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Hoechst 33258细胞蓝色荧光染料说明书

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  • 上海研生
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  • 2025年07月08日
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    • 英文名

      Hoechst 33258

    • 保质期

      详见说明书

    • 供应商

      上海研生

    • 保存条件

      低温冷藏

    • 规格

      10mg

    【细胞冻存】
    待细胞生长状态良好时,可进行293/HEK-293细胞|细胞冻存。贴壁细胞冻存时,弃去培养基后加入少量胰酶,细胞变圆脱落后,加入约1ml含血清的培养基后加入冻存管中,再添加10%DMSO后进行冻存。悬浮细胞冻存时,应将细胞收集,1000RPM条件下离心4分钟,少量保存上清液(防止细胞吸走),加入部分新鲜培养基,加入到冻存管中,在冻存管中加入10%DMSO后进行冻存。
    中文名称:Hoechst 33258细胞蓝色荧光染料说明书
    英文名称:Hoechst 33258
    产品规格:10mg

    发货周期:1~3天
    本品Hoechst33258是一种可以穿透细胞膜的蓝色荧光染料,对细胞的毒性较低。

    Hoechst33258染色常用于细胞凋亡检测,染色后用荧光显微镜观察或流式细胞仪检测。Hoechst33258也常用于普通的细胞核染色,或常规的DNA染色。
    Hoechst33258的最大激发波长为346nm,最大发射波长为460nm;Hoechst33258和双链DNA结合后,最大激发波长为352nm,最大发射波长为461nm。
    Hoechst33258溶于水,溶解度可达10mg/ml。用于细胞核染色时,推荐的Hoechst33258工作浓度为0.5-10μg/ml。
    CAS23491-45-4
    分子式C25H24N6O·3HCl
    分子量533.88
    储存条件-20℃避光,有效期一年。
    【培养指南】
    对于贴壁细胞,传代可参考以下方法:
    1. 弃去培养上清,用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
    2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中,置于37℃培养箱中消化1-2分钟,然后在显微镜下观察Ⅱ型肺泡上皮细胞|细胞消化情况,若细胞大部分变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
    3. 按6-8ml/瓶补加培养基,轻轻打匀后吸出,在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀。
    4. 将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
    【复苏的原则】
    产品名称快速融化:必须将冻存在-196℃液氮中的细胞快速融化至37℃,使细胞外冻存时的冰晶迅速融化,避免冰晶缓慢融化时进入细胞形成再结晶,对细胞造成损害。复旦细胞库全国各地均可发货,全国统一价格,本公司出售的所有细胞仅供科研使用。
    细胞的种类:
    第一种:
    是冻存产品,由液氮直接拿出,干冰运输给客户。一般不推荐这种,也较少使用这种方式,因为复苏手法对于细胞状态影响较大,一旦细胞状态不好,很难说是细胞自身不行,还是复苏没操作好;另外温度对细胞、基因功能状态影响很大,也不是细胞储存的zui好方式,快递时间也很难控制,多种因素影响产品的质量;干冰运输需要额外添加400元的运费(顺丰)。
    第二种:
    是我们复苏好细胞,QC通过后,T-25灌满培养基常温运输给客户,排除复苏造成影响,常温运输也对细胞影响也不大,只需加25元运费(顺丰)。
    质量保证:我们的细胞株来源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等,购买到货后,由我们实验室扩增、冻存,冻存的产品全部经过QC检测,100%进口来源,100%保证5代以内,活力>95%,无细菌、真菌、支原体污染。的冻存是细胞培养的基本操作,不同的实验室采用的方法略有差异,但是都会遵循慢冻速溶的宗旨。
    细胞培养操作规程:
    一.培养基及培养冻存条件准备:
    1)准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640:GIBCO,货号21875-091),90%;优质胎牛血清,10%。
    2)培养条件: 气相:空气,95%;二氧化碳,5%。 温度:37℃,培养箱湿度为70%-80%。
    3)冻存液:90%血清,10%DMSO,现用现配,液氮储存。
    二.细胞处理:
    1)复苏细胞:将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于冻存管盖部)摇晃解冻,移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。
    2)细胞传代:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。
    对于悬浮细胞,传代可参考以下方法:
    方法一:收集细胞,1000RPM,常温条件下离心5分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀,将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
     云烟净油化钠//迭氮钠/迭氮化钠/Sodium azide

     云烟浸膏钠/基汞硫代水杨酸钠/硫柳汞酸钠/汞硫水杨酸钠盐/Merthiolate sodium
     氧阿苯达唑基硼化钠/基硼钠/硼化钠/基三化硼钠/(-C)三硼酸钠/Sodium cyanoborohydride
     卡巴匹林钙聚烯酸钠/2-烯酸钠均聚物/PAAS
     阿替洛尔硫代醇酸钠/巯基酸钠/Sodium thioglycolate
     2,4,6-三硝基酚钠/三聚磷酸钠/三磷酸五钠/三磷酸钠/STPP
     N-基-L-苯氨酸磷钨酸钠/Sodium phosphotungstate
     2-萘酰无水磷酸钠/无水磷酸三钠/三碱式磷酸钠/原磷酸三钠/正酸钠/磷酸钠/TSP
     15-150kDa双色预染蛋白Marker原钒酸钠/正钒酸钠/钒酸钠/Sodium orthovanadate
     N-基-L-苯氨酸亚硝基铁化钠/亚硝酰铁化钠/亚硝酰五合铁化钠/硝普钠/SNP
    Hoechst 33258细胞蓝色荧光染料说明书脊髓星形胶质细胞cDNA  规格20mg  Human NO ELISA Kit

    海马趾星形胶质细胞cDNA  规格20mg  Human OxLDL ELISA Kit
    小胶质细胞cDNA  规格20mg  Human Platelet-Derived Growth Factor Soluble Receptor,PDGF sRα ELISA kit
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    表皮角质细胞cDNA  规格20mg  Human PDGF ELISA Kit
    表皮角质细胞-cDNA  规格20mg  Human TRAIL R2(h)ELISA KIT
    表皮色素细胞-浅色素cDNA  规格20mg  Human PAIgG/M/A ELISA Kit
    表皮色素细胞-中色素cDNA  规格20mg  Human PAF ELISA Kit
    表皮色素细胞-深色素cDNA  规格20mg  Thromboxane B2
    真皮成纤维细胞-胎儿cDNA  规格20mg  Human TpP ELISA Kit
    真皮成纤维细胞-新生儿cDNA  规格20mg  Human thrombomodulin ELISA Kit
    真皮成纤维细胞-cDNA  规格20mg  Human Serum amyloid A ELISA Kit
    细胞cDNA  规格20mg  Human heme oxygenase-2 ELISA Kit
    生发基质细胞cDNA  规格20mg  Human heme oxygenase-1 ELISA Kit
    操作步骤(仅供参考):
    1、Hoechst 33258细胞蓝色荧光染料说明书贴壁细胞的消化
    ①吸除培养液,用无菌 PBS、Hanks 液或无血清培养液洗涤细胞一次,以去除残余的血清。
    ②加入少量 源叶生物 Trypsin-EDTA solution,略盖过细胞即可,室温放置 0.5~2min, 不同的细胞消化时间有所不同。
    ③显微镜下观察,细胞明显收缩,并且肉眼观察培养器皿底部发现细胞的形态发生明显的变
    化;或者用枪吹打细胞发现细胞刚好可以被吹打下来,吸除胰酶细胞消化液。加入含血清的  完全细胞培养液,吹打下细胞,即可直接用于后续实验。
    ④如果发现消化不足,则加入 Trypsin-EDTA solution 重新消化。
    ⑤如果发现细胞消化时间过长,未及吹打细胞,细胞已经有部分直接从培养器皿底部脱落, 直接用胰酶细胞培养液把细胞全部吹打下来。1000~2000g 离心 1min,沉淀细胞,尽量去除胰酶细胞消化液后,加入含血清的完全培养液重新悬浮细胞,即可用于后续实验。
    2、组织的消化不同的组织需要消化的时间相差很大,通常以消化后可以充分打散组织为宜。


     

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