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- YSRIBIO-C1216
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- 2025年07月16日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
40
- 保质期：
详见说明书
- 供应商：
上海研生
- 保存条件：
低温冷藏
- 规格：
100μl
1．CCCP(50mM) 细胞凋亡诱导剂规格用盖片镊将盖玻片自75%乙醇中取出，用无菌丝绸布擦拭干净，不要用纱布；
2．将盖玻片轻轻放入6孔培养板（每孔一片）或培养皿中（每个平皿可放置2-3片）；
3．在距离紫外灯直射范围内20-30 厘米处照射2-3小时；
4．将经过计数的细胞悬浮液移入培养板中，使盖玻片完全浸在培养液中；
5．将培养板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，当贴壁细胞生长至覆盖培养板底部2/3面积时，将培养板取出，用盖片镊轻轻取出盖玻片，用蒸馏水漂洗后即可进行快速固定以及免疫细胞化学检测。
中文名称：CCCP(50mM) 细胞凋亡诱导剂规格英文名称：
产品规格：100μl
发货周期：1～3天
本品是溶于DMSO的CCCP溶液，浓度为50mM，体积为100μl（相当于1mg的总量），常用作一种阳性对照来诱导细胞凋亡，并配合线粒体膜电位检测探针JC-1（货号SY0488）或者JC-10（货号SY0490）来进行相关研究。
CCCP，即Carbonylcyanide3-chlorophenylhydrazone，一种质子载体（H+ionophore），是一种强效的线粒体氧化磷酸化解偶联剂，促使线粒体内膜对H+产生通透性，导致线粒体内膜两侧的膜电位丧失，诱导凋亡发生。也可作用于叶绿体膜，抑制光合作用；CCCP还可抑制内质网-高尔基体（ER-Golgi）之间的蛋白转运，高亲和力结合细胞色素C氧化酶。
CCCP还具有其他功能
1）在牛蛙交感神经方面的实验表明，CCCP可增强促黄体生成素释放激素的释放；
2）作为一种质子导体在葡萄糖存在的情况下影响E.coli细胞活性；
3）对细胞内钙水平的各种调节效应；
4）抑制脂肝酶的分泌；
5）部分抑制pH梯度活化的Cl-摄取以及刷状缘膜的Cl-/Cl-交换等。
储存条件-20℃，有效期12个月
实验报告：
一、分离与培养：
1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，最后将组织剪成1mm3左右大小；
2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 胰酶和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；
3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织完全被消化；
4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；
5、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；
二、免疫荧光鉴定：
1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%在室温条件下固定细胞15min；
2、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
3、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；
4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；
5、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；
6、用PBS冲洗3次，每次10min，最后在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。
注意事项：
尽管经测试Annexin V-FITC反复冻融5次对于其检测效果无显著影响，但为取得良好的使用效果，3-6个月内推荐4℃保存，并适当注意避免反复冻融。
如果有细菌或真菌污染，会严重影响检测效果。
染色后宜尽快检测，时间过长可能会导致凋亡或坏死细胞的数量增加。
如果细胞收集过程中使用了胰酶，需注意设法去除残留的胰酶。残留的胰酶会消化并降解Annexin V-FITC，导致染色失败。
荧光物质均易发生淬灭，在进行荧光观察时，尽量缩短观察时间，同时在操作和存放过程中也尽量注意避光保存。
用于流式细胞仪检测时，如果发现Annexin V-FITC单独染色时出现了过多的PI假阳性细胞，并且通过调整相关设置和参数也无法改善，可以用PBS将Annexin V-FITC稀释3-10倍后再进行检测，这样通常可以有效减少假阳性的坏死细胞。
需自备PBS。
本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
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CCCP(50mM) 细胞凋亡诱导剂规格喔啉相关物质A标准品 规格25mg
琥珀舒马曲坦相关物质A标准品 规格15mg
琥珀舒马曲坦相关物质C标准品 规格50mg
琥珀舒马曲坦相关杂质标准品 规格25mg
他克莫司相关物质A标准品 规格15mg
他克莫司系统适用性混合物对照品标准品 规格10mg
西力士标准品 规格200mg
他布标准品 规格250mg Talbutal CIII DISCONTINUED
特拉嗪相关物质A标准品 规格50mg
特拉嗪相关物质B标准品 规格50mg
舒血管素 进口、国产 Kallikreinfromporcinepancreas 含量BR，20u/mg
熟石灰 进口、国产 CalciumHydroxide 含量96%
黍胶质 进口、国产 Zein 含量BR，100300u/mg
鼠颌下腺表皮生长子 进口、国产 EGF 含量BR，99.5%
薯蓣皂 进口、国产 Dioscin 含量BR，98%
曙红亚基蓝I 进口、国产 Wright′sstain 含量BR
双(D葡糖)铜 进口、国产 Coppergluconate 含量BR，玉米来源
双 进口、国产 Diphenylmethane 含量97%
双啉 进口、国产 Bispyrazolone 含量99%
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文献和实验和JC-1染色工作液，详见产品使用说明。稀释好的1× JC- 1 Assay Buffer保存在4°C。 2．阳性对照设置，详见产品使用说明；细胞按照实验方案进行凋亡诱导。 3．诱导完成后的细胞，300 g离心5 min，弃上清，收集细胞，PBS轻轻重悬细胞并计数。 注：良好的细胞状态是实验的关键。贴壁生长的细胞用于凋亡检测时，可能会因为胰酶消化、吹打等处理导致细胞的坏死或凋亡，对实验结果可能存在不可控的影响，请谨慎处理。 4．取1-5 × 105重悬的细胞，300 g离心5 min，弃上清
PMSF （强大的蛋白酶抑制剂），1 mM EDTA（变性剂和稳定剂），5 µg/ml Aprotinin（蛋白酶抑制剂），5 µg/ml Leupeptin（蛋白酶抑制剂），1% Triton x-100（破坏细胞），1% Sodium deoxycholate（中度变性剂和蛋白溶解剂），0.1% SDS（强变性剂和蛋白溶解剂）。14、裂解buffer：50mM HEPES pH7.0，1mM 甘油，1mM DTT（还原剂），7M 尿素，2M硫脲(可以提高膜蛋白的融解），1mM EDTA(金属鏊合剂
mM Tris-HCl pH 7.4（缓冲体系），150 mM NaCl（等渗体系），1 mM PMSF （强大的蛋白酶抑制剂），1 mM EDTA（变性剂和稳定剂），5 μg/ml Aprotinin（蛋白酶抑制剂），5 μg/ml Leupeptin（蛋白酶抑制剂），1% Triton x-100（破坏细胞），1% Sodium deoxycholate（中度变性剂和蛋白溶解剂），0.1% SDS（强变性剂和蛋白溶解剂）。14. 裂解buffer：50mM HEPES pH7.0，1mM
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