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一个样本/基因
1、总 RNA 提取及定量；
2、PCR 引物设计及反转录；
3、探针设计（TaqMan 荧光探针法)；
4、荧光定量PCR，进行扩增曲线、溶解曲线、表达量差异分析等实验；
5、数据分析与处理；
6、完整实验报告。
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文献和实验实时定量PCR也被称为实时荧光定量PCR(Quantitative Real-time PCR, qPCR)，是一种在DNA扩增反应中加入荧光基团，以荧光信号积累实时监测每次PCR循环后产物总量，进而对待测样品中的目的序列进行定量分析的方法。 基本原理 在学习实时定量PCR数据处理之前，我们首先需要了解一下它的数学原理，Ct值为什么是我们数据处理过程中的一个关键的因素。这两个图显示的是实时定量PCR的一组结果。上图是原始的线性图谱，下图则是处理过的指数图谱，但是它们两者表示的是同样
【公告】创英生物TaqMan-MGB双标记荧光探针合成 --VIP 客户专属
创英生物TaqMan-MGB双标记荧光探针合成 --VIP 客户专属 TaqMan-MGB 探针与传统的TaqMan-TAMRA探针比较具有以下优势： 1. 提高TM值— 平均15bases可提高18℃，这样可以使探针的长度缩短，尤其对AT含量高的序列设计有很大的帮助，并且提高配对与非配对模板间的TM值差异。 2. 提高信噪比— 由于在探针的3’端的淬灭基团为不发光的荧光基团，并且与报告基因在空间的位置更接近，实验结果更精确，分辨率更高。 3. 更简化实验— MGB探针实验优化
： ²序列选取应在基因的保守区段; ²扩增片段长度根据技术的不同有所分别： sybr green I技术对片段长度没有特殊要求; Taqman探针技术要求片段长度在50bp-150bp; ²避免引物自身或与引物之间形成4个或4个以上连续配对; ²避免引物自身形成环状发卡结构; ²典型的引物18到24个核苷长。引物需要足够长，保证序列独特性，并降低序列存在于非目的序列位点的可能性。但是长度大于24核苷的引物并不意味着更高的特异
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