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- 2025年07月12日
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- 文献和实验
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49
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详见说明书
- 供应商：
上海研生
- 保存条件：
低温冷藏
- 规格：
250T|500T|1000T
【培养指南】
对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察Ⅱ型肺泡上皮细胞|细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
3. 按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。
4. 将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
中文名称：XTT细胞增殖及细胞毒性检测试剂盒哪家好
英文名称：
产品规格：250T|500T|1000T
发货周期：1～3天
XTT细胞增殖及细胞毒性检测试剂盒是应用二甲氧唑黄2,3-bis[2-methoxy
-4-nitro-5-sμlfophenyl]-5-[(phenylamino)carbonyl]-2H-tetrazoliumhydroxide快速高灵敏度检测细胞增殖和细胞毒性的比色检测产品。
XTT在电子耦合试剂存在的情况下能够被线粒体内的一些与辅酶Ⅱ相关的脱氢酶还原成橙黄色的水溶性的Formazan，生成的Formazan量与活细胞数量成正比。细胞增殖越多越快，则颜色越深；细胞毒性越大，则颜色越浅。对于同样的细胞，颜色的深浅和细胞数量呈线性关系。
本XTT试剂为配制好的即用型试剂，直接加入到细胞样品中，不需要预配各种成分，XTT试剂很稳定，对细胞没有毒性，可以长时间孵育细胞。XTT法测定细胞增殖或毒性试验中活细胞数目的灵敏度高，无放射性，检测细胞增殖实验的灵敏度比其它方法如MTT高。
储存条件2-8℃避光保存。长期存放-20℃避光保存。
注意
1．XTT试剂短期存放于2-8℃，长期存放请分装后-20℃避光保存。
2．避免反复冻融。
3．冻存后溶解时注意重新混匀。
有效期一年。
操作步骤(仅供参考)：
1、贴壁细胞的消化
①吸除培养液，用无菌 PBS、Hanks 液或无血清培养液洗涤细胞一次，以去除残余的血清。
②加入少量 源叶生物 Trypsin-EDTA solution，略盖过细胞即可，室温放置 0.5～2min， 不同的细胞消化时间有所不同。
③显微镜下观察，细胞明显收缩，并且肉眼观察培养器皿底部发现细胞的形态发生明显的变
化；或者用枪吹打细胞发现细胞刚好可以被吹打下来，吸除胰酶细胞消化液。加入含血清的 完全细胞培养液，吹打下细胞，即可直接用于后续实验。
④如果发现消化不足，则加入 Trypsin-EDTA solution 重新消化。
⑤如果发现细胞消化时间过长，未及吹打细胞，细胞已经有部分直接从培养器皿底部脱落， 直接用胰酶细胞培养液把细胞全部吹打下来。1000～2000g 离心 1min，沉淀细胞，尽量去除胰酶细胞消化液后，加入含血清的完全培养液重新悬浮细胞，即可用于后续实验。
2、组织的消化不同的组织需要消化的时间相差很大，通常以消化后可以充分打散组织为宜。
【细胞冻存】
XTT细胞增殖及细胞毒性检测试剂盒哪家好待细胞生长状态良好时，可进行293/HEK-293细胞|细胞冻存。贴壁细胞冻存时，弃去培养基后加入少量胰酶，细胞变圆脱落后，加入约1ml含血清的培养基后加入冻存管中，再添加10%DMSO后进行冻存。悬浮细胞冻存时，应将细胞收集，1000RPM条件下离心4分钟，少量保存上清液(防止细胞吸走)，加入部分新鲜培养基，加入到冻存管中，在冻存管中加入10%DMSO后进行冻存。
【复苏的原则】
产品名称快速融化：必须将冻存在-196℃液氮中的细胞快速融化至37℃，使细胞外冻存时的冰晶迅速融化，避免冰晶缓慢融化时进入细胞形成再结晶，对细胞造成损害。复旦细胞库全国各地均可发货，全国统一价格，本公司出售的所有细胞仅供科研使用。
细胞的种类：
第一种：
是冻存产品，由液氮直接拿出，干冰运输给客户。一般不推荐这种，也较少使用这种方式，因为复苏手法对于细胞状态影响较大，一旦细胞状态不好，很难说是细胞自身不行，还是复苏没操作好；另外温度对细胞、基因功能状态影响很大，也不是细胞储存的zui好方式，快递时间也很难控制，多种因素影响产品的质量；干冰运输需要额外添加400元的运费(顺丰)。
第二种：
是我们复苏好细胞，QC通过后，T-25灌满培养基常温运输给客户，排除复苏造成影响，常温运输也对细胞影响也不大，只需加25元运费(顺丰)。
质量保证：我们的细胞株来源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等，购买到货后，由我们实验室扩增、冻存，冻存的产品全部经过QC检测，100%进口来源，100%保证5代以内，活力>95%，无细菌、真菌、支原体污染。的冻存是细胞培养的基本操作，不同的实验室采用的方法略有差异，但是都会遵循慢冻速溶的宗旨。
1-辛D-α-酶/D-酶/D-AAO
3-溴葡萄糖酶/GOX/GOD/Glucose oxidase
盐羟嗪酰辅酶A/酰辅酶A盐/Acetyl CoA
3,4,5-三溴糖化酶/糖化淀酶/淀葡萄糖苷酶/葡萄糖淀酶/γ-淀酶/α-1,4-葡萄糖水解酶/淀脱脂酶/Amyloglucosidase from aspergillus niger
5-溴-3-嗪-2-胆固醇酯酶（猪胰）/胆甾醇酯酶（猪胰）/Cholesterol esterase
1-BOC-6-引唑抗蛋白酶/Antipain dihydrochloride
6-吲哚-1-叔酯链霉蛋白酶/链丝菌蛋白酶/链霉菌蛋白酶/Pronase E
2--4-氧α-甘油脱酶/3-甘油脱酶/α-Glycerophosphate dehydrogenase
2,4-二-5-醇半乳糖酶/Galactose oxidase
[()亚]双(三)二化钌弹性蛋白酶(猪胰)/弹性硬朊酶/胰肽酶E/胰肽酶I/弹性水解酶/胰弹性酶/弹性酶/Elastase
XTT细胞增殖及细胞毒性检测试剂盒哪家好AURANTIOOBTUSIN橙黄决明素67979253
Isosorbide 5mononitrate5单异山梨16051777
4Penten1ol41821090
Zinc acetate dihydrate，二水5970456
4bromo1naphthalenesulfonyl chloride4溴1酰63279367
Oleanic acid齐墩508021
Isopentyl hexanoate异2198610
1HEPTYN3OL1庚炔37383199
(1Bromoethyl)benzene(1溴)585717
Pentaerythritol tetraacrylate季四四4986894
2,5Difluorobenzaldehyde2,5二2646904
TRIMETHYLOXONIUM TETRAFLUOROBORATE三鎓四420371
Allyltributyltin三锡24850337
Sodium chlorodifluoroacetate二1895392
2Naphthonitrile2613467
木香烃内 553219 订购|咨询 规格 HPLC≥98%,20mg/支
大叶茜草素 635654 订购|咨询 规格 HPLC≥98%,20mg/支
桂；桂皮；；桂 104541 订购|咨询 规格 HPLC≥98%,20mg/支
猪去胆 83498 订购|咨询 规格 HPLC≥98%,20mg/支
异甘草素 961295 订购|咨询 规格 HPLC≥98%,20mg/支
槐 26904643 订购|咨询 规格 HPLC≥98%,20mg/支
木犀草苷;木犀草素7O葡萄糖苷;青 1268798 订购|咨询 规格 HPLC≥98%,20mg/支
佛手柑内;香柑内;5补骨脂素 484208 订购|咨询 规格 HPLC≥98%,20mg/支
原花青素B1 订购|咨询 规格 HPLC≥95%,5mg/支;
林可 订购|咨询 规格 100mg;84.9%
2,4,6三环三嗪 对照品 订购|咨询 规格 200mg
喹噁啉 对照品 订购|咨询 规格 100mg;99.6％
()头孢喹肟 对照品 订购|咨询 规格 100mg;82.6％
知母皂苷元;Sarsasapogenin 82597748 订购|咨询 规格 20mg
酰紫草素;Acetylshikonin 24502781 订购|咨询 规格 20mg
细胞培养操作规程：
一．培养基及培养冻存条件准备：
1）准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640：GIBCO，货号21875-091)，90%；优质胎牛血清，10%。
2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。
3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配，液氮储存。
二．细胞处理：
1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于冻存管盖部）摇晃解冻，移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。
2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：
方法一：收集细胞，1000RPM，常温条件下离心5分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察Ⅱ型肺泡上皮细胞|细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
3. 按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。
4. 将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
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本XTT试剂为配制好的即用型试剂，直接加入到细胞样品中，不需要预配各种成分，XTT试剂很稳定，对细胞没有毒性，可以长时间孵育细胞。XTT法测定细胞增殖或毒性试验中活细胞数目的灵敏度高，无放射性，检测细胞增殖实验的灵敏度比其它方法如MTT高。
储存条件2-8℃避光保存。长期存放-20℃避光保存。
注意
1．XTT试剂短期存放于2-8℃，长期存放请分装后-20℃避光保存。
2．避免反复冻融。
3．冻存后溶解时注意重新混匀。
有效期一年。
操作步骤(仅供参考)：
1、贴壁细胞的消化
①吸除培养液，用无菌 PBS、Hanks 液或无血清培养液洗涤细胞一次，以去除残余的血清。
②加入少量 源叶生物 Trypsin-EDTA solution，略盖过细胞即可，室温放置 0.5～2min， 不同的细胞消化时间有所不同。
③显微镜下观察，细胞明显收缩，并且肉眼观察培养器皿底部发现细胞的形态发生明显的变
化；或者用枪吹打细胞发现细胞刚好可以被吹打下来，吸除胰酶细胞消化液。加入含血清的 完全细胞培养液，吹打下细胞，即可直接用于后续实验。
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⑤如果发现细胞消化时间过长，未及吹打细胞，细胞已经有部分直接从培养器皿底部脱落， 直接用胰酶细胞培养液把细胞全部吹打下来。1000～2000g 离心 1min，沉淀细胞，尽量去除胰酶细胞消化液后，加入含血清的完全培养液重新悬浮细胞，即可用于后续实验。
2、组织的消化不同的组织需要消化的时间相差很大，通常以消化后可以充分打散组织为宜。
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3,4,5-三溴糖化酶/糖化淀酶/淀葡萄糖苷酶/葡萄糖淀酶/γ-淀酶/α-1,4-葡萄糖水解酶/淀脱脂酶/Amyloglucosidase from aspergillus niger
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一．培养基及培养冻存条件准备：
1）准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640：GIBCO，货号21875-091)，90%；优质胎牛血清，10%。
2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。
3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配，液氮储存。
二．细胞处理：
1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于冻存管盖部）摇晃解冻，移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。
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文献和实验相关实验
Cell Counting Kit-8简称CCK-8试剂盒，是一种基于WST-8的广泛应用于细胞增殖和细胞毒性的快速高灵敏度检测试剂盒。 Ø WST-8是一种类似于MTT的化合物，在电子耦合试剂存在的情况下，可以被线粒体内的一些脱氢酶还原生成橙黄色的formazan。细胞增殖越多越快，则颜色越深；细胞毒性越大，则颜色越浅。对于同样的细胞，颜色的深浅和细胞数目呈线性关系。 Ø WST-8是MTT的一种升级替代产品，和MTT或其它MTT类似产品如XTT、MTS等相比有明显
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