细胞增殖与示踪检测试剂盒价格

【细胞冻存】
待细胞生长状态良好时，可进行293/HEK-293细胞|细胞冻存。贴壁细胞冻存时，弃去培养基后加入少量胰酶，细胞变圆脱落后，加入约1ml含血清的培养基后加入冻存管中，再添加10%DMSO后进行冻存。悬浮细胞冻存时，应将细胞收集，1000RPM条件下离心4分钟，少量保存上清液(防止细胞吸走)，加入部分新鲜培养基，加入到冻存管中，在冻存管中加入10%DMSO后进行冻存。
中文名称：细胞增殖与示踪检测试剂盒价格
英文名称：CFDA SE Cell Proliferation and Cell Tracking Kit
产品规格：500T
发货周期：1～3天
CFDASECellProliferationandCellTrackingKit是基于CFDA,SE对细胞进行示踪及增殖检测的试剂盒，由CFDA,SE粉末、溶剂及相关细胞染色缓冲液组成，该试剂盒主要工作原理为CFDA,SE具有细胞膜渗透性，本身不具有荧光发光性。当通过被动运输穿透细胞膜进入活细胞后，可被胞浆内的酯酶催化生成羧基荧光素琥珀酰亚胺酯（carboxyfluoresceinsuccinimidylester,CFSE），后者可发强烈的绿色荧光，不能穿透细胞膜，能完好的保留在胞内。CFSE还可自发性并不可逆地与细胞内的氨基结合从而偶联到细胞蛋白质上，同时过量且未被偶联的CFDA,SE通过被动扩散回到细胞外培养基内，被后续清洗步骤所清除。经CFDA,SE标记的非分裂细胞的荧光非常稳定，稳定标记的时间可达数月，因此非常适用于细胞群落分析。
CFDA,SE标记细胞的荧光非常均一，优于以前使用的其他细胞示踪荧光探针如PKH26，并且分裂后的子代细胞的荧光分配也更均一。在细胞分裂增殖过程中，CFSE标记荧光可平均分配至两个子代细胞中，荧光强度变为亲代细胞的一半，通过流式细胞仪（FL1通道）根据荧光强度的不同，可检测出未分裂细胞，分裂一次（1/2的荧光强度），二次（1/4的荧光强度），三次（1/8的荧光强度），以及更多分裂次数的细胞。CFSA，SE可检测分裂次数多达八次甚至更多。经CFDA,SE标记的细胞可用于体外和体内增殖研究，且具有不会使邻近细胞染色的功能。CFDA,SE最常用于淋巴细胞的增殖检测，也可用于成纤维细胞，自然杀伤细胞，造血祖细胞等其他细胞的增殖检测。
CFDA,SE标记细胞呈绿色荧光，Ex=494nm，Em=521nm，除了流式细胞仪检测细胞增殖外，还可用荧光酶标板定量活细胞数目，或者用荧光显微镜进行均一染色的细胞示踪观察。
本品为CFDA，SE细胞增殖与示踪检测试剂盒，包含配制CFDA，SE储存液所需的溶剂和细胞标记用的染色缓冲液，简化了实验前期准备工作。另，CFDA,SE标记细胞一般15min即可完成，对于不同细胞，需要自行摸索最佳标记时间。按照每个样本的标记体积为2ml计算。
储存条件-20℃，有效期1年
【培养指南】
对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察Ⅱ型肺泡上皮细胞|细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
3. 按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。
4. 将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
【复苏的原则】
产品名称快速融化：必须将冻存在-196℃液氮中的细胞快速融化至37℃，使细胞外冻存时的冰晶迅速融化，避免冰晶缓慢融化时进入细胞形成再结晶，对细胞造成损害。复旦细胞库全国各地均可发货，全国统一价格，本公司出售的所有细胞仅供科研使用。
细胞的种类：
第一种：
是冻存产品，由液氮直接拿出，干冰运输给客户。一般不推荐这种，也较少使用这种方式，因为复苏手法对于细胞状态影响较大，一旦细胞状态不好，很难说是细胞自身不行，还是复苏没操作好；另外温度对细胞、基因功能状态影响很大，也不是细胞储存的zui好方式，快递时间也很难控制，多种因素影响产品的质量；干冰运输需要额外添加400元的运费(顺丰)。
第二种：
是我们复苏好细胞，QC通过后，T-25灌满培养基常温运输给客户，排除复苏造成影响，常温运输也对细胞影响也不大，只需加25元运费(顺丰)。
质量保证：我们的细胞株来源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等，购买到货后，由我们实验室扩增、冻存，冻存的产品全部经过QC检测，100%进口来源，100%保证5代以内，活力>95%，无细菌、真菌、支原体污染。的冻存是细胞培养的基本操作，不同的实验室采用的方法略有差异，但是都会遵循慢冻速溶的宗旨。
细胞培养操作规程：
一．培养基及培养冻存条件准备：
1）准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640：GIBCO，货号21875-091)，90%；优质胎牛血清，10%。
2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。
3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配，液氮储存。
二．细胞处理：
1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于冻存管盖部）摇晃解冻，移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。
2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：
方法一：收集细胞，1000RPM，常温条件下离心5分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
 3-溴-4-基啶烯基异基/异基烯基/烯基异/1-(烯氧基)-2-基/异氧基烯/异基烯/Isobutyl vinyl ether
 3-溴异烟酸化钨/六化钨/Tungsten hexachloride
 四基四基2-嘧啶/2-尿嘧啶/嘧啶/2,3-二-2-代-4(1H)-嘧啶/2-代尿嘧啶/2-Thiouracil
 5-氧代-己酸酯白藜芦醇/芪三/3,4,5-三羟基芪/(E)-5-2-(4-羟基)-烯基-1,3-二/Resveratrol
 酰钇水合物1，1-二基-2-苦基肼/1,1-二-2-苦基肼/1,1-二基-2-苦味基肼自由基/2,2-基-1-苦基肼基/DPPH
 4-酰基基酯五/五/土粒散/五原/PCNB
 基阿维菌素酸盐特醇铝/叔醇铝/叔氧基铝/叔基铝/第三基铝/三叔氧基铝/Aluminum tert-butoxide
 锌四水合物三正辛/三辛/N,N-二辛基-1-辛/TOA
 4,5-二基-1-(2-羟基)唑盐酸钙/酸钙盐/初油酸钙/Calcium propionate
 4--2-酸对羟酸酯/尼泊金A/尼泊金酯/羟酯/4-羟酸酯/Ethylparaben
细胞增殖与示踪检测试剂盒价格Seamless Cloning and Assembly Kit（无缝克隆试剂盒）  规格HPLC≥98%;20mgDehydrocorydaline
SuperTOPO-Amp TA克隆试剂盒（SuperTOPO三剑客）  规格HPLC≥98%;20mgDehydroandrographolide
SuperTOPO-Amp TA克隆试剂盒（SuperTOPO三剑客）  规格HPLC≥98%;10mgAnhydroicaritin
SuperTOPO-Amp平末端克隆试剂盒（SuperTOPO三剑客）  规格HPLC≥98%;20mgDeoxyaconitine
SuperTOPO-Amp平末端克隆试剂盒（SuperTOPO三剑客）  规格HPLC≥98%;20mg1-Deoxynojirimycin
SuperTOPO-Amp通用克隆试剂盒（SuperTOPO三剑客）  规格HPLC≥98%;20mgVaccarin
SuperTOPO-Amp通用克隆试剂盒（SuperTOPO三剑客）  规格HPLC≥98%;20mgPseudoprotogracillin
SuperTOPO-Kan TA克隆试剂盒（SuperTOPO三剑客）  规格HPLC≥98%;20mgVindoline
SuperTOPO-Kan TA克隆试剂盒（SuperTOPO三剑客）  规格HPLC≥98%;10mgAconitine
SuperTOPO-Kan平末端克隆试剂盒（SuperTOPO三剑客）  规格HPLC≥98%;20mgLinderane
SuperTOPO-Kan平末端克隆试剂盒（SuperTOPO三剑客）  规格HPLC≥98%;20mgRutecarpine
SuperTOPO-Kan通用克隆试剂盒（SuperTOPO三剑客）  规格HPLC≥98%;10mgCantleyoside
SuperTOPO-Kan通用克隆试剂盒（SuperTOPO三剑客）  规格HPLC≥98%;20mgEvodiamine
即用型蓝白T载体A型（T7-SP6，有MCS）  规格HPLC≥98%;10mgschisandrin C
即用型蓝白T载体B型（T7-T3，有MCS）  规格HPLC≥98%;10mgSchisandrin
操作步骤(仅供参考)：
1、细胞增殖与示踪检测试剂盒价格贴壁细胞的消化
①吸除培养液，用无菌 PBS、Hanks 液或无血清培养液洗涤细胞一次，以去除残余的血清。
②加入少量 源叶生物 Trypsin-EDTA solution，略盖过细胞即可，室温放置 0.5～2min， 不同的细胞消化时间有所不同。
③显微镜下观察，细胞明显收缩，并且肉眼观察培养器皿底部发现细胞的形态发生明显的变
化；或者用枪吹打细胞发现细胞刚好可以被吹打下来，吸除胰酶细胞消化液。加入含血清的  完全细胞培养液，吹打下细胞，即可直接用于后续实验。
④如果发现消化不足，则加入 Trypsin-EDTA solution 重新消化。
⑤如果发现细胞消化时间过长，未及吹打细胞，细胞已经有部分直接从培养器皿底部脱落， 直接用胰酶细胞培养液把细胞全部吹打下来。1000～2000g 离心 1min，沉淀细胞，尽量去除胰酶细胞消化液后，加入含血清的完全培养液重新悬浮细胞，即可用于后续实验。
2、组织的消化不同的组织需要消化的时间相差很大，通常以消化后可以充分打散组织为宜。