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- 2025年07月15日
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34
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详见说明书
- 供应商：
上海研生
- 保存条件：
低温冷藏
- 规格：
20T
【细胞冻存】
待细胞生长状态良好时，可进行293/HEK-293细胞|细胞冻存。贴壁细胞冻存时，弃去培养基后加入少量胰酶，细胞变圆脱落后，加入约1ml含血清的培养基后加入冻存管中，再添加10%DMSO后进行冻存。悬浮细胞冻存时，应将细胞收集，1000RPM条件下离心4分钟，少量保存上清液(防止细胞吸走)，加入部分新鲜培养基，加入到冻存管中，在冻存管中加入10%DMSO后进行冻存。
中文名称：细胞凋亡检测试剂盒Ⅱ(AP)哪家好
英文名称：
产品规格：20T
发货周期：1～3天
保存条件-20℃冰冻保存。
保存期一年
工作原理
在机体内部随时都在发生着细胞的死亡。传统上用显微镜来观察细胞的死亡，其特征为核染色质的浓缩及碎片的形成。但是这种现象出现的很晚，时间也很短暂。凋亡的特征是内源性核酸内切酶被激活，细胞自身的染色质或DNA被切割，出现单链或双链缺口，并产生与DNA断点数目相同的3’-OH末端。末端脱氧核糖核酸转移酶(TerminaldeoxynucleotidylTransferase)可以将标记的dUTP(DIG-dUTP)标记至3’-OH末端，DIG-dUTP结合在DNA断点部位，可以通过生物素化抗抗体(Anti-DIG-Biotin)和SABC-AP反应后，加入显色底物BCIP/NBT予以显示。凋亡的细胞核呈紫蓝色，从而可以在显微镜下观察到着色的凋亡细胞。
试剂盒内容
1.标记缓冲液(LabelingBuffer)1ml
2.末端脱氧核糖核酸转移酶(TdT,×20)20μl
3.DIG-dUTP(×20)20μl
4.封闭液(BlockingReagent)4ml
5.生物素化抗抗体(×100)20μl
6..SABC-AP(×100)20μl
7.ProteinaseK(×200)50μl
8.BCIP/NBT显色剂(×20)0.2ml
9.抗体稀释液4ml
【培养指南】
对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察Ⅱ型肺泡上皮细胞|细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
3. 按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。
4. 将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
【复苏的原则】
产品名称快速融化：必须将冻存在-196℃液氮中的细胞快速融化至37℃，使细胞外冻存时的冰晶迅速融化，避免冰晶缓慢融化时进入细胞形成再结晶，对细胞造成损害。复旦细胞库全国各地均可发货，全国统一价格，本公司出售的所有细胞仅供科研使用。
细胞的种类：
第一种：
是冻存产品，由液氮直接拿出，干冰运输给客户。一般不推荐这种，也较少使用这种方式，因为复苏手法对于细胞状态影响较大，一旦细胞状态不好，很难说是细胞自身不行，还是复苏没操作好；另外温度对细胞、基因功能状态影响很大，也不是细胞储存的zui好方式，快递时间也很难控制，多种因素影响产品的质量；干冰运输需要额外添加400元的运费(顺丰)。
第二种：
是我们复苏好细胞，QC通过后，T-25灌满培养基常温运输给客户，排除复苏造成影响，常温运输也对细胞影响也不大，只需加25元运费(顺丰)。
质量保证：我们的细胞株来源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等，购买到货后，由我们实验室扩增、冻存，冻存的产品全部经过QC检测，100%进口来源，100%保证5代以内，活力>95%，无细菌、真菌、支原体污染。的冻存是细胞培养的基本操作，不同的实验室采用的方法略有差异，但是都会遵循慢冻速溶的宗旨。
细胞培养操作规程：
一．培养基及培养冻存条件准备：
1）准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640：GIBCO，货号21875-091)，90%；优质胎牛血清，10%。
2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。
3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配，液氮储存。
二．细胞处理：
1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于冻存管盖部）摇晃解冻，移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。
2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：
方法一：收集细胞，1000RPM，常温条件下离心5分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
曲安西龙泛葡/泛影酰/室椎影/Metrizamide
二（六锑）三腈（五环二烯）铑（III）N-辛酰-N-葡糖/MEGA-8/OMEGA
六钴(II)铁(II)N-壬酰-N-葡萄糖/MEGA-9
4-溴四喃喃葡萄糖苷/N--β-D-喃葡萄糖苷/喃葡萄糖/Decyl-β-D-glucopyranoside
5--2-酰N-酰-N-葡糖/MEGA-10
4-溴-2--频那醇酯4-伞花/4--7-(酰氧)-2H-1-并-2-二盐/4-MUP
Dowex? 50WX2-100离子交换树脂4-伞形-D-葡萄糖苷/4-伞花-β-D-葡糖苷/4-伞型-β-D-葡糖苷/4--2-氧代-2H-1-并喃-7--β-D-葡糖苷/4--7-酰氧香豆素-β-D-葡萄糖苷/MUG
4-氧-2,3-二L-鼠李糖/6-脱氧-L-甘露糖/糖/L-异甜醇/L-(+)-鼠李糖/L(+)-Rhamnose monohydrate
3--4-溴-2-啶D-甘露醇/甘露醇/甘露糖醇/已六醇/木密醇/D-甘露糖醇/D-Mannitol
2-溴-3--4-啶异-β-D-代半乳糖苷/异-β-D-代半乳糖喃糖苷/IPTG
细胞凋亡检测试剂盒Ⅱ(AP)哪家好保泰松酯标准品 Pirbuterol Acetate (AS) CAS65652440
盐酯标准品 Piperidolate Hydrochloride CAS129771
标准品 Pip Phosphate CAS14538568
二盐盐标准品 Pip Dihydrochloride CAS142643
枸椽标准品 Pip Citrate CAS144296
己二盐标准品 Pip Adipate CAS142881
标准品 Pip CAS110850
拉西林标准品 Piperacillin CAS66258762
西他嗪标准品 Piperacetazine CAS3819009
盐格列标准品 Pioglitazone Hydrochloride CAS112529154
心得乐标准品 Pindolol CAS13523869
咪清标准品 Pimozide CAS2062784
盐标准品 Pilocarpine Hydrochloride CAS54717
标准品 Pilocarpine CAS92137
维生素K1标准品 Phytonadione (Vitamin K1) CAS84800
盐多柔比星 进口、国产 DOX 含量BR
盐罗沙星 进口、国产 Lomefloxacinhydrochloride 含量BR，5070%
盐甘叔酯 进口、国产 Glycinetertbutylesterhydrochloride 含量BR，98%
盐甘酯 进口、国产 GlycineethylesterHC1 含量BR，98.5%
盐环胞啶 进口、国产 CycloC 含量试剂级，99%
盐环 进口、国产 Ciprofloxacinhydrochloride 含量BR，500u/mg
盐缓冲 进口、国产 PotassiumchlorideHydrochloricacidBuffersolution 含量BR，98%
盐邻二 进口、国产 OPDHC1 含量BR，98%
盐林肯霉素 进口、国产 Lincomycinhydrochloride 含量BR，150IU/mg
盐 进口、国产 VB1 含量BS
操作步骤(仅供参考)：
1、细胞凋亡检测试剂盒Ⅱ(AP)哪家好贴壁细胞的消化
①吸除培养液，用无菌 PBS、Hanks 液或无血清培养液洗涤细胞一次，以去除残余的血清。
②加入少量 源叶生物 Trypsin-EDTA solution，略盖过细胞即可，室温放置 0.5～2min， 不同的细胞消化时间有所不同。
③显微镜下观察，细胞明显收缩，并且肉眼观察培养器皿底部发现细胞的形态发生明显的变
化；或者用枪吹打细胞发现细胞刚好可以被吹打下来，吸除胰酶细胞消化液。加入含血清的 完全细胞培养液，吹打下细胞，即可直接用于后续实验。
④如果发现消化不足，则加入 Trypsin-EDTA solution 重新消化。
⑤如果发现细胞消化时间过长，未及吹打细胞，细胞已经有部分直接从培养器皿底部脱落， 直接用胰酶细胞培养液把细胞全部吹打下来。1000～2000g 离心 1min，沉淀细胞，尽量去除胰酶细胞消化液后，加入含血清的完全培养液重新悬浮细胞，即可用于后续实验。
2、组织的消化不同的组织需要消化的时间相差很大，通常以消化后可以充分打散组织为宜。
待细胞生长状态良好时，可进行293/HEK-293细胞|细胞冻存。贴壁细胞冻存时，弃去培养基后加入少量胰酶，细胞变圆脱落后，加入约1ml含血清的培养基后加入冻存管中，再添加10%DMSO后进行冻存。悬浮细胞冻存时，应将细胞收集，1000RPM条件下离心4分钟，少量保存上清液(防止细胞吸走)，加入部分新鲜培养基，加入到冻存管中，在冻存管中加入10%DMSO后进行冻存。
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发货周期：1～3天
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试剂盒内容
1.标记缓冲液(LabelingBuffer)1ml
2.末端脱氧核糖核酸转移酶(TdT,×20)20μl
3.DIG-dUTP(×20)20μl
4.封闭液(BlockingReagent)4ml
5.生物素化抗抗体(×100)20μl
6..SABC-AP(×100)20μl
7.ProteinaseK(×200)50μl
8.BCIP/NBT显色剂(×20)0.2ml
9.抗体稀释液4ml
【培养指南】
对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察Ⅱ型肺泡上皮细胞|细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
3. 按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。
4. 将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
【复苏的原则】
产品名称快速融化：必须将冻存在-196℃液氮中的细胞快速融化至37℃，使细胞外冻存时的冰晶迅速融化，避免冰晶缓慢融化时进入细胞形成再结晶，对细胞造成损害。复旦细胞库全国各地均可发货，全国统一价格，本公司出售的所有细胞仅供科研使用。
细胞的种类：
第一种：
是冻存产品，由液氮直接拿出，干冰运输给客户。一般不推荐这种，也较少使用这种方式，因为复苏手法对于细胞状态影响较大，一旦细胞状态不好，很难说是细胞自身不行，还是复苏没操作好；另外温度对细胞、基因功能状态影响很大，也不是细胞储存的zui好方式，快递时间也很难控制，多种因素影响产品的质量；干冰运输需要额外添加400元的运费(顺丰)。
第二种：
是我们复苏好细胞，QC通过后，T-25灌满培养基常温运输给客户，排除复苏造成影响，常温运输也对细胞影响也不大，只需加25元运费(顺丰)。
质量保证：我们的细胞株来源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等，购买到货后，由我们实验室扩增、冻存，冻存的产品全部经过QC检测，100%进口来源，100%保证5代以内，活力>95%，无细菌、真菌、支原体污染。的冻存是细胞培养的基本操作，不同的实验室采用的方法略有差异，但是都会遵循慢冻速溶的宗旨。
细胞培养操作规程：
一．培养基及培养冻存条件准备：
1）准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640：GIBCO，货号21875-091)，90%；优质胎牛血清，10%。
2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。
3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配，液氮储存。
二．细胞处理：
1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于冻存管盖部）摇晃解冻，移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。
2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：
方法一：收集细胞，1000RPM，常温条件下离心5分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
曲安西龙泛葡/泛影酰/室椎影/Metrizamide
二（六锑）三腈（五环二烯）铑（III）N-辛酰-N-葡糖/MEGA-8/OMEGA
六钴(II)铁(II)N-壬酰-N-葡萄糖/MEGA-9
4-溴四喃喃葡萄糖苷/N--β-D-喃葡萄糖苷/喃葡萄糖/Decyl-β-D-glucopyranoside
5--2-酰N-酰-N-葡糖/MEGA-10
4-溴-2--频那醇酯4-伞花/4--7-(酰氧)-2H-1-并-2-二盐/4-MUP
Dowex? 50WX2-100离子交换树脂4-伞形-D-葡萄糖苷/4-伞花-β-D-葡糖苷/4-伞型-β-D-葡糖苷/4--2-氧代-2H-1-并喃-7--β-D-葡糖苷/4--7-酰氧香豆素-β-D-葡萄糖苷/MUG
4-氧-2,3-二L-鼠李糖/6-脱氧-L-甘露糖/糖/L-异甜醇/L-(+)-鼠李糖/L(+)-Rhamnose monohydrate
3--4-溴-2-啶D-甘露醇/甘露醇/甘露糖醇/已六醇/木密醇/D-甘露糖醇/D-Mannitol
2-溴-3--4-啶异-β-D-代半乳糖苷/异-β-D-代半乳糖喃糖苷/IPTG
细胞凋亡检测试剂盒Ⅱ(AP)哪家好保泰松酯标准品 Pirbuterol Acetate (AS) CAS65652440
盐酯标准品 Piperidolate Hydrochloride CAS129771
标准品 Pip Phosphate CAS14538568
二盐盐标准品 Pip Dihydrochloride CAS142643
枸椽标准品 Pip Citrate CAS144296
己二盐标准品 Pip Adipate CAS142881
标准品 Pip CAS110850
拉西林标准品 Piperacillin CAS66258762
西他嗪标准品 Piperacetazine CAS3819009
盐格列标准品 Pioglitazone Hydrochloride CAS112529154
心得乐标准品 Pindolol CAS13523869
咪清标准品 Pimozide CAS2062784
盐标准品 Pilocarpine Hydrochloride CAS54717
标准品 Pilocarpine CAS92137
维生素K1标准品 Phytonadione (Vitamin K1) CAS84800
盐多柔比星 进口、国产 DOX 含量BR
盐罗沙星 进口、国产 Lomefloxacinhydrochloride 含量BR，5070%
盐甘叔酯 进口、国产 Glycinetertbutylesterhydrochloride 含量BR，98%
盐甘酯 进口、国产 GlycineethylesterHC1 含量BR，98.5%
盐环胞啶 进口、国产 CycloC 含量试剂级，99%
盐环 进口、国产 Ciprofloxacinhydrochloride 含量BR，500u/mg
盐缓冲 进口、国产 PotassiumchlorideHydrochloricacidBuffersolution 含量BR，98%
盐邻二 进口、国产 OPDHC1 含量BR，98%
盐林肯霉素 进口、国产 Lincomycinhydrochloride 含量BR，150IU/mg
盐 进口、国产 VB1 含量BS
操作步骤(仅供参考)：
1、细胞凋亡检测试剂盒Ⅱ(AP)哪家好贴壁细胞的消化
①吸除培养液，用无菌 PBS、Hanks 液或无血清培养液洗涤细胞一次，以去除残余的血清。
②加入少量 源叶生物 Trypsin-EDTA solution，略盖过细胞即可，室温放置 0.5～2min， 不同的细胞消化时间有所不同。
③显微镜下观察，细胞明显收缩，并且肉眼观察培养器皿底部发现细胞的形态发生明显的变
化；或者用枪吹打细胞发现细胞刚好可以被吹打下来，吸除胰酶细胞消化液。加入含血清的 完全细胞培养液，吹打下细胞，即可直接用于后续实验。
④如果发现消化不足，则加入 Trypsin-EDTA solution 重新消化。
⑤如果发现细胞消化时间过长，未及吹打细胞，细胞已经有部分直接从培养器皿底部脱落， 直接用胰酶细胞培养液把细胞全部吹打下来。1000～2000g 离心 1min，沉淀细胞，尽量去除胰酶细胞消化液后，加入含血清的完全培养液重新悬浮细胞，即可用于后续实验。
2、组织的消化不同的组织需要消化的时间相差很大，通常以消化后可以充分打散组织为宜。
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文献和实验相关实验
染料，储存液用蒸馏水配成1mg/ml的浓度，使用时用PBS稀释成终浓度为2~5mg/ml。DAPI为半通透性，用于常规固定细胞的染色。储存液用蒸馏水配成1mg/ml的浓度，使用终浓度一般为0.5 ~1mg/ml。 结果评判：细胞凋亡过程中细胞核染色质的形态学改变分为三期：Ⅰ期的细胞核呈波纹状(rippled)或呈折缝样(creased)，部分染色质出现浓缩状态;Ⅱa期细胞核的染色质高度凝聚、边缘化;Ⅱb期的细胞核裂解为碎块，产生凋亡小体(图1）。 3 透射电子显微镜观察
链式酶反应，导致细胞凋亡。 (二)Fas／Apol／CD95与Fas配体 Fas配体(Fas ligand，FasL)属于Ⅱ型膜蛋白，含有胱氨酸富集区(cystein rich domain)，胞外C末端可被蛋白酶解而游离于细胞外介质中。FasL由激活的T细胞合成，可以引起自身细胞死亡(自分泌)，或引起周围靶细胞死亡(旁分泌)，从而调节免疫系统的功能。Fas／CD95的主要作用是介导免疫系统的细胞毒作用，但很多肿瘤细胞含高水平表达的FasL，而Fas／CD95的表达下降。肿瘤
），部分染色质出现浓缩状态；Ⅱa期细胞核的染色质高度凝聚、边缘化；Ⅱb期的细胞核裂解为碎块，产生凋亡小体(图1)。3、透射电子显微镜观察结果评判：凋亡细胞体积变小，细胞质浓缩。凋亡Ⅰ期（pro-apoptosis nuclei）的细胞核内染色质高度盘绕，出现许多称为气穴现象（cavitations）的空泡结构(图2)；Ⅱa期细胞核的染色质高度凝聚、边缘化；细胞凋亡的晚期，细胞核裂解为碎块，产生凋亡小体。二、磷脂酰丝氨酸外翻分析（Annexin V法） 磷脂酰丝氨酸（Phosphatidylserine
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