SQSTM1/A170/p62
SQSTM1/A170/p62是泛素结合蛋白,氧化应激反应依赖性表达。SQSTM1/A170/p62的异常化,会导致骨代谢异常、肥胖、2型糖尿 病等。近来有报道称SQSTM1/A170/p62可与自噬相关因子LC3结合,因此在诱导泛素/蛋白酶体系到自噬系的蛋白质分解方面备受关注。
● 形状:大肠杆菌蛋白质吸收后,2倍稀释的抗血清。防腐剂含0.1%的NaN3。
● 抗原:小鼠SQSTM1(A170)的氨基酸序列254-333重组体(N末端含T7tag,C末端含His tag)
● 特异性:与大小鼠SQSTM1(A170/ZIP)反应;与人SQSTM1(A170/ZIP)反应极弱。
● 实际稀释倍率:Western blotting 1:200;
免疫组织染色 1:1,000
免疫荧光染色 1:1,000
小鼠MEF提取液的Western blotting
| 固定:4%多聚.甲醛 包埋:石蜡包埋 染色:亲和素-生物素- 过氧化物酶素法 一抗:本品 1:1,000 二抗:生物素标记抗兔IgG (数据提供:鸟取大学 中曾一裕) |
| 产品编号 |
产品名称 |
规格 |
容量 |
| 018-22141 |
Anti SQSTM1/A170/p62, Rabbit SQSTM1/A170/p62抗体 |
免疫组化用 |
100μl |
◆ 兔抗人Atg7
Atg7是自噬反应中形成自噬体所必须的基因之一。能与泛素样蛋白质Atg8和Atg12结合的E1样泛素连接酶。
● 形状:抗血清。不含防腐剂和稳定剂
● 抗原:与人Atg7的氨基酸序列556-571相当的合成肽
● 特异性:与人、大鼠、小鼠的Atg7反应
● 实际稀释倍率:Western blotting 1:1,000~5,000
● 推荐稀释缓冲液:1% BSA in 20mmol/l Tris-HCl(pH 7.5), 0.15mol/l NaCl, 0.1% NaN3
※ 背景较高的情况下,请使用加入0.1% Tween20的稀释缓冲液。
| 用SDS-PAGE分离MEF(小鼠胎儿成纤维细胞)的提取液,转至PVDF膜后,以本品为第一抗体,进行Western blotting。 Atg7+, Atg3+ ・・・野生型、Atg7- ・・・Atg7缺失型、 Atg3- ・・・Atg3缺失型 一抗:本品(1:1,000)、室温、反应1小时 二抗:HRP标记山羊抗兔IgG(1:20,000)、室温、反应1小时 (数据提供:顺天堂大学医学部生化学第一讲座 上野隆) |
| 产品编号 |
产品名称 |
规格 |
容量 |
| 013-22831 |
Anti Human Atg7, Rabbit |
免疫组化用 |
50μl |
◆ 相关产品
自噬活性化因子
| 产品编号 |
产品名称 |
规格/制造商 |
容量 |
| 185-01721 |
Resveratrol 白藜芦醇 |
生化学用 |
100mg |
| 181-01723 |
500mg |
自噬抑制剂
| 产品编号 | 产品名称 | 规格/制造商 | 容量 |
| 038-17971 |
Chloroquine diphosphate 磷酸氯喹 |
生化学用 |
5g |
| 036-17972 |
25g |
||
| 054-08021 |
E 64d |
细胞生物学用 |
1mg |
| 050-08023 |
5mg |
||
| 129-04861 |
LY-294002 |
生化学用 |
5g |
| 125-04863 |
10g |
||
| 123-04864 |
25g |
||
| 230-02341 |
(+)-Wortmannin 渥曼青霉素 |
细胞生物学用 |
2mg |
| 236-02343 |
10mg |
参考文献
1). Ishii, T., et al.: Biochem. Biophys. Res. Commun., 226, 456(1996).
2). Ishii, T., et al.: J. Biol. Chem., 275, 16023(2000).
3). Komatsu, M., et al.: Cell, 131, 1149(2007).
4). Nakaso, K., et al.: Brain Res. Mol. Brain Res., 69, 155(1999).
5). Jiang,P.,et al.: Methods,75,13(2015).
| 产品编号 | 产品名称 | 产品规格 | 产品等级 |
| 010-22841 | Anti Rat LC3, Rabbit | 50μl | 免疫组化用 |
| 018-22141 | Anti SQSTM1/A170/p62, Rabbit | 100μl | 免疫组化用 |
| 013-22831 | Anti Human Atg7, Rabbit | 50μl | 免疫组化用 |
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文献和实验自体吞噬是细胞中一种降解和再生细胞组分的基本细胞过程,词语「autophagy」源自希腊词语「auto-」和吞噬(phagein),前者意思是「自我」(self),而后者的意思则是「去吃」,而自噬表示的就是「自己把自己吃掉」(self eating);自体吞噬这种概念是 20 世纪 60 年代提出来的,当时科学家们首次观察到细胞能够通过将自身内容物裹入到膜结构中来破坏内容物,从而形成袋装的囊泡结构,这种囊泡结构能够被运输到再循环小泡结构中进行降解,这种小泡结构称之为溶酶体,研究这种现象的困难
水平的高低。LC3 这一转变过程可被 Western Blot 和荧光显微镜检测到,现已成为监测自噬体形成的推荐方法。在哺乳动物中,LC3 包含 3 种亚型:LC3A、LC3B、LC3C,分布在不同的组织中,因此需要用不同的抗体去鉴定这3种亚型。 和元生物能够提供成熟的细胞自噬相关的技术服务 GFP-LC3 单荧光自噬指示体系: 利用 LC3 在自噬形成过程中发生聚集的现象构建了 GFP-LC3 指示体系,无自噬时,GFP-LC3 融合蛋白弥散在胞浆中;自噬形成时,GFP-LC3 融合
点相当于一个自噬体,可以通过计数来评价自噬活性的高低。 3. 利用 Western Blot 检测 LC3-II/I 比值的变化以评价自噬形成 自噬形成时,胞浆型 LC3(即 LC3-I)会酶解掉一小段多肽,转变为(自噬体)膜型(即 LC3-II),因此,LC3-II/I 比值的大小可估计自噬水平的高低。 LC3 抗体对 LC3-II 有更高的亲和力,会造成假阳性。方法 2 和 3 需结合使用,同时需考虑溶酶体活性的影响。 4. MDC 染色 MDC 染色
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