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- 文献和实验
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47
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详见说明书
- 供应商:
上海研生
- 保存条件:
低温冷藏
- 规格:
100ug|1mg
【细胞冻存】
待细胞生长状态良好时,可进行293/HEK-293细胞|细胞冻存。贴壁细胞冻存时,弃去培养基后加入少量胰酶,细胞变圆脱落后,加入约1ml含血清的培养基后加入冻存管中,再添加10%DMSO后进行冻存。悬浮细胞冻存时,应将细胞收集,1000RPM条件下离心4分钟,少量保存上清液(防止细胞吸走),加入部分新鲜培养基,加入到冻存管中,在冻存管中加入10%DMSO后进行冻存。
中文名称:钙荧光探针(Fluo 3-AM)规格
英文名称:
产品规格:100ug|1mg
发货周期:1~3天
Fluo-3,AMester是一种可以穿透细胞膜的荧光染料。Fluo-3,AMester进入细胞后可以被细胞内源性酯酶剪切形成Fluo-3,从而被滞留在细胞内。Fluo-3可以和钙离子结合,结合钙离子后可以产生较强的荧光,最大激发波长为506nm,最大发射波长为526nm。Fluo-3,AMester的一个重要作用是其在高通量药物筛选中的应用。
别名钙荧光探针;钙离子探针
CAS号121714-22-5
分子式C51H50Cl2N2O23
分子量1129.85
纯度≥90%(HPLC)
性状红色粉末
储存条件-20℃干燥避光,有效期12个月
【培养指南】
对于贴壁细胞,传代可参考以下方法:
1. 弃去培养上清,用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中,置于37℃培养箱中消化1-2分钟,然后在显微镜下观察Ⅱ型肺泡上皮细胞|细胞消化情况,若细胞大部分变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
3. 按6-8ml/瓶补加培养基,轻轻打匀后吸出,在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀。
4. 将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
【复苏的原则】
产品名称快速融化:必须将冻存在-196℃液氮中的细胞快速融化至37℃,使细胞外冻存时的冰晶迅速融化,避免冰晶缓慢融化时进入细胞形成再结晶,对细胞造成损害。复旦细胞库全国各地均可发货,全国统一价格,本公司出售的所有细胞仅供科研使用。
细胞的种类:
第一种:
是冻存产品,由液氮直接拿出,干冰运输给客户。一般不推荐这种,也较少使用这种方式,因为复苏手法对于细胞状态影响较大,一旦细胞状态不好,很难说是细胞自身不行,还是复苏没操作好;另外温度对细胞、基因功能状态影响很大,也不是细胞储存的zui好方式,快递时间也很难控制,多种因素影响产品的质量;干冰运输需要额外添加400元的运费(顺丰)。
第二种:
是我们复苏好细胞,QC通过后,T-25灌满培养基常温运输给客户,排除复苏造成影响,常温运输也对细胞影响也不大,只需加25元运费(顺丰)。
质量保证:我们的细胞株来源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等,购买到货后,由我们实验室扩增、冻存,冻存的产品全部经过QC检测,100%进口来源,100%保证5代以内,活力>95%,无细菌、真菌、支原体污染。的冻存是细胞培养的基本操作,不同的实验室采用的方法略有差异,但是都会遵循慢冻速溶的宗旨。
细胞培养操作规程:
一.培养基及培养冻存条件准备:
1)准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640:GIBCO,货号21875-091),90%;优质胎牛血清,10%。
2)培养条件: 气相:空气,95%;二氧化碳,5%。 温度:37℃,培养箱湿度为70%-80%。
3)冻存液:90%血清,10%DMSO,现用现配,液氮储存。
二.细胞处理:
1)复苏细胞:将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于冻存管盖部)摇晃解冻,移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。
2)细胞传代:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。
对于悬浮细胞,传代可参考以下方法:
方法一:收集细胞,1000RPM,常温条件下离心5分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀,将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
2-(2--5-)-5-(6-啶-3-)噻吩SDS-PAGE蛋白质高分子量/高分子量标准蛋白/高分子MARK/High range protein MW marker
3-(二)-2-异烯酯SDS-PAGE蛋白质中分子量/中分子量标准蛋白/中分子MARK/Middle range protein MW marker
B-(6,9-二-9H--3-)SDS-PAGE蛋白质次高分子标准/次高分子MARK/SDS-聚烯酰凝胶电泳次高分子量标准蛋白质/SDS-PAGE Molecular hight weight markers for proteins
2--4-15-150kDa精确分子量MARK/Precise Protein Molecular weight Mark
1--1H-唑-4-羧19-119kDa预先染色分子量MARK/Prestained Protein Molecular weight Mark
(1S,4S)-2-Boc-2,5-二双环[2.2.1]庚刀豆素A/Concanamycin A
Boc-D-精盐盐刀豆球蛋白A/刀豆凝集素A/伴刀豆球蛋白A/伴刀豆凝集素/刀豆凝集素A/刀豆球朊A/ConA
3,5-二-唑-4-羧转铁蛋白/铁传递蛋白/Transferrin human/TF/TRF
并[b]噻吩并-3-马脾铁蛋白/铁蛋白(马脾)/ Ferritin from horse spleen/HSF
伊班人血纤维蛋白原/Fibrinogen from human plasma
钙荧光探针(Fluo 3-AM)规格盐莫西沙星标准品 Moxifloxacin Hydrochloride CAS186826868
一水合标准品 Morphine Monohydrate CII (AS) CAS6009810
盐莫雷西嗪标准品 Moricizine Hydrochloride CAS29560585
莫仑太尔标准品 Morantel Tartrate CAS26155317
孟鲁司特标准品 Montelukast Sodium CAS151767021
马来单十八酯标准品 Monostearyl Maleate CAS2424626
谷一标准品 Monosodium Glutamate (AS) CAS142472
单甘酯标准品 Monoglycerides CAS68990534
标准品 Monoethanolamine CAS141435
莫诺宗标准品 Monobenzone CAS103162
莫能盐标准品 Monensin Sodium CAS22373780
糖莫米松标准品 Mometasone Furoate CAS83919237
盐吗茚标准品 Molindone Hydrochloride CAS15622658
莫达相关物质E标准品 Modafinil Related Compound E CAS1726029
莫达相关物质D标准品 Modafinil Related Compound D CAS574425
钇 进口、国产 Yttriumoxide 含量BR,97%
铵 进口、国产 Ammoniumformate 含量CP,93.5%
进口、国产 Potassiumformate 含量BR,95%
异βD代半糖糖苷 进口、国产 IPTG 含量BR,98%
异铝 进口、国产 Aluminumisopropoxide 含量BR,89%
异福尔 进口、国产 Isophorone 含量CP,99%
异柠檬脱酶 进口、国产 Isocitratedehydrogenase 含量BR,30u/ul
异 进口、国产 Sodiumcyanate 含量CP
异三十 进口、国产 Squalane 含量97%
异维生素C 进口、国产 DSodiumisoascorbiate 含量98.5%
操作步骤(仅供参考):
1、钙荧光探针(Fluo 3-AM)规格贴壁细胞的消化
①吸除培养液,用无菌 PBS、Hanks 液或无血清培养液洗涤细胞一次,以去除残余的血清。
②加入少量 源叶生物 Trypsin-EDTA solution,略盖过细胞即可,室温放置 0.5~2min, 不同的细胞消化时间有所不同。
③显微镜下观察,细胞明显收缩,并且肉眼观察培养器皿底部发现细胞的形态发生明显的变
化;或者用枪吹打细胞发现细胞刚好可以被吹打下来,吸除胰酶细胞消化液。加入含血清的 完全细胞培养液,吹打下细胞,即可直接用于后续实验。
④如果发现消化不足,则加入 Trypsin-EDTA solution 重新消化。
⑤如果发现细胞消化时间过长,未及吹打细胞,细胞已经有部分直接从培养器皿底部脱落, 直接用胰酶细胞培养液把细胞全部吹打下来。1000~2000g 离心 1min,沉淀细胞,尽量去除胰酶细胞消化液后,加入含血清的完全培养液重新悬浮细胞,即可用于后续实验。
2、组织的消化不同的组织需要消化的时间相差很大,通常以消化后可以充分打散组织为宜。
待细胞生长状态良好时,可进行293/HEK-293细胞|细胞冻存。贴壁细胞冻存时,弃去培养基后加入少量胰酶,细胞变圆脱落后,加入约1ml含血清的培养基后加入冻存管中,再添加10%DMSO后进行冻存。悬浮细胞冻存时,应将细胞收集,1000RPM条件下离心4分钟,少量保存上清液(防止细胞吸走),加入部分新鲜培养基,加入到冻存管中,在冻存管中加入10%DMSO后进行冻存。
中文名称:钙荧光探针(Fluo 3-AM)规格
英文名称:
产品规格:100ug|1mg
发货周期:1~3天
Fluo-3,AMester是一种可以穿透细胞膜的荧光染料。Fluo-3,AMester进入细胞后可以被细胞内源性酯酶剪切形成Fluo-3,从而被滞留在细胞内。Fluo-3可以和钙离子结合,结合钙离子后可以产生较强的荧光,最大激发波长为506nm,最大发射波长为526nm。Fluo-3,AMester的一个重要作用是其在高通量药物筛选中的应用。
别名钙荧光探针;钙离子探针
CAS号121714-22-5
分子式C51H50Cl2N2O23
分子量1129.85
纯度≥90%(HPLC)
性状红色粉末
储存条件-20℃干燥避光,有效期12个月
【培养指南】
对于贴壁细胞,传代可参考以下方法:
1. 弃去培养上清,用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中,置于37℃培养箱中消化1-2分钟,然后在显微镜下观察Ⅱ型肺泡上皮细胞|细胞消化情况,若细胞大部分变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
3. 按6-8ml/瓶补加培养基,轻轻打匀后吸出,在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀。
4. 将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
【复苏的原则】
产品名称快速融化:必须将冻存在-196℃液氮中的细胞快速融化至37℃,使细胞外冻存时的冰晶迅速融化,避免冰晶缓慢融化时进入细胞形成再结晶,对细胞造成损害。复旦细胞库全国各地均可发货,全国统一价格,本公司出售的所有细胞仅供科研使用。
细胞的种类:
第一种:
是冻存产品,由液氮直接拿出,干冰运输给客户。一般不推荐这种,也较少使用这种方式,因为复苏手法对于细胞状态影响较大,一旦细胞状态不好,很难说是细胞自身不行,还是复苏没操作好;另外温度对细胞、基因功能状态影响很大,也不是细胞储存的zui好方式,快递时间也很难控制,多种因素影响产品的质量;干冰运输需要额外添加400元的运费(顺丰)。
第二种:
是我们复苏好细胞,QC通过后,T-25灌满培养基常温运输给客户,排除复苏造成影响,常温运输也对细胞影响也不大,只需加25元运费(顺丰)。
质量保证:我们的细胞株来源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等,购买到货后,由我们实验室扩增、冻存,冻存的产品全部经过QC检测,100%进口来源,100%保证5代以内,活力>95%,无细菌、真菌、支原体污染。的冻存是细胞培养的基本操作,不同的实验室采用的方法略有差异,但是都会遵循慢冻速溶的宗旨。
细胞培养操作规程:
一.培养基及培养冻存条件准备:
1)准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640:GIBCO,货号21875-091),90%;优质胎牛血清,10%。
2)培养条件: 气相:空气,95%;二氧化碳,5%。 温度:37℃,培养箱湿度为70%-80%。
3)冻存液:90%血清,10%DMSO,现用现配,液氮储存。
二.细胞处理:
1)复苏细胞:将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于冻存管盖部)摇晃解冻,移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。
2)细胞传代:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。
对于悬浮细胞,传代可参考以下方法:
方法一:收集细胞,1000RPM,常温条件下离心5分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀,将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
2-(2--5-)-5-(6-啶-3-)噻吩SDS-PAGE蛋白质高分子量/高分子量标准蛋白/高分子MARK/High range protein MW marker
3-(二)-2-异烯酯SDS-PAGE蛋白质中分子量/中分子量标准蛋白/中分子MARK/Middle range protein MW marker
B-(6,9-二-9H--3-)SDS-PAGE蛋白质次高分子标准/次高分子MARK/SDS-聚烯酰凝胶电泳次高分子量标准蛋白质/SDS-PAGE Molecular hight weight markers for proteins
2--4-15-150kDa精确分子量MARK/Precise Protein Molecular weight Mark
1--1H-唑-4-羧19-119kDa预先染色分子量MARK/Prestained Protein Molecular weight Mark
(1S,4S)-2-Boc-2,5-二双环[2.2.1]庚刀豆素A/Concanamycin A
Boc-D-精盐盐刀豆球蛋白A/刀豆凝集素A/伴刀豆球蛋白A/伴刀豆凝集素/刀豆凝集素A/刀豆球朊A/ConA
3,5-二-唑-4-羧转铁蛋白/铁传递蛋白/Transferrin human/TF/TRF
并[b]噻吩并-3-马脾铁蛋白/铁蛋白(马脾)/ Ferritin from horse spleen/HSF
伊班人血纤维蛋白原/Fibrinogen from human plasma
钙荧光探针(Fluo 3-AM)规格盐莫西沙星标准品 Moxifloxacin Hydrochloride CAS186826868
一水合标准品 Morphine Monohydrate CII (AS) CAS6009810
盐莫雷西嗪标准品 Moricizine Hydrochloride CAS29560585
莫仑太尔标准品 Morantel Tartrate CAS26155317
孟鲁司特标准品 Montelukast Sodium CAS151767021
马来单十八酯标准品 Monostearyl Maleate CAS2424626
谷一标准品 Monosodium Glutamate (AS) CAS142472
单甘酯标准品 Monoglycerides CAS68990534
标准品 Monoethanolamine CAS141435
莫诺宗标准品 Monobenzone CAS103162
莫能盐标准品 Monensin Sodium CAS22373780
糖莫米松标准品 Mometasone Furoate CAS83919237
盐吗茚标准品 Molindone Hydrochloride CAS15622658
莫达相关物质E标准品 Modafinil Related Compound E CAS1726029
莫达相关物质D标准品 Modafinil Related Compound D CAS574425
钇 进口、国产 Yttriumoxide 含量BR,97%
铵 进口、国产 Ammoniumformate 含量CP,93.5%
进口、国产 Potassiumformate 含量BR,95%
异βD代半糖糖苷 进口、国产 IPTG 含量BR,98%
异铝 进口、国产 Aluminumisopropoxide 含量BR,89%
异福尔 进口、国产 Isophorone 含量CP,99%
异柠檬脱酶 进口、国产 Isocitratedehydrogenase 含量BR,30u/ul
异 进口、国产 Sodiumcyanate 含量CP
异三十 进口、国产 Squalane 含量97%
异维生素C 进口、国产 DSodiumisoascorbiate 含量98.5%
操作步骤(仅供参考):
1、钙荧光探针(Fluo 3-AM)规格贴壁细胞的消化
①吸除培养液,用无菌 PBS、Hanks 液或无血清培养液洗涤细胞一次,以去除残余的血清。
②加入少量 源叶生物 Trypsin-EDTA solution,略盖过细胞即可,室温放置 0.5~2min, 不同的细胞消化时间有所不同。
③显微镜下观察,细胞明显收缩,并且肉眼观察培养器皿底部发现细胞的形态发生明显的变
化;或者用枪吹打细胞发现细胞刚好可以被吹打下来,吸除胰酶细胞消化液。加入含血清的 完全细胞培养液,吹打下细胞,即可直接用于后续实验。
④如果发现消化不足,则加入 Trypsin-EDTA solution 重新消化。
⑤如果发现细胞消化时间过长,未及吹打细胞,细胞已经有部分直接从培养器皿底部脱落, 直接用胰酶细胞培养液把细胞全部吹打下来。1000~2000g 离心 1min,沉淀细胞,尽量去除胰酶细胞消化液后,加入含血清的完全培养液重新悬浮细胞,即可用于后续实验。
2、组织的消化不同的组织需要消化的时间相差很大,通常以消化后可以充分打散组织为宜。
风险提示:丁香通仅作为第三方平台,为商家信息发布提供平台空间。用户咨询产品时请注意保护个人信息及财产安全,合理判断,谨慎选购商品,商家和用户对交易行为负责。对于医疗器械类产品,请先查证核实企业经营资质和医疗器械产品注册证情况。
文献和实验相关实验
rongshenghao 加入激活剂或抑制剂后打算用Fura-2或者Fluo-3测量细胞内钙离子浓度 问: 1.Fura-2和Fluo-3区别? 2.测量的是游离钙还是总钙呀? 3.还有什么需要注意的? 谢了! 2010tiger Fura-2采用双波长检测,Fluo-3是单波长检测,Fura-2的激发波长是340nm和380nm,发射波长为510nm。Fluo-3的激发波长是506nm
求助者:wjg200022 最近我在测细胞内的钙浓度,用的是fluo-3 探针,但选多大的激发,发射波长很为难,有文献用的是488/515nm,有的用的506/526nm,我打算用流式细胞仪测,有做过这方面的给点指点,谢谢。 此外我找到一段原话:“Fluo-3 AM是一种可以穿透细胞膜的荧光染料。Fluo-3 AM的荧光非常弱,其荧光不会随钙离子浓度升高而增强。Fluo-3 AM进入细胞后可以被细胞内的酯酶剪切形成Fluo-3,从而被滞留在细胞
扫描共聚焦显微镜的基本原理及主要功能。 2. 如何选择共聚焦激光扫描显微镜的荧光探针? 3. 设计一个用Fluo-3测定细胞内Ca2+的实验程序。
技术资料暂无技术资料 索取技术资料
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